猪源嗜麦芽窄食单胞菌的分离鉴定与耐药性研究

从临床上疑似嗜麦芽窄食单胞菌感染的病猪,进行病原分离、生化鉴定、特异性PCR鉴定和耐药性试验。结果获得了猪源嗜麦芽窄食单胞菌分离株20个．其中16株来源于病猪的呼吸系统;该菌对大多数抗生素具有耐药性且呈现多重耐药性．对复方新诺明最敏感。本研究从病原学角度证实猪嗜麦芽窄食单胞菌的临床感染并对临床用药有指导意义。     

土壤产几丁质酶菌株的筛选鉴定及产酶条件

利用几丁质为碳源,从土壤中筛选出3株产几丁质酶菌株,其中酶活最高的为一株革兰氏阴性菌.对该菌株应用16S rDNA法进行鉴定,结果为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).通过单因素优化法和均匀设计法实验,结果表明,以质量分数0.5%的胶体几丁质为碳源,质量分数1.0%的蛋白胨为氮源,及30℃和pH值为7.2,发酵60 h的条件是菌株的最合适产酶条件.此时,胞外几丁质酶酶活力最高.     

海洋弧菌Z010产生几丁质酶的发酵条件研究

以海洋弧菌Ｚ０１０菌株为对象,研究了其产生几丁质酶的发酵条件。研究表明,其产酶的最佳发酵条件为：２２１６Ｅ液体培养基中含０．５％（ｗ／ｖ）的胶体几丁质,０．５％（ｗ／ｖ）的蛋白胨,培养起始ｐＨ值为７．０,２５℃摇床２００ｒ／ｍｉｎ培养３６ｈ,几丁质酶产出最大。     

嗜麦芽黄单胞菌CG样受体跨膜域克隆与分析

根据已知生物LH/CG受体同源性较大的跨膜域序列设计引物，以嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，将约600bp目的产物克隆到pUCm-T载体上，经酶切及PCR扩增筛选鉴定得到重组质粒pUCm-Rec，以DIG标记的PCR扩增片段作为探针进行DNA斑点杂交，确证目的PCR扩增片段与该菌染色体DNA有同源性，克隆到的593bpCG样受体跨膜域序列在GenBank中的注册号为AY355346，再以地高辛标记的593bp跨膜域序列为探针，从构建的该菌基因组文库中，筛选到可能与CG样受体属于同一跨膜受体家族的编码组氨酸激酶／效应调节杂合蛋白部分序列的685bp核酸片段(其在GenBank中的注册号为AY359445)。     

海洋链霉菌产生几丁质酶的研究

从闽南地区潮间带红树林根际海泥中分离到能产生几丁质酶(Chitinase)的放线菌(Actinomyces)300余株,研究了各种诱导物、碳氮源及培养条件对链霉菌S-128(Streptomyces sp.S-128)菌株几丁质酶生物合成的影响,结果表明,该菌株几丁质酶的合成能被多种几丁质所诱导,是一种诱导酶,添加氮源尤其是有机氢源能促进酶的合成,而碳源却没有这种作用,基本培养基中加入2.O％脱矿质几丁质和1.5％玉米浆,在28℃发酵5d,发酵液的几丁质酶活性可达290u/ml,该酶对几丁质的水解反应显出较宽的pH范围(pH3～8)和较好的pH稳定性,最适pH5.0,在一定的温度范围内,该酶的活性随温度的上升而增高,并以65℃的酶活性最高。     

胶体几丁质诱导红曲霉产几丁质酶的研究

本文采用胶体几丁质为底物,研究了红曲霉液态发酵产几丁质酶.研究结果表明:胶体几丁质的添加能有效诱导红曲霉合成几丁质酶.在培养基中添加0.8%(W/V)胶体几丁质的同时,添加0.4%(W/V)葡萄糖,有利于红曲霉的生长以及几丁质酶的合成,发酵48h几丁质酶活力达到最高的0.3504U/mL.     

嗜麦芽寡养单胞菌菌株间羟基化烟碱类杀虫剂吡虫啉的机制差异

嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia CGMCC1.1788,R551-3和K279a菌株均具有羟基化烟碱类杀虫剂吡虫啉IMI的能力,其中CGMCC1．1788菌株的羟基化能力明显高于其他两个菌株．细胞色素P450酶抑制剂胡椒基丁醚抑制CGMCC1,1788菌株的IMI羟基化活性,但不抑制R551-3和K279a菌株的IMI羟基化活性;黄素单加氧酶抑制剂甲硫咪唑均抑制3个菌株的IMI羟基化活性．上述结果表明在S．maltophilaCGMCC1．1788中存在细胞色素P450和黄素单加氧酶催化的两种IMI羟基化机制．R5513和K279a蛋白组比较分析表明,K279a菌株中没有细胞色素P450酶,其催化的IMI羟基化只有黄素单加氧酶参与．由此可见,不同S．maltophilia菌株中具有不同的IMI羟基化机制．该研究对于了解IMI的羟基化机制有一定的理论意义．     

嗜水气单胞菌发酵条件的优化研究

研究了嗜水气单胞菌的最佳培养条件,通过单因子实验得到该菌株的最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为大豆蛋白胨,初始pH值为7.5,最适生长温度和时间为28℃、36h,最佳氯化钠浓度为6.84mg/mL;在其他培养条件不变的情况下,通过对大豆蛋白胨、葡萄糖、K2HPO4浓度、初始pH值做四因子三水平的正交实验,得到培养基最佳组合为:葡萄糖10 g/L、大豆蛋白胨10 g/L、K2HPO44.56mg/mL、初始pH值7.5.研究结果为嗜水气单胞菌规模化发酵培养奠定了基础.     

中华鳖嗜水气单胞菌的生物学特性

以T3菌株为代表菌株对中华鳖嗜水气单胞菌的生物学特性进行初步研究。对中华鳖嗜水气单胞菌的培养特性比较发现：本菌在鲜血琼脂和TSA固体培养基上生长较好,在TSB液体培养基和BHI液体培养基中生长较好;测定中华鳖嗜水气单胞菌在TSB液体培养基中的生长曲线表明：培养16～20h活菌数达到最高峰,24h后活菌数大幅下降,这一生长规律为中华鳖嗜水气单胞菌的大规模培养奠定了基础;中华鳖嗜水气单胞菌在生理盐水、磷酸盐缓冲液和TSB液体培基中4℃保存的存活曲线表明：本菌在以上介质中前期不易死亡,后期死亡较快。并利用分光光度计测定法解决了该菌即时计数的问题,为中华鳖嗜水气单胞菌的动物实验的开展奠定了基础,本研究测定了该菌对中华幼鳖和银鲫的致病性,其LD50分别为8．40×10^8CFU和8．63×10^8CFU．     

几丁质酶的结构特征与功能

几丁质酶在各种生物中起着非常重要的生理作用.最近几年,在哺乳动物中发现多种几丁质酶及类几丁质酶蛋白,它们在免疫炎症反应中起着非常重要的作用.本文综述了人几丁质酶Chitotriosidase和AMCase以及类几丁质酶YKL39,YKL40和Oviductins的结构特征与功能特点,探讨它们与相关疾病的关系.并阐述了它们之间的进化关系.     

嗜麦芽糖寡养单胞菌H002对铀的生物吸附

为处理铀元素造成的大规模水体污染,本研究拟采取生物治理的策略,以微生物吸附的方法来达到去除铀污染的目的.本实验从142株具有辐射抗性的细菌分离物中,筛选并鉴定到一株对重金属铀具有高度耐受能力的菌株H002;经16s rRNA和生理生化鉴定,确定H002属于嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).通过不同参数条件下的吸附实验表明,该菌在TGY培养基中培养12 h的细胞,对铀的吸附量最大;其中细胞表面的羧基参与铀的吸附;此外,不同阴、阳离子和表面活性剂会影响H002细胞对铀的吸附,其中十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate)可以促进对铀的吸附,而高浓度CO22-和HCO3-离子则抑制铀的吸附.本研究最终得到了一株具有铀耐受能力并能吸附铀的菌株H002,具有作为清除铀污染生物材料的潜力.     

一株耐镍寡养单胞菌的分离及鉴定

从福建某五金厂综合污水中筛选到一株对Ni2+耐受性400 mg/L的菌株,对其形态学、16S r DNA序列及生理生化特征进行分析,并利用较佳生长条件对所得菌株进行Ni2+吸附验证.结果表明:该菌为革兰氏阴性杆菌,在牛肉膏蛋白胨培养基上形成的菌落,表面较光滑,边缘整齐;经16S r DNA序列比对及生理生化特征的分析,将菌株JMUZJ-1鉴定为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.);菌株JMUZJ-1生长的较好条件是p H 7.0,温度30℃,Na Cl质量分数0.5%,在该条件下,菌株对Ni2+表现出良好的吸附性能.     

花生几丁质酶的纯化及酶学性质研究

本课题利用亲和色谱和凝胶过滤色谱法从花生种子中分离得到了几丁质酶.经SDS-PAGE鉴定,该酶蛋白已达电泳纯,分子量约34.4 kD.在还原和非还原状态下均显示单一区带,表明其为单体蛋白.此外,通过等电聚焦法可测得该酶等电点为5.1.而酶学性质的相关研究则表明:该酶最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

嗜麦芽糖寡氧单胞菌H002的基因组分析及对铀胁迫的转录组响应

为探究嗜麦芽糖寡氧单胞菌H002响应金属铀冲击的分子机制及生物修复铀污染的潜力,本研究从基因组和转录组两个层面进行了分析.基因组测序结果表明,H002基因组大小为5 099 056 bp,预测编码4780个蛋白;与其他6个近缘菌株相比,H002拥有344个独特的编码基因,涉及膜转运、细胞运动和分泌等功能.转录组分析显示,在铀胁迫的早期(1 h),差异基因主要富集于细胞运动、分泌、蛋白质和肽聚糖合成等KEGG途径.部分分泌通道相关基因的表达下调,可降低细胞对铀离子的摄取,进而减轻铀离子对细胞的毒性.在铀胁迫的后期(2 h和4 h),参与铀生物矿化的磷酸酶相关基因和能够提供还原电子的细胞色素c基因的表达上调,能以主动方式降低铀的细胞毒性.     

嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)R551-3四环素抗性消除的研究

嗜麦芽寡养单胞菌可共代谢降解烟碱类农药吡虫啉,并且对多种抗生素具有抗性.本文通过电穿孔法消除了该菌的四环素抗性,获得了四环素敏感型菌株R551-3Tcr-,可以用作遗传转化系统的受体菌,能被转化吸收遗传载体质粒pJB866H::ndhSL,构成一对很好的嗜麦芽寡养单胞菌遗传转化系统.同时HPLC结果表明所获得的四环素敏感型菌株羟基化吡虫啉的活性并未发生改变,为进一步开展敲除和回补共代谢途径关键酶的研究工作奠定了基础.     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶研究

用纯化的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肝胰腺(hepatopancreas)几丁质酶,研究了酶的抑制剂,酶活力受Fe3+、Hg2+、Ag+强烈抑制,SDS低浓度时有激活作用,EDTA对酶影响不大,证明该酶不需金属离子.对酶作用方式的探讨证明该酶为内切酶,对不同N-乙酰化度几丁质的水解速度差异很大.     

Physiological Study of Stenotrophomonas maltophilia DHHJ in Feather Biodegradation:Structural Remodeling of Cell Surface and Dynamic Change in Kerastinase Activity

Poultry industry produces a vast amount of feather waste annually, which forms a burden for environment protection.However, feathers are valuable bio-resources with high keratinaceous protein content and can be converted into more valuable materials through some approaches such as biodegradation by microorganism-derived keratinases. The characters of keratinases in microorganisms remain largely undetermined. In this study,it is reported that the morphological change of cell surface and the activities of intracellular and extracellular keratinases in Stenotrophomonas maltophilia( S. maltophilia) DHHJ. S. maltophilia DHHJ was cultured on lysogeny broth( LB) and feather broth(FB) through fermenter technology,and ultrastructure of cell and keratinase activity including extracellular and intracellular enzyme were observed respectively. Ultrastructural change on the cell surface was only observed for the bacteria cultured on FB medium,but not on LB,suggesting that the change could be induced by feather keratin. Therefore, the results showed that extracellular keratinase is a kind of induction enzyme while intracellular keratinase is a kind of constitute enzyme in S. maltophilia DHHJ.     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶分离纯化及部分性质

报道罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)经抽提,再生几丁质亲和层析,Sephadex G-100凝胶过滤,CM－Sephadex C-25凝胶离子交换层析,获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,SDS－聚丙酰胺凝胶电泳法测得其分子量约为38kDa,等电聚焦测得其等电点为5.7,该酶的最适pH值为4,在pH3.0-8.0间表现稳定。最适温度55℃,高于65℃稳定性降低。     

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)几丁质酶基因克隆的筛选及序列分析

用改进方法提取粘质沙雷氏菌染色体DNA.通过PCR扩增,得到几丁质酶(chiA)基因,利用pUC19质粒构建了含有chiA基因的克隆载体 ,并转化E.coli DH5α.经测序分析,证明克隆片段与文献报道基本相同,仅在第437位碱基由C变为T.