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1.
在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸(PO-ODNs)及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸(PS-ODNs)药物“癌泰得”系列样品(18~20 mers)进行分离,并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响。其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用,而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度。结果表明,采用未涂层弹性石英毛细管(50 μm,总长49.0 cm,有效长度40.7 cm),以50 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸(pH 2.24)-7 mol/L尿素为缓冲溶液,压力进样(2 kPa×10 s),负极进样,正极检测,在分离电压20 kV、柱温25 ℃、检测波长260 nm条件下,可实现寡核苷酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离。PO-ODNs的18~19 mers及19~20 mers样品的平均分离度分别为4.68,3.20;PS-ODNs的18~19 mers及19~20 mers样品的平均分离度分别为1.23及0.81。该法操作简单,重现性好,可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴。 相似文献
2.
毛细管凝胶电泳法测定血浆中的癌泰得 总被引:1,自引:0,他引:1
为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法。样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量。结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5~400 mg/L(r=0.9998),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398%~2.46%、2.75%~6.07%,回收率为99.53%~102.1%。毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性。 相似文献
3.
采用两步固相萃取(SPE)法结合无胶筛分毛细管电泳(NGCE)技术建立了猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得的定量分析方法。优化并确定了SPE的相关条件(阴离子交换柱,上样缓冲液pH值为9.0,上样体积及洗脱体积分别为5 mL和3 mL)和NGCE的分析条件(灌胶时间为30 min,分离电压为24 kV)。在优化的条件下,猕猴血浆中癌泰得在1.95~250 mg/L范围内呈良好的线性关系,定量限(LOQ)为1.95 mg/L。批内准确度为93.38%~100.71%,批内相对标准偏差<11%;批间准确度为89.46%~103.46%,批间相对标准偏差<9%。在不同条件(室温下存放4 h; 4 ℃下存放24 h;反复冻融(-80 ℃至室温)2次;-80 ℃下保存1个月)下癌泰得在猕猴血浆中的稳定性良好。已将该方法成功地应用于癌泰得的猕猴药代动力学研究。 相似文献
4.
为了进行硫代反义寡核苷酸药物FT19的质量控制研究,建立了用阴离子交换高效液相色谱(AX-HPLC)和毛细管凝胶电泳(CGE)分析自行合成的FT19有关物质的方法。设计合成了FT19的硫代不完全序列(P=O)1和短序列(n-x)并将它们作为已知杂质。在AX-HPLC上,使用的分析柱为DNA Pac PA-100 (4 mm×250 mm);流动相A为10 mmol/L NaOH-0.1 mol/L NaCl,流动相B为10 mmol/L NaOH-3 mol/L NaCl;梯度洗脱条件为流动相B液在8 min内从60%升至100%;流速1 mL/min;柱温40 ℃;检测波长为260 nm。CGE所用毛细管规格为内径100 μm,总长度为31 cm,有效长度为20 cm;电泳缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸-7 mol/L尿素,pH 8.5;采用电动进样,进样电压-10 kV;分离胶为250 g/L的聚丙烯酰胺;检测波长为254 nm。结果表明,FT19与硫代不完全的(P=O)1序列在AX-HPLC上能够达到基线分离,与短序列(n-1)在CGE上能达到基线分离。说明AX-HPLC和CGE联合应用能够很好地分析FT19中的有关物质。 相似文献
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毛细管区带电泳法测定板蓝根注射液中四种核苷的含量 总被引:6,自引:1,他引:6
采用毛细管区带电泳法测定了板蓝根注射液中胞苷、腺苷、鸟苷和尿苷的含量。电泳条件:采用未涂层石英毛细管(32.5 cm×50 μm i.d.,有效长度23.5 cm),以60 mmol/L硼砂溶液-10%(体积分数)异丙醇-20%(体积分数)乙腈为运行缓冲液,在25 ℃下以20 kV恒压电泳分离,压力进样 (1 kPa×10 s),检测波长254 nm。对电泳条件各因素进行了讨论,如缓冲液的种类、浓度和pH值,有机改性剂的种类和浓度,分离电压和毛细管温度等。样品经0.45 μm微孔滤膜过滤后直接进样;采用外 相似文献
6.
采用在线扫集-胶束毛细管电动色谱法(sweeping-MEKC)分离测定扛板归中的阿魏酸、咖啡酸和原儿茶酸。采用未涂层熔融石英毛细管(50 cm×50μm,有效柱长36 cm);环境温度25℃;缓冲体系为20 mmol/L NaH2PO4-80mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)-12.5%乙腈(V/V)(pH 2.20),紫外检测波长为216 nm,运行分离电压-20 kV,进样时间100 s。在优化条件下,3种有机酸均在20 min内出峰,峰面积RSD均小于5%。检出限分别达到98.52,118.73和27.27μg/L。 相似文献
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9.
运用大体积进样-逆电渗流堆积-毛细管区带电泳分离测定了厚朴酚、绿原酸和咖啡酸。采用未涂层熔融石英毛细管(50 cm×50μm i.d.,有效柱长36 cm)分离;紫外检测波长为220 nm,运行缓冲液为40mmol/L四硼酸钠-20 mmol/L磷酸氢二钠(pH 9.0),分离电压16 kV,电动进样电压-12 kV,进样时间356s时达到最佳的分离效果。在优化条件下,上述3种化合物均在20 min内出峰,峰面积的RSD均小于4%。检出限分别为184.2、36.07、77.99 ng/L。将该法用于清肝利胆口服液中厚朴酚、绿原酸和咖啡酸的分离测定,结果满意。 相似文献
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气相色谱法分离和测定3种植物内源激素 总被引:12,自引:0,他引:12
应用大口径毛细管气相色谱法,以正二十二烷为内标物,对植物组织中的吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)等3种内源激素进行了测定。结果表明:IAA,ABA和GA的最低检测限依次为0.16,0.08和0.48mgL,相对标准偏差均小于3.0%,平均回收率为88.4%~92.2%。方法简便、灵敏、准确、重现性好。 相似文献
12.
以甲氧苄氨嘧啶为内标,采用胶束电动毛细管色谱法分离测定了新药消糖灵中的优降糖。电泳条件:以25 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸钠(pH 9.0)为电泳介质,未涂层石英毛细管(50 μm i.d.×39.5 cm,有效分离长度34.8 cm)为分离通道,压力进样(68.95 kPa.s),17 kV恒压电泳(28 ℃),检测波长228 nm。优降糖在14 min内与其他成分得到很好分离,且质量浓度为25 mg/L~275 mg/L时,优降糖可进行定量分析,加标回收率为(100.6±1.4)%。方法简便、快速,结果准确,重现性好,可用于优降糖复方制剂的质量控制。 相似文献
13.
An improved ion-pair reversed phase LC (IP-RP-LC) method was developed using triethylammonium/hexafluoroisopropanol (TEA/HFIP) buffer as the mobile phase as an alternative to capillary gel electrophoresis (CGE) and ion-exchange chromatography (IEC) for routine quality control of the synthetic 20-mer phosphorothioate oligonucleotide (PS-ODN) Cantide. The most commonly observed impurities included an oligomer with a deletion at the 5′-end (5′n-1) and a monophosphodiester (P=S/O). The method described here was sufficiently selective to simultaneously separate and identify these impurities. To the best of our knowledge, this is the first report on the separation of P=S/O analogs from PS-ODN using IP-RP-LC. Relatively high TEA concentrations and higher pH values were recommended. The separation performance was maintained even in the presence of multiple P=S/O fragments containing different PO residues. The method was successfully applied to the analysis of failure sequences of authentic crude Cantide as well as the purified product. In addition to 5′n-1 and P=S/O analogs, some minor impurities such as 3′n-1 oligomers were also partially resolved. 相似文献
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银黄冲剂中黄芩甙和绿原酸的毛细管电泳分离分析 总被引:8,自引:0,他引:8
摘要:用毛细管电泳法分离并测定了银黄冲剂中黄芩甙和绿原酸。以对硝基苯甲酸为内标,未涂层融硅毛细管(50μmi.d.,370μmo.d.,总长47cm,有效分离长度40cm)为分离通道,25mmol/L硼砂缓冲液(pH8.5)为电泳介质,17kPa·s压力进样,25kV恒压电泳,310nm检测。黄芩甙和绿原酸线性范围分别为160~960mg/L(r=0.9993,RSD=1.76%~2.33%)和80~960mg/L(r=0.9989,RSD=1.07%~2.51%),加入回收率:黄芩甙为(102.09±1 相似文献
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建立了消毒剂中活性成分醋酸氯己定(又名:醋酸洗必泰)的毛细管电泳快速检测法。采用15 mmol/L磷酸盐-乙腈(
体积比为60∶40)缓冲体系,将醋酸氯己定在50 cm×75 μm i.d.的石英毛细管柱中进行电泳分离,电泳电压为15 kV,检
测波长为254 nm。同时,对毛细管电泳分析醋酸氯己定的条件(如缓冲液的种类、pH值、浓度及电泳电压等)进行了优化
。用该方法对消毒剂样品进行测定,在4 min内可完成分析。醋酸氯己定在质量浓度为0.01~0.10 g/L时线性良好,检测
限为0.004
mg/L,吸光度值的相对标准偏差为3.97%,迁移时间的相对标准偏差为2.99%,样品加标回收率为91.4%~116.6%。将该方法
与高效液相色谱法进行比较,两种方法测定结果的相对误差≤4%。所建立的检测醋酸氯己定含量的毛细管区带电泳法简单
、快速,适用于消毒剂样品的测定。 相似文献