牛血清白蛋白与槲皮素在不同溶剂中相互作用特征及抗氧化性的研究

槲皮素与牛血清白蛋白的相互作用机理以及影响因素的研究对于生物活性小分子与生物大分子的相互作用方式及其功能改变具有一定理论和实际意义。运用荧光光谱、紫外可见光谱、同步荧光光谱、自由基清除方法(DPPH和ABTS自由基清除率),研究了牛血清白蛋白与槲皮素在水、二甲基亚砜和乙醇三种不同溶剂中的相互作用方式及其对槲皮素抗氧化性的影响。结果表明：槲皮素对牛血清白蛋白有较强的荧光猝灭作用,且为静态与动态并存的复合猝灭方式,相互作用力为疏水作用力。三种溶剂中,牛血清白蛋白与槲皮素的结合常数和结合位点数由大到小依次为：水＞二甲基亚砜＞乙醇,结合距离由大到小依次为：乙醇＞二甲基亚砜＞水。根据结合距离的大小可知,结合作用由强到弱依次为：水＞二甲基亚砜＞乙醇。在三种溶剂中牛血清白蛋白的酪氨酸和色氨酸残基同时参与与槲皮素的相互作用。未结合及结合牛血清白蛋白的槲皮素与DPPH自由基清除率均为30%,未结合及结合牛血清白蛋白的槲皮素与ABTS自由基清除率相比,由80%显著降低到70%。三种溶剂对未结合及结合牛血清白蛋白的槲皮素的自由基清除能力无显著性影响。     

臧红T-Fenton体系荧光光谱法测定黄山贡菊/金菊的抗氧化活性

臧红T能产生特征荧光,其激发波长和发射波长分别为264nm和577nm.酸性介质中,Fenton体系(H2O2-Fe2+)产生的羟自由基能氧化臧红T使其荧光猝灭,而许多花茶的提取物可部分清除溶液中的羟自由基使其荧光猝灭程度降低,据此建立了一种测定黄山贡菊和金菊的抗氧化活性的新方法.本实验采用单因素实验法,对羟自由基体系...     

荧光法研究山莓叶提取物清除羟自由基的活性

在稀硫酸介质中,荧光染料亮绿(LGSF)在312nm处产生荧光,Fenton反应产生的.OH与亮绿反应,使其荧光猝灭。根据此原理,荧光光度法测定山莓叶不同萃取物清除自由基活性存在很大差异。同时,当提取物浓度达到0.40mg/mL时自由基清除率分别可达到27.34%,38.65%,40.22%,41.68%,其中,山莓叶正丁醇萃取物清除羟自由基活性最强。本研究为山莓叶的合理开发利用提供理论依据。     

光谱法研究抗癌药物槲皮素和人血清白蛋白的相互作用

研究槲皮素与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,以阐明槲皮素在体内的运输过程。利用荧光光谱和紫外吸收光谱进行实验,采用Stern-Volmer方程,Lineweaver-Burk双倒数方程和双对数回归曲线模型处理实验数据,求出了不同温度下槲皮素与HSA的结合常数、结合位点数和相关热力学参数。随槲皮素浓度的增大,HSA在210nm和280nm处的紫外吸收峰增强,HSA的内源荧光强度被猝灭。槲皮素和HSA作用后形成了新的复合物,静态猝灭是槲皮素对HSA荧光猝灭的主要原因。不同模型得到的结合常数和热力学参数有所不同,都表明槲皮素和HSA二者之间具有较强的作用力,其相互作用是自发进行的。抗癌药物槲皮素是可以被HSA所储存和运输的。     

异烟肼与超氧化物歧化酶相互作用的光谱

利用紫外吸收光谱法和荧光光谱法研究了异烟肼(NH)与铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)的结合作用。结果表明,NH与Cu-ZnSOD的结合行为使Cu-ZnSOD的内源荧光猝灭。通过猝灭常数、结合常数和结合位点的计算,证明荧光猝灭机理符合静态机制;NH和Cu-ZnSOD形成了1∶1稳定复合物,且复合物的形成不影响酶的活力。NH本身具有一定的超氧负离子清除能力。考察不同温度下的猝灭作用,进一步证实结合作用主要受范德华力和氢键驱动。     

光谱法研究抗氧化剂、DPPH与人血清蛋白三元体系的作用

选取几种天然抗氧化剂杨梅素、桑色素、辣椒碱、甜菜碱作为研究对象,运用荧光光谱法、同步荧光光谱法以及三维荧光光谱法研究了几种抗氧化剂以及DPPH自由基与人血清蛋白相互作用,结果表明辣椒碱、甜菜碱、V_C不与人血清蛋白发生猝灭反应,杨梅素、桑色素、DPPH均能够与人血清蛋白发生猝灭反,反应均为形成了稳定复合物而导致的静态猝灭,通过疏水作用力与HSA结合,结合位点数均为1,主要结合位点在色氨酸基团附近,DPPH与人血清蛋白猝灭过程改变了人血清蛋白结构的疏水性,引起蛋白质构象发生变化,而杨梅素、桑色素与人血清蛋白相互作用未造成其构象发生了变化。运用荧光光谱法研究了几种抗氧化剂抑制DPPH直接损伤人血清蛋白的能力,杨梅素、桑色素、辣椒碱、甜菜碱、V_C对DPPH损伤HSA的抑制率分别为25%,18.30%,85.38%,4.02%和84.58%。根据分子结构分析辣椒碱主要通过清除DPPH自由基作用从而抑制其损伤人血清蛋白,根据二元体系反应结果可知杨梅素与桑色素三元体系反应过程中两种抗氧化剂与DPPH竞争结合位点,因此杨梅素、桑色素主要通过占据结合位点的方式抑制DPPH损伤人血清蛋白,而甜菜碱既不能占据结合位点也不能清除自由基,因而抑制能力最弱。分析表明几种天然抗氧化剂的抑制能力与其分子结构中主要官能团结构密切相关。     

用清除羟自由基法评价竹叶提取物抗氧化能力

进行了Fe2+与邻二氮菲生成红色配合物的吸收光谱,抗氧化剂TBHQ及竹叶提取物样品对清除羟自由基能力的研究。分光光度法测定抗氧化剂清除羟自由基能力的测定波长为509.1 nm。以IC₅₀值(清除率为50%时,抗氧化剂的浓度值)作为评价抗氧化剂清除羟自由基能力的指标,测得合成抗氧化剂和效果最好竹叶提取物样品IC₅₀值分别为0.040(TBHQ),0.378(M20),0.323(M40),0.334(M60),M20, M40, M60等竹叶提取物可以作为天然抗氧化剂进行开发。     

信阳红、绿茶提取物的抗氧化能力

以信阳红、绿茶为原料,水和95％的乙醇为提取溶剂,考察提取物对羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（·O2-）的清除作用.结果显示,两种溶剂红、绿茶提取物对两种自由基均有显著地清除作用,且红、绿茶水提取物对两种自由基的清除能力均高于乙醇提取物,两种溶剂红茶提取物对羟自由基（·OH）清除能力大于绿茶,绿茶乙醇提取物对超氧阴离子自由基（·O2-）清除能力大于红茶.     

甘青铁线莲花不同溶剂提取物的抗氧化性比较

采用邻二氮菲-Fe²⁺氧化法,邻苯三酚自氧化法以及卵黄脂蛋白不饱和脂肪酸（PUFA）过氧化体系,对甘青铁线莲花乙醚提取物、甲醇提取物、乙醇提取物和槲皮素的抗氧化活性进行测定和比较。结果表明,甘青铁线莲花不同溶剂提取物对不同的自由基清除作用差异较大。与槲皮素相比较,各提取物对超氧阴离子自由基（·O₂^-）清除的强弱为:槲皮素>乙醚提取物>乙醇提取物>甲醇提取物。对于羟基自由基（·OH）的清除能力乙醚提取物优于其他2种提取物,但低于槲皮素,对抑制卵黄脂蛋白脂质过氧化（LPO）作用的大小依次为乙醇提取物>槲皮素>乙醚提取物>甲醇提取物。因此,不同溶剂的提取物均具有一定的抗氧化性,其中乙醚提取物对几种自由基的清除作用相对较好,三种提取物对脂质过氧化物作用抑制最强,可以作为潜在的天然抗氧化剂开发利用。     

电化学发光猝灭法测定蜂胶中黄酮总效价

蜂胶具有抗菌、抑制病毒、调节机体免疫力、抵抗类毒素以及清除氧自由基等临床药理作用,其中所含有的黄酮化合物是一类重要的中药药效成分,可有效清除体内自由基。关于蜂胶中黄酮类化合物的测定迄今未见有理想的方法。文章在碘催化的鲁米诺电化学发光的基础上,利用黄酮化合物对碘自由基的清除作用,研究了一种电化学发光猝灭法测定蜂胶中黄酮总效价的分析方法,该方法简便快捷、灵敏度高,可望用于蜂胶产品的质量鉴定。     

臭牡丹黄酮类化合物提取及其抗氧化作用

研究臭牡丹中黄酮类化合物的最佳提取工艺条件及其抗氧化活性.以提取时间、料液比、提取温度、乙醇体积分数为主要影响因素,以黄酮类化合物提取率为考察指标,确定最佳提取工艺条件,并通过对亚硝酸盐、超氧阴离子自由基、羟自由基的清除效果及对猪油的抗氧化研究其抗氧化活性.结果表明,臭牡丹中黄酮类化合物的最佳提取工艺条件为提取时间2.0h、料液比1∶40（g/mL）、提取温度70℃、乙醇体积分数70％的条件下提取效果最好,臭牡丹中黄酮类化合物在各抗氧化体系中均表现出较强的抗氧化活性,且其作用具有剂量效应关系,其抗氧化活性均强于维生素C.     

ESR study on scavenging effect of nicotine on free radicals

Smokers have less risk to catch degenerative diseases such as Alzheimer’s disease and Parkinson’s disease that are both correlated with enhanced oxidative stress. The scavenging effect of nicotine on free radicals was investigated by electron spin resonance techniques. It was found that the scavenging effect of nicotine on hydroxyl radicals and superoxide free radicals was higher than that of vitamin C. It was also found that nicotine could scavenge free radicals in gas-phase cigarette smoke. The data indicate that nicotine may be a potential antioxidant.     

葡萄籽中多酚类物质对氧自由基清除作用的ESR研究

用ESR自旋捕集技术研究了从葡萄籽分离的单体、二聚体和三聚体等多酚类物质对羟基自由基和超氧阴离子的精除作用,并与化学发光法的测定结果进行了比较,得到了较一致的结果,证明葡萄籽中多酚类物质对氧自由基的确有较好的清除作用,这很可能是喝少量葡萄酒有利于身体健康的原因.     

新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基

研究了肉苁蓉多糖体外抗氧化活性。以抗坏血酸为对照,以类Fenton反应产生羟自由基,多巴胺自氧化反应产生超氧阴离子自由基,次氯酸钠与过氧化氢反应产生单线态氧、二苯代苦味肼基自由基为实验模型,采用紫外-可见分光光度法和化学发光分析法,首次测定新疆肉苁蓉多糖对超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH.自由基（二苯代苦味肼基自由基）、单线态氧的清除作用。结果表明：新疆肉苁蓉多糖对上述自由基均有明显清除作用,且清除作用与多糖浓度呈正相关性。     

贯众多糖提取及其抗氧化作用

采用水提-醇沉法从贯众中提取多糖,脱脂、去蛋白,经冷冻干燥后得到粗多糖。通过比色法研究其体外清除羟基自由基能力。贯众多糖具有较好的清除.OH的能力,且其清除能力与多糖浓度有明显的量效关系。清除50%羟基自由基所需要的多糖浓度为3.9m g/mL。     

升麻多糖提取及其抗氧化作用

研究了升麻多糖的提取及其对羟基自由基的清除作用.采用热水浸提及醇沉法从升麻中提取多糖,通过比色法研究其清除羟基自由基的能力.升麻多糖清除能力与多糖浓度有明显的量效关系,清除50％羟基自由基所需要的多糖浓度为2.4mg/mL,结果表明升麻多糖具有良好的清除羟基自由基的能力.     

A Comparative Study of the Effect of Exogenous and Endogenous Photostabilizers on Lens Crystallin Photodegradation

The purpose of the present study was to determine in vitro the effect of sodium azide, ethanol, trans--carotene, and the reduced form of glutathione on phototransformations in the lens crystallin. These photostabilizers show a specific affinity for different kinds of free radicals. The water-soluble protein from the cortical part of the eye was irradiated with doses of UV C ranging from 0 to 4.07 J/cm². Changes in the structure of the crystallins have been monitored by steady-state absorption and fluorescence spectroscopy. Irradiation of dialyzed samples of these proteins at a wavelength of 254 nm (1.13 ± 0.02 mW/cm²) caused photooxidation of aromatic residues; the crystallin solutions became opaque and turbid. The samples displayed increasing attenuance at a wavelength of 280 nm as photodamage proceeded. The fluorescence of tryptophan at 333 nm systematically decreased and a new band between 400 and 500 nm appeared during the UV C irradiation. Our results show that the antioxidants can protect proteins from UV C-induced photodegradation and the protective effect is significantly dependent on their concentration in the protein solution. There are no dramatic differences in the rates of exogenous and endogenous scavenging of generated free radicals for all concentrations used, with rate constants varying by a factor no greater than 2. The mechanism and the rate of scavenging or quenching are dependent on the nature of the radical species and the photostabilizer structure. Although this study provides evidence for free radical scavenging and protein protection, extrapolations to possible antioxidant effects in vivo must be made cautiously.     

电子顺磁共振法(EPR)对银杏叶提取物及其卷烟捕获自由基能力研究

自由基存在于人体和卷烟烟气中,会引起人体病理反应和氧化损伤,种类和形态多样,如：O-·₂,HO·,R·,RO·,ROO·。电子顺磁共振法(EPR)是检测和定量分析自由基的重要方法之一。银杏叶提取物(EGB)是由黄酮、内酯、原花青素类成分组成的植物药,具有较好清除自由基和抗氧化能力。本文以槲皮素、芦丁、原花青素等化合物为对照,运用EPR法结合自旋捕集技术研究EGB和EGB卷烟对DPPH,HO·,O2-·、烟气气相自由基、烟气粒相自由基的抑制水平。结果表明,EGB能够有效抑制化学/生物系统和卷烟烟气产生的自由基。尽管抑制自由基整体水平比黄酮单体和原花青素弱,但EGB提取方法简单容易得到,可作为天然抗氧化剂和自由基清除剂用于食品和烟草等行业。EPR法灵敏度高,稳定性好,是用于自由基研究的可靠方法。捕集剂DEPMPO捕集O2-·更加高效,PBN捕集烟气气相自由基比DMPO更有优势。该研究讨论了EGB清除自由基的机理,丰富的酚羟基结构是其抗氧化作用的主要原因。     

Quenching of Long Lifetime Emitting Fluorophores with Paramagnetic Molecules

In this work, we have studied quenching of the fluorescence of two well-known oxygen probes, 1-pyrene butyric acid (PBA) and tris(2,2’-bipyridine)ruthenium ([Ru(bpy)₃]²⁺) by reactive oxygen species (superoxide anion, nitric oxide derivative, hydrogen peroxide) and by the O₂ molecule. Both, time-resolved and steady state fluorescence measurements were performed in solution (ethanol, dimethyl sufoxide, water) and in micelles of Sodium Dodecyl Sulfate that serve as a model for membrane-containing biological structures. We have found that only the free radicals and O₂ can actively quench for the two probes, but not the diamagnetic H₂O₂. Our data correspond to the classical Stern–Volmer equation. H₂O₂ has an effect only at high molar concentrations (>0.1 M). In contrast, effective concentrations of free radicals and O₂ that lead to quenching are in millimolar range. In conclusion, our methods allows for detecting global ROS that are small free radicals without interference from the reactive hydroxyl radical. Our data suggest that the method can be used for the quantification of ROS in individual living cells based on the measurement of fluorescence lifetime of those probes.