PCR法快速鉴定阳性克隆实验的改进

分析了常规PCR扩增鉴定阳性克隆实验中存在的问题,进行了改进探索:反转录PCR(RT-PCR)获得目的基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌感受态细胞;利用目的基因的特异性引物,用菌液PCR法直接筛选重组克隆,在筛选的阳性菌液中扩增到与目的基因片段大小一致的阳性条带,与质粒PCR及酶切的阳性对照一致,验证了菌液PCR具有可靠性。实验证明,自身引物菌液PCR法用于定性筛选重组阳性克隆,是一种简便、快速、有效的方法。     

结合PCR扩增快速筛选鉴定重组质粒

针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆（重组质粒），本在实验室研究的基础上，创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法，用和Triton裂解液裂解菌落，离心后上清作为模板，再用特异引物进行PCR扩增，2h就可以得出结果，本方法具有节约省时，重复性好，结果直观，准确等优点，这为从事分子生物学研究的实验室快速筛选阳性克隆提供了方便。     

一种快速的重组农杆菌PCR鉴定方法

建立一种快速的重组农杆菌PCR扩增鉴定方法,采用煮沸法处理重组农杆菌,使农杆菌高温裂解,释放质粒DNA,直接进行PCR扩增反应,检测目的基因片段.结果表明,重组质粒PCR扩增效果较好,目标条带较为明显.通过煮沸重组农杆菌,进行PCR扩增反应鉴定质粒DNA,不仅实验操作简单安全,缩短实验时间,并且避免了酚、氯仿试剂在提取质粒DNA过程中的残留对后续分子鉴定质量的影响.     

一种快速制备毕赤酵母表达系统P CR鉴定模板DNA的方法

文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。     

一种适用于批量筛选和鉴定拟南芥突变体的快速DNA提取方法

DNA提取是拟南芥突变体筛选与鉴定中的关键环节.结合拟南芥突变体鉴定特点和DNA提取特点,对传统SDS法进行改良,摸索出一种简易、快速且经济的DNA提取方法,并将其应用到突变体的批量筛选与鉴定中.使用该方法可在常温下利用10mg左右拟南芥叶片,以少量试剂,通过简单的研磨、离心、沉降和干燥等步骤便能快速制备用于PCR检测的DNA模板.采用本方法个人提取单个样品DNA仅需15min左右,每小时可提取48个DNA样品.研究采用该方法提取了一批待鉴定拟南芥突变体的DNA样品,利用三引物法对其进行PCR检测,结果表明DNA样品浓度高,DNA扩增成功率高达100%,且目的条带清晰,说明该方法在拟南芥突变体的筛选和鉴定上是适用且高效的,可广泛应用于实验室突变体库的建立.     

牛α—s1酪蛋白基因3‘端DNA的PCR扩增,克隆及鉴定

本研究以牛血总ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增牛α－ｓ１酪蛋白基因的５＇端３．６ｋｂＤＮＡ片段和３＇端１．５ｋｂＤＮＡ片段的调控区序列，得到了相应的特异性扩增片段．用Ｋｌｅｎｏｗ处理后，将两个扩增片段分别与经Ｓｍａｌ酶切的ｐＵＣ１８质粒载体用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＪＭ１０９．在含有Ｘ－ｇａｌ，ＩＰＴＧ和Ａｍｐ的选择培养基上培养．从白色菌落中提取质粒ＤＮＡ，进行限制酶切鉴定．结果得到一个插入有１．３ｋｂＤＮＡ片段的阳性克隆．对其进行部分序列分析表明，该片段为５＇端缺失约１７０ｂｐ的牛α－ｓ１酪蛋白基因３＇端及下游区序列．     

一种简便快速分离高质量基因组DNA的方法

介绍了一种简便快速从动物组织中提取高质量DNA的方法 ,可广泛应用于现代分子生物学实验 .     

一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.     

一种利用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法。在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证。并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析。6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增。针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103 cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104 cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105 cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106 cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107 cfu/ml。进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮。该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段。     

基于遗传算法的快速成型零件分层方向优化方法

熔融沉积快速成型技术在快速成型制造领域中的作用日趋明显,复杂零件成型方向是成型中的关键问题之一.为此,提出了一种熔融沉积成型分层方向的选择方法,建立了以支撑面积最小、制作时间最短和表面粗糙度最低为优化目标函数的数学模型,用遗传算法求解,得到优化的制作方向.快速成型实验结果表明,本方法可明显提高快速成型系统的加工效率,降低系统的成本.     

DNA序列分析中克隆片段在M13的缺失及质粒载体的应用

应用新的亚克隆载体BLUESCRIPT M13克服了外源DNA缺失问题.采用外切核酸酶Ⅲ快速亚克隆法,在不知道任何内切酶位点的情况下,也能获得一系列适应于DNA顺序分析的重叠衔接克隆.用超螺旋双股DNA直接序列分析程序,简化了DNA序列分析工作.     

光固化快速成型中零件制作方向的多目标优化问题研究

阐述了快速成型中与制作方向相关的质量与经济性问题,对制作方向的优化目标进行了定义,并依据该目标建立了制作方向多目标优化模型,针对悬臂变形,台阶效应,过固化及制作时间,分别构造了子目标函数,利用评价函数法,把制作方向优化的多个目标函数化为一个数值目标的评价函数,并给出了优化模型的约束函数,最后,以该优化模型作为计算的理论依据,进行了应用实例的方向优化,计算结果表明：该模型准确地表达了快速成型中的制作方向优化问题,理论正确,方法可行。     

基于RL&SM通用夹具系统的主动寻位技术及其实现方法

介绍了RL&SM通用夹具的寻位系统 ,描述了主动寻位与制造信息转换问题 ,提出和实现了相应的控制方法及其系统实现中的关键技术。理论分析与实验结果表明 ,提出的解决方法和技术是可行的 ,为RL&SM通用夹具系统的实际应用奠定了理论基础和技术支持     

塔里木顺托果勒地区地应力方位室内求取

确定地层地应力地理方位对油气资源的高效开发具有重要的意义,通过本文提出的利用波速各向异性结合古地磁岩心定向来确定地应力地理方位的新方法研究了塔里木盆地顺托果勒地区的地应力方位分布情况。现场应用表明：顺托果勒地区最小水平地应力方位布局较为清晰,大致以NE走向分布;新方法测试结果具有较高的精度和可靠性,可为该区块的勘探、开发提供重要基础数据支撑;且具有岩心利用率高、可操作性强、成本低等优点,具有很好的推广应用价值。     

快速成形技术在产品快速开发中的应用

阐述了快速成形技术的技术原理和特点,探讨了快速开发系统的组成和快速成形的几种工艺,以实例说明了快速成形技术在产品快速开发中的作用。     

快速测定水和废水中悬浮物

本提出一种用于测定水和废水悬浮物及活性污泥浓度的新方法。通过测定化工废水，生物处理装置出水极曝气池中混合注悬浮固体浓度，并与标准测定方法的测定结果进行了比较。采用本新方法可大大缩短测定时间，占用空间小，所用仪器简单，其精密度和准确度均能达到要求。     

Application and Realization of Rapid Searching Technology in the RL & SM Universal Fixture System

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＩｎｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓ,ｅｎｇｉｎｅｅｒｓａｒｅｍｕｃｈｃｏｎｃｅｒｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｗｏｒｋ ｐｉｅｃｅｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎｐｒｏｂｌｅｍｓ ,ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｉｎｔｈｅｐｒｏ ｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｑｕａｎｔｉｔｙｗｉｔｈｈｉｇｈｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｒｉｎｔｈｅｔｒｉａｌ ｍａｎｕ ｆａｃｔｕｒｅｏｆａｎｅｗｐｒｏｄｕｃｔ.Ｉｎｐａｐｅｒ[1],ｎｏｎ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｐｕｔｆｏｒｗａｒ…     

钢铁中硅锰磷三元素的高速测定

采用微机自动控制分析程序,高速分析钢铁中硅、锰、磷三元素。钢铁试样经机内溶解后,利用气动原理,进行提液、分液、钽丝加热、发色、光电比色,完成程序自动化。再经光电转换,自动数显吸光度,并绘制打印工作检量线。单样测定在4 min 内完成,方法准确度高,精密度好。