白藜芦醇与CopC的相互作用研究

白藜芦醇是一种天然的植物抗毒素,存在于花生、葡萄和多种浆果之中。CopC是一种由β-折叠片组成的铜伴侣蛋白,含有102个氨基酸,Cu~+结合在C端,Cu~(2+)结合在N端,其作为氧化还原开关参与铜的调控,它与小分子的作用影响其氧化还原开关功能。本研究主要利用红外光谱(FTIR)、圆二色谱(CD)、荧光寿命、三维荧光光谱、荧光光谱和分子对接等方法研究白藜芦醇与CopC的相互作用。通过FTIR、CD、化学变性和荧光寿命测定表明,白藜芦醇的结合使得CopC的稳定性降低,可能源于CopC的β-折叠片含量减少,自由卷曲含量增加。此外,三维荧光光谱和荧光光谱表明,白藜芦醇与CopC结合后,其荧光光谱出现蓝移,表明白藜芦醇可能结合在CopC的疏水区域;并且,可得白藜芦醇与CopC的结合比为1∶1,结合常数为(6.76±0.17)×10~5 L·mol~(-1),疏水作用力是维持两者之间形成复合物的主要作用力。通过F9rster能量转移和分子对接模拟确定CopC中白藜芦醇和色氨酸之间的平均结合距离,模拟的结果和实验结果具有较好的一致性。本文结果将为阐明CopC的铜调控机理提供帮助。     

盐酸环丙沙星与胰蛋白酶相互作用的光谱和分子模拟研究

运用荧光光谱和紫外光谱, 结合分子模拟法研究了盐酸环丙沙星(CPFX)与胰蛋白酶(Trypsin)在不同温度条件下(288, 298和308 K)的相互作用. 研究发现CPFX对Trypsin有较强的荧光猝灭作用, 且为静态猝灭类型. 根据双对数方程处理荧光猝灭数据得到了CPFX与Trypsin在不同温度下的结合常数K和结合位点数n. 利用紫外光谱定性讨论了CPFX对Trypsin构象的影响. 通过热力学方程求得了不同温度下CPFX与Trypsin作用的热力学参数, 表明它们之间的作用力主要是疏水作用和氢键, 这与分子模拟方法所得的结果是一致的.     

VB6与不同CopC作用的光谱研究

在室温, pH 7.4, 10mmol?L-1 Hepes缓冲溶液条件下, 通过紫外差光谱,荧光光谱法研究了apoCopC、CuN-CopC与Ag+的结合性质,进一步研究了apoCopC、 CuN-CopC、CopC-AgC 和CuN-CopC-AgC 与 Vitamin B6 作用的超分子行为. 结果表明：在 apoCopC与Ag+剂量比为1:1时,Ag+可以占据apoCopC蛋白C端的Cu+ 结合位点,结合常数为(1.68±0.33)×104mol?L-1. apoCopC结合不同的金属离子后,与Vitamin B6结合位点数明显减少.     

光谱法和分子模拟研究氨氯地平与牛血清白蛋白的相互作用

采用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱及分子模拟技术研究了氨氯地平与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果发现,氨氯地平对BSA有较强的荧光猝灭作用,其荧光猝灭机制属于静态猝灭;其作用机制属荧光共振能量转移(FRET,Fluorescence Resonance Energy Transfer);由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下氨氯地平与BSA的亲和常数KA分别为1.214×104 L·mol-1(296K)和1.662 ×104L·mol-1 (303 K);由Van't Hoff方程计算出△H和△S分别为33.46 kJ·mol-1和191.22 J·mol-1·K-1,二者之间是典型的疏水力相互作用;该过程是一个熵驱动的自发分子间相互作用过程.分子模拟进一步揭示了氨氯地平与BSA的疏水空腔具有较好的相互作用,与光谱实验结果一致.     

烟碱与人血清蛋白相互作用的光谱研究

在0．1moL／L的磷酸氢二钠-柠檬酸体系中，采用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了人血清蛋白与烟碱的相互作用。荧光滴定表明这种相互作用使HSA的内源荧光猝灭。通过猝灭常数、结合常数和结合位点数的计算，证明了这种猝灭为静态猝灭机制。尼古丁和HsA形成1：1稳定复合物；考察不同温度和酸度下的猝灭作用，进一步证实其静态猝灭行为和疏水作用机制。紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明，相互作用引起HSA构象变化，而同步荧光光谱提示结合位点更接近于色氨酸。     

应用光谱和分子模拟法研究一种聚酰亚胺聚合物与人免疫球蛋白的相互作用

本文利用荧光猝灭法、红外光谱法及计算机模拟技术研究了一种聚酰亚胺聚合物(2,6-Bis(4-amino-2-trifluoromethyl phenoxy-4’- benzoyl)-pyridine,简称BAFP )与人免疫球蛋白（HIgG）的相互作用。同步荧光的结果定性地说明了BAFP影响水溶液中HIgG二级结构的情况。而判定BAFP影响HIgG二级结构的定量依据来自红外光谱,实验数据表明α螺旋结构的含量相比未加入药物时增加了约2.6～10.2%,,β折叠增大了约13.6～27.7%,,而β转角则减小了约23.8～30.3%。分子模拟的结果显示BAFP与HIgG的键合作用很强,并且有四个氢键在BAFP与HIgG分子的色氨酸Trp 170, 缬氨酸Val 105, 甲硫氨酸Met 139 及天冬酰胺Asn 52之间形成;同时也显示出维持药物与蛋白质的相互作用力主要是疏水作用,这与实验所得到的热力学参数判定作用力的结果相一致（依据范德霍夫公式计算得 与 的值分别为-6.70KJ.mol-1 和 71.93 J.mol-1.K-1）。     

钌联吡啶络合物与脱氧核糖核酸分子相互作用的荧光光谱研究与分析应用

合成了2苯基(4溴)咪唑[f]邻菲咯啉(简称PIP(Ⅲ)新的配体及〔Ru(bpy)_2PIP(Ⅲ)]~(2+)新的络合物,用荧光光谱研究了络合物与小牛胸腺DNA分子的结合情况,在 pH7.4,络合物与DNA作用后,在587nm(λ_(ex)=471nm)产生很强的荧光峰,其发光强度与DNA浓度呈线性关系;线性范围0～1.2mg/L;检测限(3a(?))为2.8mg/L.该方法具有较高灵敏度和准确度,对合成样品测定,结果令人满意.     

烟碱与人血清蛋白相互作用的光谱研究

在0.1 mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸体系中,采用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了人血清蛋白与烟碱的相互作用.荧光滴定表明这种相互作用使HSA的内源荧光猝灭.通过猝灭常数、结合常数和结合位点数的计算,证明了这种猝灭为静态猝灭机制.尼古丁和HSA形成11稳定复合物;考察不同温度和酸度下的猝灭作用,进一步证实其静态猝灭行为和疏水作用机制.紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明,相互作用引起HSA构象变化,而同步荧光光谱提示结合位点更接近于色氨酸.     

Spectral Study on the Interactions Among Cu(Ⅱ), Doxorubicin and CopC

Interactions among Cu(Ⅱ),doxorubicin and copper operon C(CopC)have been investigated in detail by means of fluorescence,UV-Vis,IR spectra,isothermal titration calorimetry(ITC)and molecular docking in Tris-HCl buffer(50 mmol/L,pH=7.4,25℃).The results suggest that Cu(Ⅱ)-doxorubicin is formed in a Cu(Ⅱ)to doxorubicin molar ratio of 1:2,and the conditional stability constant,K[Cu(Ⅱ)-doxorubicin]is 1.90×10^9 L^2/mol^2,CopC and doxorubicin can form a 1:1 complex,the conditional stability constant is greater than 10^5 L/mol.Binding of doxorabicin causes a conformational change in CopC with the reduction of β-sheet and increase of random coil,and the stability of CopC is decreased.Cu(Ⅱ),doxorubicin and CopC can form a CopC-Cu(Ⅱ)-doxorubicin ternary complex.The formation of CopC-Cu(Ⅱ)-doxorubicin reduced greatly the reduction rate of Cu(Ⅱ)by ascorbate(Vc),i.e.,the binding of doxorubicin affects the action of CopC as redox switch.     

钌联吡啶络合物与脱氧核糖核酸分子相互作用的荧光光谱研究与？…

合成了２苯基（４－溴）咪唑「ｆ」邻菲咯啉（简称ＰＩＰⅢ）新的配体及「Ｒｕ（ｂｐｙ）２ＰＩＰ（Ⅲ）」＾２＋新的络合物,用荧光光谱研究了络合物与小牛胸腺ＤＮＡ分子的结合情况,在ｐＨ７．４,络合物与ＤＮＡ作用后,在５８７ｎｍ（λｅｘ＝４７１ｎｍ）产生很强的荧光峰,其发光强度与ＤＮＡ浓度呈线性关系;     

Conformation Disturbance of CopC by α-Naphthylamine

It is known that urea and guanidine hydrochloride(GuHCl) induce conformational change of proteins in a certain range of molar ratios. In our research,α-naphthylamine(NA) above 10-4 mol/L at pH 7.0 was discovered to perturb the conformation of CopC,a copper resistant protein with a Greek β-barrel motif; this was reflected by the greater fluorescence quenching and red-shifted emission peak of CopC. The conformation change of CopC was also verified in acrylamide collision experiment by comparing quenching leve...     

吡喃并[3,2-c]吡啶-5-酮衍生物与血清白蛋白相互作用的光谱和分子对接研究

通过荧光光谱和紫外-可见吸收光谱法,在模拟生理条件下,研究了吡喃并[3,2-c]吡啶-5-酮衍生物-2-氨基-7-甲基-3-氰基-4-(4-甲苯)-吡喃并[3,2-c]吡啶-5-酮(AMP)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。探讨了AMP对BSA的荧光猝灭过程的猝灭机理。不同温度下的Stern-Volmer曲线和紫外-可见吸收光谱表明:该衍生物主要以静态猝灭的方式使牛血清白蛋白的荧光猝灭。热力学参数表明两者之间的作用力类型主要为疏水作用力。用同步荧光技术考察了这一衍生物对牛血清白蛋白构象的影响。分子对接表明,该衍生物可能位于白蛋白的疏水腔IIA处。     

Apo‐CopC and CopC‐Cu(II) Unfolding Characteristics in GuHCl Solution

The stability of CopC, a copper resistant protein with a Greek β‐barrel motif, in GuHCl solution was investigated by fluorescence spectra. Parameter A, characterizing position and shape of the fluorescence spectra, "phase diagram" method of fluorescence, and cupric binding capacity in GuHCl solution of different concentration showed that the denaturation transition of apo‐CopC and CopC‐Cu(II) might be fitted to a simple two‐state model. According to a two‐state model, the free energy of stabilization for apo‐CopC and CopC‐Cu(II), (17.08±0.35) and (23.81±0.45) kJ·mol^‐1 respectively, was obtained. Copper(II) increased the stability of apo‐CopC. The higher thermodynamics stability of CopC‐Cu(II) was revealed to originate in both the faster folding and the slower unfolding rates by unfolding kinetics.     

基于Hemin/多壁碳纳米管纳米复合物构建的过氧化氢生物传感器的研究

利用卟啉(Hemin)具有模拟酶的功能,与多壁碳纳米管(MWCNTs)构建了一种新型的过氧化氢(H2O2)生物传感器。首先,利用Hemin与MWCNTs之间的π-π键作用,在超声分散下制备Hemin/MWCNTs纳米复合物;采用滴涂技术并在nafion的作用下将其固载在电极表面,制得该H2O2生物传感器(nafion/Hemin/MWCNTs/GCE)。采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis)对合成的纳米复合物进行了分析;采用扫描电镜(SEM)对电极的表面形貌进行了表征;采用循环伏安法和计时电流法考察了该修饰电极的电化学行为;并对传感器的行为进行了详细的研究。在最优条件下,此修饰电极对H2O2具有明显的催化作用,电流与H2O2的浓度在6.0×10-7¹.8×10-3 mol/L范围内呈现良好的线性关系,检出限达2.0×10-7 mol/L。此传感器制作简单,具有较高的灵敏度和良好的稳定性及重现性。     

不同电极上血红素对青蒿素的电催化还原

 在含20%乙醇的Britton-Robinson缓冲液介质(pH=7.2)中,采用循环伏安法在玻碳电极和银电极上比较了血红素对青蒿素还原的催化作用. 由于血红素和青蒿素加合物的形成及血红素中Fe2+的催化作用,青蒿素在玻碳电极和银电极上的还原过电位分别降低了0.32和0.09 V,还原活化能分别降低了62.1和17.6 kJ/mol. 还比较了血红素和配合物EDTA-Fe3+对青蒿素的催化还原效果,结果表明,EDTA-Fe2+的催化作用远低于血红素. 进一步证实了血红素在青蒿素的药理研究中起着关键作用.     

牛血红蛋白与双十二烷基二甲基溴化铵相互作用的光谱研究(英文)

运用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱和圆二色谱法研究了双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)与牛血红蛋白(Hb)的相互作用。从紫外-可见吸收光谱观察到,随着DDAB的浓度增大,Hb在406nm处的特征吸收峰强度下降,且峰位蓝移,说明DDAB导致血红素辅基微观环境变化。由荧光光谱研究可以得出随着DDAB的浓度增大,Hb在340nm处的荧光强度逐渐增强,说明导致色氨酸荧光淬灭的血红素辅基与色氨酸的距离增大。由Scatchard方程计算了不同温度下该反应的表观结合常数、结合位点数及结合热力学参数,热力学参数的变化表明DDAB与Hb之间以疏水作用力为主。圆二色谱的研究进一步表明DDAB使Hb产生轻微的二级结构改变,α-螺旋含量增加.     

血红素/G-四链体DNA酶的活性增强研究及其在生物传感器中的应用进展

血红素/G-四链体DNA酶是一类具有类过氧化物酶活性的DNA分子,因其具有出色的活性、易修饰性和可编程性,被广泛应用于生物传感器等领域。 本文先是简要介绍了G-四链体的结构,再主要综述了增强血红素/G-四链体DNA酶活性的策略及基于血红素/G-四链体DNA酶的生物传感器在生物标志物、微生物与生物毒素以及金属离子检测中的应用,并展望了血红素/G-四链体DNA酶的未来发展趋势。     

Semi-Rationally Designed Short Peptides Self-Assemble and Bind Hemin to Promote Cyclopropanation

The self-assembly of short peptides gives rise to versatile nanoassemblies capable of promoting efficient catalysis. We have semi-rationally designed a series of seven-residue peptides that form hemin-binding catalytic amyloids to facilitate enantioselective cyclopropanation with efficiencies that rival those of engineered hemin proteins. These results demonstrate that: 1) Catalytic amyloids can bind complex metallocofactors to promote practically important multisubstrate transformations. 2) Even essentially flat surfaces of amyloid assemblies can impart a substantial degree of enantioselectivity without the need for extensive optimization. 3) The ease of peptide preparation allows for straightforward incorporation of unnatural amino acids and the preparation of peptides made from d -amino acids with complete reversal of enantioselectivity.