SARS康复病人血液抗体基因库建成

以SARS康复病人血液为基础而构建的基因工程单克隆抗体基因库,不久前在上海建成。它将为SARS的诊断治疗发挥重要作用。 该抗体基因库含有大约数百万个不同的抗体基因。目前,研究人员正在对该抗体基因库进行全面筛选,以求早日获得针对SARS表面与核心关键蛋白靶点的单克隆抗体先导物。 据研究人员介绍,利用单克隆抗体先导物可直接进行SARS的早期诊断,在经过一定的生物活性与安全性试验后,单克隆抗体先导物还可用于SARS的预防与治疗,免除目前直接用SARS康复病人的血清治疗SARS可能带来的隐患。     

非肽类SARS冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的设计与活性表征

SARS冠状病毒3CL蛋白酶是SARS病毒复制过程中的主要蛋白酶, 针对其开展药物设计有望得到有效的抗SARS病毒药物. 本文基于SARS冠状病毒3CL蛋白酶的三维结构, 对现有化学试剂及临床用药数据库进行虚拟筛选, 选出可能对SARS冠状病毒3CL蛋白酶有抑制的非肽化合物进行初步活性测试, 并研究了已知的人鼻病毒3C蛋白酶抑制剂对SARS冠状病毒3CL蛋白酶的活性, 合成了两种母环的衍生物, 得到靛红和哌嗪两类SARS冠状病毒3CL蛋白酶的抑制剂, 其中一个靛红类化合物的IC₅₀为0.76 µmol•L^－1; 而抗组胺药哌嗪类化合物对SARS冠状病毒3CL蛋白酶及细胞培育的SARS病毒的抑制作用, 提示了老药可以开发出新的用途.     

我国科学家成功解析SARS冠状病毒蛋白酶三维结构

中国科学家成功解析了SARS冠状病毒主要蛋白酶的三维结构,这是世界上首次解析出SARS冠状病毒蛋白酶的晶体结构。SARS病毒蛋白酶的解析成功,对于SARS的防治具有重要的意义。不久前,美国科学院报(PNAS)发表了这一成果的论文,并向国际媒体公布了这一消息。 SARS疫情暴发流行后,清华大学饶子和研究组即对SARS病毒进行攻关,并在2003年7月2日成功解析。     

我国SARS疫苗研制取得突破

我国SARS冠状病毒灭活疫苗的研制工作又迈过一道“门槛”:灵长类动物感染模型已经取得突破性进展,两项灭活疫苗研究已完成实验室制备,免疫灵长类动物实验进展比较顺利。 实验表明,用SARS冠状病毒灭活疫苗免疫的猴子,在注射后只出现体温轻微升高,未见其它临床、病理、生化指标异常,也未检出灭活疫苗的病毒活性。各项指标表明,此灭活疫苗是安全的。同时,免疫后的猴子体内产生厂SARS冠     

聚糖的合成及其在糖疫苗研究中的应用

糖类在各种生命活动过程中发挥着重要的作用,但聚糖的获得性问题和其相对较弱的免疫原性一直限制了糖化学生物学尤其是糖疫苗研究的发展.近年来,聚糖和糖复合物化学合成技术的进步很大程度上促进了糖疫苗(包括抗菌疫苗、抗肿瘤疫苗、抗HIV疫苗等)研究的兴盛.其中,寡糖一釜合成策略和固相合成策略大大提高了聚糖合成的效率;聚糖与载体蛋白偶联的复合物也成功提高了糖抗原的免疫原性.本文将结合本课题组的相关研究工作,简述糖类化合物化学合成的方法和策略方面的研究进展及其在糖疫苗研究中的应用,希望对更好地理解糖化学生物学特别是糖疫苗有所帮助.     

SARS病毒蛋白水解酶的三维结构模建及可能的小肽抑制剂研究

SARS病毒作为一种正链病毒 (Positive stranded RNA virus) ,其传播复制起重要作用的是其内部的 E蛋白、S蛋白、M蛋白、N蛋白、RNA聚合蛋白和蛋白水解酶 (Proteinase)等 6种蛋白质 .其中蛋白水解酶与 SARS病毒的复制密切相关 ,是抗 SARS病毒药物筛选的理想靶点 ,而它的三级结构则是研究病毒机理和进行药物设计的基础 .我们采用生物信息学的方法 ,利用 NCBI和 EBI提供在线蛋白质序列相似搜索工具 Blast和 FASTA3 ,找到同源性为 43 .791 %的 1 L VO(PDB编号 ) [1] ,并在 SiliconGranphics工作站上利用 Insight 的 Homology…     

六钼酸盐有机胺杂化衍生物与SARS-CoV 3CLpro相互作用的分子动力学模拟

采用分子动力学模拟方法, 在分子水平上探讨六钼酸盐有机杂化衍生物潜在的抗SARS病毒活性. 3CLpro主蛋白酶是冠状病毒复制和转录过程中起关键作用的功能蛋白, 因此采用SARS-CoV 3CLpro作为靶标进行抗SARS病毒的药物设计. 使用Insight II软件包中的Biopolymer, Discover 3, Profile-3D和Affinity等模块, 研究 POMs/3CLpro相互作用的结合位点和作用性质. 研究其能量变化规律, 探讨了多酸化合物对SARS病毒可能的抑制机理. 研究结果表明, POMs与3CLpro在酶的催化活性位点处有较强的结合力. 形成的复合物主要以静电相互作用相结合, 氢键相互作用对复合物的相对稳定性有一定影响. 对于POMs/3CLpro复合物, 有机胺基团取代的POMs所带负电荷比未取代体系的高, 比3CLpro的结合能更高, 这与POMs的相关量子化学计算结果吻合.     

科学家开发新型结核病疫苗

结核病正在全球"卷土重来",但1921年发明的卡介苗目前仍是人类的唯一疫苗。这种疫苗预防儿童结核病十分有效,但对肺结核尤其成人肺结核效果有限。研究人员近日说,他们开发的一种新型结核病疫苗,可增强由卡介苗引发的人体免疫力,有望改变预防肺结核的不利局面。加拿大麦克马斯特大学的邢周教授等在美国《科学-转化医学》上报告说,他们利用一种基因改良过的感冒病毒制造出新型结核病疫苗,可帮助对抗引起肺结核的结核杆菌。不过,这种疫苗并不会取代卡介苗,而是设计成在接种卡介苗后使用,提高卡介苗的功效。     

高分子纳微球在工程疫苗中的新应用

随着新发、突发重大传染病以及恶性肿瘤等疾病防控需求的增加,以经验开发为主的传统疫苗体系亟待更新.高分子纳微球因其独特的理化优势,成为生物医药递送领域研究和关注的焦点.但是如何对纳微球体系进行合理化设计和工程化整合是疫苗递送系统开发中遇到的重要挑战.本团队20年来在高分子纳微球制备和应用方面进行了系统性研究,并提出纳微球为"底盘"(Chassis)和亚单位疫苗共组装成先进疫苗的策略,发现和创制了高分子纳微球新功能,阐明了其在细胞/黏膜免疫中的重要作用机理.本专论结合国内外研究现状,围绕上述研究工作,介绍了工程化疫苗底盘按需设计的思路和参考机制,同时也探讨了其在生物医药领域的发展前景.     

Synthesis and Biological Evaluation of Quinolinone Compounds as SARS CoV 3CL^pro Inhibitors

SARS CoV 3CL^pro is known to be a promising target for development of therapeutic agents against the severe acute respiratory syndrome （SARS）. A quinolinone compound 1 was selected via virtual screening, and it was syn- thetized and tested for enzymatic inhibition in vitro. Compound 1 showed potent inhibitory activity （ICs0= 0.44 μmol/L） toward SARS CoV 3CL^pro. Further work on a series of quinolinone derivatives resulted in the discovery of the most potent compound 23, inhibiting SARS CoV 3CL^pro with an IC50 of 36.86 μmol/L. The structure-activity relationships were also discussed.     

液相色谱-质谱联用方法用于严重急性呼吸系统综合症冠状病毒结构蛋白质的研究

通过高效液相反相色谱、毛细管反相色谱-串联质谱联用方法对SARS病毒攻击细胞的研究,鉴定出了N、S和M3种SARS结构蛋白质,并准确测定了N蛋白质的分子量。由分子量结果和生物信息学推断的N蛋白质的理论分子量比较,可以确定N蛋白质不存在常见的磷酸化修饰和糖基化修饰或含量很低。进一步的研究表明：N蛋白质可能存在降解现象,其降解机理尚需探索。另外,通过对样品直接酶切后进行两维毛细管分离和串联质谱鉴定与对样品先进行分离,然后再进行毛细管反相分离-串联质谱鉴定方法比较,表明两种方法在蛋白质组学研究中各具优缺点,可根据不同目的选择使用。     

新型SARS-CoV 3CL蛋白酶荧光多肽底物的设计、制备及其酶动力学研究

以邻氨基苯甲酸（Abz）为荧光发射基团、2，4-二硝基苯基乙二胺（rdanp）为荧光猝灭基团，设计合成了SARS，CoV3CL蛋白酶的新型荧光多肽底物：H2N-E（Eddnp）STLQSGLK（Abz）-CONH2．用液相色谱-质谱（LC—MS）联用技术进行了表征，表明该多肽底物能被SAILS-CoV 3CL蛋白酶识别，并在QS之间被专一性酶解．另外，利用该多肽底物的荧光共振能量转移（FRET）特性，对SARS—CoV 3CL蛋白酶的酶解动力学性质进行了研究，结果表明，此荧光多肽底物可以作为荧光探针，应用于SARS—CoV 3CL蛋白酶活性的测定及其抑制剂的筛选．     

探索“甜蜜”疫苗的抗癌之路——基于合成寡糖的癌症免疫治疗

疫苗是人类与疾病斗争的有力武器。由于特征性糖蛋白和糖脂结构在恶性肿瘤细胞表面过度表达,肿瘤相关糖抗原可用于合成癌症候选疫苗。近年来,通过多步合成得到的寡糖-蛋白缀合物逐步进入临床实验。本文将重点介绍国际上研究工作的最新进展,包括候选疫苗分子的设计思路、寡糖抗原的结构与合成、疫苗载体蛋白、疫苗辅剂等。本文还将讨论寡糖合成,疫苗分子组成及临床前实验中面临的困难和可能的解决方案。     

SARS 3CL蛋白酶同源二聚化与底物结合互为别构调控因素

研究了严重急性呼吸系统综合症(SARS)冠状病毒3C-Like蛋白酶(3CLpro)在存在底物或抑制剂时的二聚体形成情况. 通过测定酶活性随酶浓度的变化, 拟合出在底物存在下酶二聚体的解离常数约为0.94 μmol·L-1, 小于纯蛋白酶的二聚体解离常数(14.0 μmol·L-1), 表明底物对二聚体的形成具有增强作用. 选用与底物具有类似结合方式的靛红类抑制剂N-萘甲基靛红-5-甲酰胺(5f), 利用超速离心沉降速率方法定量测定了SARS 3CL蛋白酶单体和二聚体在不同浓度5f时的含量, 发现5f同样具有诱导二聚体形成的能力. 在3 μmol·L-1蛋白酶浓度下测定得到诱导二聚的EC50 值(半数有效浓度)约为1 μmol·L-1, 说明二聚体中只有一个单体与抑制剂结合. 研究结果表明, 随着底物浓度的升高, SARS 3CL蛋白酶会形成更多的二聚体, 而二聚体含量的提高又反过来提高酶的活性, 这种双向别构调控机制有可能是病毒用来调控多聚蛋白水解速率和组装时机的一种方法.     

检测SARS－CoV－2的电化学生物传感器研究进展

电化学传感器因具有灵敏、便携、稳健性高、小型化、成本低、无需前处理、检测快速等优点,在严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS－CoV－2）检测领域受到广泛关注。该文介绍了致病菌SARS－CoV－2的组成部分,综述了基于病毒表面的刺突蛋白、病毒内部核衣壳蛋白和核糖核酸（RNA） 3种可特异性检测SARS－CoV－2的电化学生物传感器的研究进展,并对比了3种类型电化学生物传感器的检出限、检测时间、动态监测范围等关键参数。同时与其他检测SARS－CoV－2的方法进行对比,分析了电化学生物传感器的优劣势;最后指出了未来可通过优化检测电极材料及反应条件、修饰检测探针等方面提升电化学生物传感器性能,以实现对新型冠状病毒肺炎（COVID－19）患者的早发现、早隔离及早治疗,同时为设计现场快速诊断COVID－19设备提供有力支撑。     

我国首个人兽共患病重点实验室成立

我国首个人兽共患病预防与控制重点实验室2月18日在吉林省长春市成立,它将在高致病性禽流感、SARS、狂犬病、口蹄疫等人兽共患病的预防和控制方面起到积极作用。据介绍,该实验室由军事医学科学院军事兽医研究所建立,拥有包括中国工程院院士在内的一批科研力量,以及高效液相色谱-质谱联用仪、流式细胞仪等先进设备,主要从事目前在我国具有危害性的高致病性禽流感、SARS、狂犬病、口蹄疫、布氏杆菌病、出血性大肠杆菌O157感染、流行性出血热、黑热病等人兽共患病研究。(仪器信息网)我国首个人兽共患病重点实验室成立     

SARS CoV内对照RNA病毒样颗粒的构建和表达

在SARS-CoV的核酸检测方法中,由于普遍缺乏安全、稳定、特异的内对照,而不能对样品处理、反转录、扩增以及定量检测实施全程监控。构建的病毒样核蛋白颗粒内对照,能够对SARS-CoV临床检测实施监控。本文通过克隆1.7Kb大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒经过突变产生的270bp内对照片断,并将这些基因连接到载体pTrc99a上表达,进行纯化、定量分析、RT-PCR检测和稳定性试验。获得SARS内对照病毒样核蛋白颗粒,在人血清和SM缓冲液中37℃稳定性可达到30天,能抵抗核糖核酸酶降解。将内对照颗粒加入临床样本中一同检测,能够对检测的全过程(样品处理、反转录和PCR)有效进行监控,与SARS-CoV没有交叉反应。研究表明制备的该病毒样核蛋白颗粒稳定、安全、可靠,可作为SARS冠状病毒RT-PCR检测、定量分析的有效内对照参考品。     

体积排阻色谱法定量检测9种型别人乳头瘤病毒原液中病毒样颗粒

据统计,5％以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致.HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生.例如,9价HPV疫苗可有效预防90％以上HPV相关癌前病变.人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原.VLP由360份衣壳蛋白L1组成.VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫...     

核酸靶分子与苦参中生物碱成分的非共价作用研究

本文选择合成了与SARS病毒相关的DNA片段作为抗病毒药物筛选的靶分子.利用生物质谱技术,通过对该核酸分子与常见中药苦参中的两种主要生物碱成分的非共价复合作用的研究,探讨该方法作为药物筛选方法的可行性.     

液相色谱-串联质谱法测定百日咳和百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素

百日咳杆菌气管细胞毒素（TCT）是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度，但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实验优化了包括色谱柱类型和流动相组成在内的TCT色谱条件。虽然TCT在反相色谱模式和亲水作用色谱（HILIC）模式下均具有较好的保留，但HILIC模式与蛋白质沉淀的前处理方法兼容性更好，因此采用HILIC模式分离TCT。优化所得的方法具有较宽的线性范围（5.76~369 ng/L），良好的重复性（峰面积的相对标准偏差不大于3.9%），各种基质中均有较好的回收率（96.4%~102.5%），且定量限是药典要求的TCT最高限量的1/1279。将本方法用于共纯化百日咳疫苗、组分百日咳疫苗、共纯化无细胞百白破疫苗和组分无细胞百白破疫苗中TCT的检测，所有产品均未检出TCT，表明被检样品具有较好的工艺条件可避免TCT在产品中的残留。