动物磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶研究进展

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶是在哺乳动物中发现的第二种含硒酶,它不只是一种保护质膜的抗氧化酶,现在认为PHGPx具有多种功能。本文主要从该酶的结构特点、基因表达及其调控与它的生物学功能三个方面介绍其研究进展。     

谷胱甘肽过氧化物酶的研究

本文从组织细胞学分布、分子结构、分离纯化、酶学特性、硒的生物学作用诸方面,对谷胱甘肽过氧化物酶的现况予以综述,同时也阐明了该酶的生物学作用及应用前景.     

拟南芥膜蛋白GPX3的原核表达及纯化

本文从哥伦比亚生态型的拟南芥(Arabidopsis thaliana Columbia 0)中克隆了谷胱甘肽过氧化物酶AtGPX3的完整编码序列(Coding sequence,CDS)以及部分片段的CDS序列,构建了该基因的不同区域的表达载体,在Transetta(DE3)的BL21大肠杆菌中表达,并成功纯化了GPX3膜蛋白,不仅为后续实验研究GPX3的结构与功能提供了材料,而且为研究膜蛋白表达与纯化的方法提供了借鉴.     

萝卜过氧化物酶的稳定性研究

本文研究了在不同pH、温度条件下,从萝卜中提取的过氧化物酶的稳定性.结果表明,萝卜过氧化物酶具有较好的热稳定性和较好的pH值稳定性,其作用最适pH值为4.8,最适温度为60℃.     

人谷胱甘肽过氧化物酶的生物信息学分析

目的应用生物信息学技术,全面了解人谷胱甘肽过氧化物酶(Human Glutathione Peroxidase,h GPx)蛋白家族的理化性质、结构及功能.方法以NCBI中报道的h GPx家族8个成员为研究对象,利用Prot Param,Net NGlyc,Net OGlyc,Net Phos,SOPMA,Clustal W,Pymol,MEGA 5.05等多种生物信息学软件,分别对其分子量、等电点、亲水性、糖基化、磷酸化和结构等方面进行分析,并建立其分子系统进化树.结果通过比对发现:h GPx超家族8个成员的物理性质存在明显差异,而在结构及功能上存在相似特征.结论 h GPx是一类具有明确酶活性的硒蛋白,具有清除体内过量的ROS、保护机体免受氧化损伤的作用.     

酵母中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的分析

分解H2O2和有机过氧化物的含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GSH-Px)活性和只分解有机过氧化物的不含硒谷胱甘肽过氧化物酶(non-Se-GSH-Px)活性都存在于酵母中.酵母在无氧的条件下培养,Se-GSH-Px活性减弱,non-Se-GSH-Px活性增强;在含有H2O2或CuSO4的培养基中生长,两种形式的谷胱甘肽过氧化物酶的活性均增加;在含硒的培养基中生长,只有Se-GSH-Px活性增加.实验结果表明,GSH-Px在酵母抗氧化作用中起着重要的作用.     

银杏叶提取物对小鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响

建立了灌服银杏叶提取物的小鼠的适量游泳和力竭游泳实验模型,测其血液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力.结果表明,灌服银杏叶提取物的小鼠的GSH-Px活力显著高于各自的对照组,因此,服用银杏叶提取物可减轻运动所产生的内源自由基O     

重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质

肝素酶Ⅰ（HeparinaseⅠ,HepⅠ）是一种多糖裂解酶,可特异性裂解硫酸肝素分子中糖苷键以制备低分子质量肝素（LMWH）。由于重组肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中表达时极易形成包涵体,将肝素酶Ⅰ基因的N端融合谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签,在大肠杆菌中进行低温表达。结果显示,约90%的GST-HepⅠ融合蛋白以可溶性形式...     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

胃癌细胞中硒分布,含量与谷胱甘肽过氧化物酶的关系...

通过电镜放射自显影,原子吸收光谱法分析硒在胃癌细胞中的分布和含量,光谱法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶活性,结果表明亚硒酸钠主要作用于胃癌细胞的线粒体和细胞核,对线粒体DNA,细胞核DNA的复制和基因表达均有一定的作用,在亚硒酸钠处理的胃癌细胞中,随着硒含量的提高,谷胱甘肽过氧化物酶活性也提高,从而阻止了线粒体中的脂质过氧化反应,使线粒体结构与功能恢复正常。     

人穿孔素羧基端肽段的表达纯化与活性鉴定

穿孔素,即成孔蛋白（pore forming protein,PFP),其溶细胞作用与免疫调节和自身免疫病以及其它多种疾病过程中的免疫性病理损伤相关。为得到足够量的PFP建立与之相关的免疫学研究手段用于基础和临床研究,在已克隆人PFP cDNA的基础上,用基因工程方法表达了人PFP C端124个氨基酸肽段（hPFP-C),并通过谷胱甘肽琼脂糖新和层析获得纯化的GST/hPFP-C融合蛋白,经凝血酶酶切和再次北极和层析去除GST部分,得到了纯化的hPFP-C蛋白。纯化的hPFP-C蛋白与兔红细胞共育,呈现钙依赖的溶血活性。     

幽门螺杆菌重组VacA蛋白的表达、纯化和鉴定

建立从幽门螺杆菌空泡毒素A(VacA)原核表达系统pET32a-vacA-E.coliBL21DE3中,表达、纯化和鉴定重组空泡毒素A(rVacA)蛋白的方法.采用不同浓度的IPTG(0.1、0.5和1.0 mmol.L-1)诱导原核表达系统表达rVacA,10%SDS-PAGE检测表达产量,Ni-NTA亲和层析法纯化rVacA,采用HPLC检测其纯度,Western-blotting进行免疫学鉴定.从已构建的VacA原核表达系统中成功表达和纯化了rVacA蛋白,产量约占细菌总蛋白的28.4%,纯度为82.3%.为后续进一步研究该蛋白的生物活性和相关检测试剂盒奠定基础.     

人CDK4基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性

将人CDK4基因克隆入原核表达载体pET28a（+）中, 经 酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28a-CDK4, 转化E.coliBL21(DE3)后获得表达菌株. 该表达菌株经IPTG诱导后, 高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白, 表达量占菌体总蛋白的52.6%, 包涵体经过洗涤、 尿素变性溶解、 His Trap HP Kit柱纯化、 稀释复性, 获得纯度达98%以上的蛋白. SDS-PAGE及Western blot分析表明, 在分子量34 000处有一特异性蛋白条带. 结果表明, 已成功的表达和纯化纯度达98%的重组人CDK4蛋白.     

Selenium-dependent glutathione peroxidasesA highlight of the role of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase in protection against oxidative damage

Since the discovery that selenium is an integral component of the active site of the mammalian glutathione peroxidase, four members of the glutathione peroxidase family have been characterised: classical cellular glutathione peroxidase, gastrointestinal glutathione peroxidase; plasma glutathione peroxidase and phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase ( PHGPx) . They are products of different genes and have different specificities on hydrogen peroxide and lipid hydroperoxides, the latter are generated by free radicals and can damage cell membranes and disrupt cellular functions. Interestingly, PHGPx is not only active on phospholipid hydroperoxide, but also active on thymine hydroperoxide (a model compound for DNA damage) and protein hydroperoxides. This review highlights the role of PHGPx in protection against peroxidative damage of lipids, protein and DNA.     

重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化

密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b( )构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫代-βD-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白表达,继续培养6 h后收集菌体,融合蛋白(DsbA-sBEKLC)产量达到151.2mg/L,相当于80.6 mg/L sBEKLC.使用渗透冲击技术从细胞周质中提取sBEKLC,经过亲和层析可从每升发酵液中得到6.8 mg sBEKLC,经检测sBEKLC具有生物活性.     

重组人附睾特异蛋白BDFx的优化表达与纯化

通过改变异丙醇-β-D硫代半乳糖苷诱导浓度、诱导温度及诱导培养时间,优化含重组人附睾特异蛋白BDFx工程菌的表达条件．运用DEAE阴离子与CM阳离子交换层析及S-100分子筛层析纯化重组蛋白,用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描等方法鉴定目的蛋白．结果显示,缩短诱导培养时间、降低IPTG浓度等可提高重组蛋白的表达量,表明适当提高诱导表达温度不会形成包涵体,并可缩短表达时间．     

对硝基酚磷酸酶的原核表达、纯化及性质研究

克隆到脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus中的对硝基酚磷酸酶(p-nitrophenylphosphatase，pNPPase)基因，将其编码区eDNA连接到pQE30表达载体中，在E．coli M15中经IPTG诱导得到高效表达．用Ni-NTA Superflow层析柱对表达产物进行了分离纯化，初步测定了pNPPase的酶学性质．发现它的反应最适pH是10．0，最适反应温度是55℃，热稳定性Tm值为52℃，Mg^2 、Mn^2 和Co^2 对pNPPase的活性有一定的促进作用，而Zn^2 和Ni^2 对pNPPase没有影响．纯化后其比活为120U／mg．     

基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化

含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98％。     

基因重组蛋白质的表达系统与分离纯化研究进展

介绍了近年来重组蛋白质的常用表达系统以及各种分离纯化技术等研究和应用的进展情况.     

重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化

将化学合成的rhPTH(1-34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET-35b( ),使rhPTH(1—34)融合于纤维素结合结构域(CBDdos)的羧基端,并得到高效表达．融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经Factor Xa裂解释放出rhPTH(1-34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1-34)纯品．每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1-34)．经质谱测定,所得样品的分子量为4117．0Da,与rhPTH(1—34)理论分子量一致．