一种新的烟草钙调素结合蛋白的分离鉴定

用^35S标记的钙调素(^35S-CaM)作探针，从烟草cDNA文库中筛选到一个cDNA克隆pTCB40．DNA测序表明，分离的cDNA片段具有的开放阅读框编码233个氨基酸的多肽链．所编码钙调素结合蛋白TCB40(CaM—binding protein，CaMBP)与离子通道蛋白的同源性高达81％．凝胶覆盖实验结果证明其表达的蛋白具有依赖Ca^2 的钙调素结合活性。缺失分析表明钙调素结合位点于其蛋白的C端。Northern blot分析发现，TCB40在烟草茎，叶和花中均表达，但在叶中的表达量明显高于其他器官。     

烟草脱外壁花粉的制备

烟草脱外壁花粉的制备夏惠君，周嫦，杨弘远（武汉大学生命科学学院，武汉，４３００７２）关键词脱外壁花粉，制备，烟草中图法分类号Ｑ９４４．４２花粉粒由外壁、内壁与原生质体３部分组成．有关花粉生物学的研究已有报道［‘·‘ｊ．近年来，花粉原生质体的研究也取得...     

西瓜、苦瓜与罗汉果染色体的rDNA定位及其核型分析

利用荧光原位杂交技术将45SrDNA和5SrDNA定位在了葫芦科的3种作物：西瓜（Citrullus lanatus）、苦瓜（Momordica charantia L。）与罗汉果（Siraitia grosvenorii（Swingle）C。Jeffrey）的中期染色体上，并对它们进行了基于rDNA定位结果的核型分析。3种作物的杂交结果显示西瓜和苦瓜均具有2对45SrDNA位点，一对5SrDNA位点。罗汉果具有3对45SrDNA位点和一对5SrDNA位点。通过比较染色体组中rDNA分布的情况，对葫芦科几种植物种间的亲缘关系、罗汉果的分类等进行了分析和讨论。     

不同细胞质雄性不育小麦中依赖钙/钙调素 的蛋白激酶的SDS-PAGE电泳图谱分析

以几种新型细胞质雄性不育型小麦为材料,对分蘖期小麦叶片中的依赖钙/钙调素的蛋白激酶(Ca2+/CaM-PK)的SDS-PAGE电泳图谱进行了分析,实验结果表明,不育系与保持系的蛋白激酶酶带之间存在差别,并且不育系之间也有差别,说明不育细胞质对核基因的表达也有影响,这可能与雄性不育有关,而且不育材料中存在潜在优势,可用来选育具有更强优势组合的核质杂种.     

钾离子在烟草梗丝上的吸附性能

通过静态吸附实验,研究了K^＋在烟草叶梗上的吸附性能,考察了粒径大小、pH值、温度、K^＋浓度、阴离子、共存物质等诸因素对吸附的影响。结果表明,粒径大小、pH值、温度、K^＋浓度、阴离子、共存物质对吸附均有明显影响;吸附热力学过程可用Freundlich等温吸附模型描述。     

水涝胁迫对烟草理化特性和几种次生代谢产物的影响

为明确水涝胁迫对烟草的影响,本文以K326烤烟为实验材料,对其进行不同天数水涝胁迫,然后采用分光光度法测定了烟叶中的可溶性糖、抗氧化酶活性等生理生化指标,以及总酚、总黄酮和总生物碱含量,高效液相色谱法进一步检测了6种酚类化合物。结果表明:随着水涝时间的延长,烟叶中的脯氨酸(0.006～0.043mg·g-1)和可溶性糖(14.19～36.36mg·g-1)含量上升,总叶绿素(1.33～0.66mg·g-1)、叶绿素a(0.97～0.47mg·g-1)、叶绿素b(0.37～0.17mg·g-1)、可溶性蛋白(0.003 7～0.001 5mg·g-1)含量以及超氧化物歧化酶（SOD）(179.82～138.04U·g-1)活性下降,丙二醛（MDA）含量先上升后下降,(10.23～19.70～13.45nmol·g-1),于第5天达到最大值19.70nmol·g-1。过氧化物酶（POD）(18.15～30.12～13.33U·g-1)、过氧化氢酶（CAT）活性(0.65～1.07～0.17U·g-1)均先上升后下降;总酚(1.97～3.76mg·g-1)、总生物碱(0.32～1.87mg·g-1)含量上升,总黄酮含量无显著变化。在胁迫过程中没食子酸含量从0.048mg·g-1下降到0.014mg·g-1,芦丁、绿原酸、咖啡酸含量分别从0.008 4,0.34,0.01mg·g-1增加到0.043,3.087,0.085mg·g-1。表儿茶素和原儿茶酸含量变化不显著。研究结果为水涝对烟草的伤害机制及烟草抵抗水涝胁迫的应答机制提供理论依据。     

影响硒在烟草上吸附的因素

采用静态法研究Se（Ⅳ）在烟草上的吸附,考察了吸附达到平衡的时间和温度、pH值、表面活性剂及无机盐对吸附的影响,测定了吸附等温线。结果表明Se（Ⅳ）在烟草上的吸附为多分子层吸附,吸附速率快,且易解吸,使用表面活性剂能增大Se（Ⅳ）的吸附量,吸附过程受温度、pH值的影响不大,但无机盐存在对吸附的影响很大。     

烟草对甘油的吸附

研究了水溶液中两种不同粒径的烟草对甘油的吸附作用。测定了两种不同粒径烟草在不同温度下的吸附等温线。考察了温度、酸度和乙醇对吸附的影响。结果表明：在稀溶液中吸附甘油符合Langmuir模型；烟草对甘油的吸附具有吸附速度快，温度影响小的特点。     

转入γIFN基因烟草的初步研究

以ＴＡ克隆法构建中间载体ＰＵＣＦ１,再构建γ干扰素基因表达载体ＰＢＩＦ１。通过农村菌转化导入烟草叶圆片外植体。经４轮梯度卡那霉素递增筛选,获得抗性植株。经ＰＣＲ证实其中部分植株已将人γ干扰素基因片段整合到烟草基因组中,从而为成功地建立烟草植物反应器生产人γ干扰素基因奠定了基础。     

转菊芋凝集素基因烟草对桃蚜的抗虫性研究

研究了菊芋凝集素基因(hta)对同翅目害虫的抗性。4个同源的hta基因置于CaMV35S启动子和nos终止子的控制下，通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法被转入烟草。Southern杂交显示，外源hta被整合到转化烟草的基因组中。Northern杂交表明hta mRNA在转基因烟草中进行了表达。利用桃蚜进行的抗虫试验表明，转基因烟草对桃蚜具有抗性。同对照植株相比，T0代转基因烟草使桃蚜的平均虫头数下降70％．在T0代转基因烟草中，转hta-b和hta-c基因烟草对桃蚜繁殖的抑制率分别为53．0％、64．6％，同时，对桃蚜若虫的发育具有明显的抑制作用。     

一个在水稻胚胎中差异表达基因的分离鉴定

通过筛选水稻开花后48～50h的原胚和120～122h的分化胚的cDNA文库,得到一个在胚胎发育过程中表达有差异的克隆,命名为OsEES,测序结果显示OsEES含有一个预测的亚精氨合成酶结构域,编码一个大小约38×103(pI6.5)的蛋白.同时RNA原位杂交的结果显示开花48～50h的原胚中的信号强度明显大于开花120～122h的分化胚,表明OsEES可能在水稻胚胎发生过程中起到一定的调控作用.     

MYC基因在人类HL－60和CEM癌细胞系中原位表达的研究

以细胞分子原位杂交方法对两种不同类型的人类白血细胞系ＨＬ－６０和ＣＥＭ，以及正常人白细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行了比较研究．结果证明：ＨＬ－６０细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因有异常高水平的表达，而在ＣＥＭ细胞和正常人白血球与淋巴细胞中则没有明显的Ｃ－ｍｙｃ转录产物．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析表明，ＨＬ－６０细胞基因组中Ｃ－ｍｙｃ基因有显著的扩增现象；而ＣＥＭ细胞基因组中的Ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数与正常人血细胞的接近，属正常水平表达。再次证明了ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃ基因的异常高水平表达，与该基因的大量扩增紧密相关．还对两种癌细胞系的癌变机理和细胞原位杂交在基因表达研究中的应用进行了讨论．     

表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建

将以PRVgG为启动子，SV40plyA为加尾信号的CSFV E2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒（PRV）tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2.5,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列，构建了携带CSF E2基因的转移载体pTKE2。免疫荧光检测证实，转染BHK21细胞pTKE2在感染PRV的情况下，能表达E2蛋白，采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒，对酶切位点进行改造，将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点，构建了利用PRV gG启动子和HCMV IE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达，两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2.EFP.将双基因转移载体pTKE2.GFP转染BHK21细胞中，12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达，表达的GFP不引起细胞毒性。     

水稻间期核、粗线期和有丝分裂中期染色体FISH分辨率的比较

利用水稻第 4染色体上的两个BAC(bacterialartificialchromosome)克隆作为探针 ,对水稻间期核、减数分裂染色体和有丝分裂中期染色体进行了荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH) 结果表明 ,它们的杂交信号在水稻第 4染色体短臂上 ,有丝分裂中期染色体上两信号完全重叠 ,而在早粗线期染色体上可以分开 已知它们间的遗传距离为 2cM ,在粗线期染色体上两信号点彼此邻近但未重叠 ,两信号点中心的物理距离为 0 .36μm ,在间期核上两个信号点完全分开 ,相距 (2 .0 6± 1.15 ) μm 说明在水稻第 4染色体上 ,减数分裂粗线期FISH可以分辨相距约 2cM的两个标记 讨论了水稻减数分裂粗线期染色体FISH的技术及其优越性     

HCVNS4基因在大肠杆菌中表达及蛋白质提纯

应用PCR方法扩增出人丙型肝炎病毒全长NS4基因的DNA片段,克隆入表达载体pQE32并转化E.coliJM109.经IPTG诱导表达出42×l03蛋白.利用Ni-NTA-agarose纯化得到纯化产物,Western-blot鉴定该蛋白能够与抗NS4的单克隆抗体发生特异性反应.     

突变型绿色荧光蛋白基因在昆虫细胞和幼虫中的表达

用细菌—杆状病毒穿梭系统（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）将一套含有绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐＳ６５Ｔ）和完整多角体蛋白基因的表达盒转座到ＡｃＮＰＶ－Ｂａｃｍｉｄ的Ｔｎ７转座接受位点,从而构建出一种带有ｇｆｐ基因和完整多角体基因的重组杆状病毒,用这一重组病毒感染细胞能稳定地形成多角体,并在紫外光照射下产生强烈的绿色荧光,以重组病毒感染粉纹夜蛾（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉ）幼虫后,在阳光下即可看到发射绿色荧光的幼虫,在手提式长波紫外光照射下绿色荧光更为强烈,带绿色荧光的幼虫在昆虫生态学和杆状病毒流行病学等研究领域有广泛的用途     

新城疫病毒HB 92株M基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)无毒耐热株(HB92株)M基因，将其克隆于pGEM-T载体，并进行了序列测定和分析．结果显示，测定的M基因长1223个核苷酸。包含一个1095个核苷酸的开放阅读框(ORF)，编码364个氨基酸．与已报道的10株NDVM基因比较，核苷酸同源性为88．4％～95．8％，氨基酸同源性为89．8％～95．3％。HB92株与V4株M基因核苷酸的同源性最高(达95．8％)．NDVM蛋白分子中有9对碱性氨基酸。在多肽的第117～120位有一个含4个氨基酸CKKS的特征性结构．这些结果为揭示NDV HB92株的分子生物学背景，了解NDV的分子进化和遗传变异机理，进而开发利用HB92株奠定了基础，也为将NDV另列为副粘病毒亚科的一个新属提供了理论支持．     

HPGMR叶片中Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶的初步研究

以 HPGMR农垦 5 8S为材料 ,研究了光周期处理前、后 Ca2 /Ca M依赖性蛋白激酶 (Ca2 /Ca M- PK)活性及其酶谱特征 .结果表明 :随着幼穗的发育 ,Ca2 /Ca M- PK活性均有提高 ,并且长日照和自然日照条件下的酶活提高程度大大高出短日照处理 .不同时期、不同处理的 Ca2 /Ca M- PK酶谱带数未见明显差异 ,但在总体上 ,不育植株 (L D和 ND)的酶带弱于可育植株 (SD)