早熟中华绒螯蟹雄蟹性腺指数、性腺生化成分及脂肪酸组成变化

采用生化及气相色谱的方法研究了早熟与正常中华绒螯蟹雄蟹性腺指数、性腺生化成分及脂肪酸组成,结果表明:早熟雄蟹性腺指数为4.42±0.96,而正常雄蟹性腺指数为3.09±0.67,显著低于早熟雄蟹的性腺指数(P<0.05);生化成分组成中,早熟蟹性腺的水分含量为70.26n-%,显著低于正常蟹,而总脂含量为3.96%,显著高于正常蟹(P<0.05),蛋白、碳水化合物、甘油三酯、胆固醇和磷脂含量在两种性腺中均未见显著差异(P>0.05);脂肪酸组成中,饱和脂肪酸(SFA)含量最多的均为16∶0,二者含量比较接近无显著差异(P>0.05),并且SFA均在27%稍多,二者无显著差异(P>0.05).单不饱和脂肪酸(MUFA)含量最高的均为18∶1n-9,早熟雄蟹性腺含量略高为24.04%,但与正常蟹间无显著差异(P>0.05);而早熟雄蟹性腺的18∶1n-7、20∶1n-9和MUFA含量均显著高于正常蟹(P<0.05).多不饱和脂肪酸组成中,两种蟹性腺的18∶2n-6含量非常接近,均在7.0%左右,虽然正常雄蟹性腺的20∶4n-6(ARA)、20∶5n-3(EPA)、22∶6n-3(DHA)、PUFA、n-3PUFA、n-6PUFA和HUFA含量均高于早熟蟹,但仅有后二者存在显著差异(P<0.05).     

东北草型平原水库中华绒螯蟹放流增殖初步研究

在通辽地区的三个水库（莫力庙水库主库、莫力庙水库预备库、孟家段水库）进行了中华绒螯蟹的放流增殖试验,对三个放流点中华绒螯蟹的生长以及影响放流效果的因素进行了分析,结果表明,在中华绒螯蟹放 流增殖中,水体中水草量、饵料种类、水位持续下降对中华绒螯蟹的生长、成活、蜕壳均有一定影响,放流增殖过程中逃逸量不大,在适宜的水体,中华绒螯蟹放流增殖是可行的。     

长江、辽河野生与天津养殖中华绒螯蟹同工酶的比较

使用水平式淀粉凝胶电泳法,对采自长江、辽河的2个野生群体、天津津南区1个养殖群体的中华绒螯蟹的腿部肌肉进行了AAT,GPI,IDH,LDH,MDH和6-PGD共6种同工酶的电泳分析,结果检测出7个基因座位,其中在GPI*,IDH*和MDH-2*的3个基因座位上有变异存在.若以基因座位上的最高基因频率≤0.99为多态基因座位,则3个群体的多态基因座位比例分别为长江蟹42.9%,辽河蟹14.3%,津南蟹28.6%;若以最高基因频率≤0.95为多态基因座位,则3个群体的多态基因座位比例分别为14.3%,14.3%和0;平均杂合度预期值分别为0.030 3,0.013 6,0.015 3;长江蟹与辽河蟹、津南蟹间的Nei遗传距分别为0.000 168,0.000 198,辽河蟹与津南蟹间的Nei遗传距为0.000 022.     

改进TRIzol一步法提取中华绒螯蟹窦腺总RNA

中华绒鳌蟹窦腺组织个体很小,RNA含量较少,利用TRIzol一步法提取其总RNA效果较差,且解剖过程中RNA易降解.本文对TRIzol试剂盒说明书的提取过程进行了适当改进,有效提高了窦腺总RNA的产率,减少了RNA降解量,延长了RNA的储存时间.该方法对于低丰度RNA提取尤为有效.     

东北草型平原水库中华绒鳌蟹放流增殖初步研究

在通辽地区的三个水库 (莫力庙水库主库、莫力庙水库预备库、孟家段水库 )进行了中华绒鳌蟹的放流增殖试验 ,对三个放流点中华绒鳌蟹的生长以及影响放流效果的因素进行分析 .结果表明 ,在中华绒鳌蟹放流增殖中 ,水体中水草量、饵料种类、水位持续下降对中华绒鳌蟹的生长、成活、蜕壳均有一定影响 .放流增殖过程中逃逸量不大 .在适宜的水体 ,中华绒鳌蟹放流增殖是可行的 .     

辽河长江两水系中华绒螯蟹酯酶和乳酸脱氢酶的同功酶比较研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对辽河和长江两水系的中华绒螯蟹酯酶和乳酸脱氢酶的同功酶进行了研究，发现在肝脏、肌肉组织中两者均有差异，从遗传学角度为两地河蟹的区别提供可参考的生化指标。     

四水系中华绒螯蟹天然群体遗传特征的微卫星标记分析

利用6对微卫星引物对当前长江、辽河、瓯江3个中华绒螯蟹天然群体以及莱茵河水系F2代群体共计80个个体进行群体遗传学研究.结果表明:4个中华绒螯蟹群体均具有较高的遗传多样性(其总体平均期望杂合度He为0.741 1).各群体在6个微卫星位点上的观察杂合度(Ho)均高于期望杂合度(He),其中长江群体、辽河群体、瓯江群体以及莱茵河F2代群体的平均观察杂合度分别为0.916 7、0.958 4、0.930 6、0.799 5,平均期望杂合度分别为0.749 6、0.741 6、0.758 5、0.714 9.瓯江群体的平均期望杂合度最高(平均He为0.758 5),莱茵河水系F2代群体最低(平均He为0.714 9),各群体间无显著性差异(P>0.05).本研究中各中华绒螯蟹群体在6个微卫星位点上的固定指数Fis多为负值,其中辽河群体的Fis最小(-0.348 5),莱茵河水系F2代群体的Fis最大(-0.166 9),提示本研究中各中华绒螯蟹群体内部存在着较为明显的远缘繁殖现象.本研究中各中华绒螯蟹群体间遗传距离介于0.068 8至0.174 3之间,其中长江群体与辽河群体间的遗传距离最小(0.068 8),瓯江...     

光周期对雄性中华绒螯蟹性腺发育的影响

研究了不同光周期对中华绒螯蟹雄性生殖的影响.实验分4组:实验1组为自然光照;实验2组为3 d自然光照,2 d完全遮光;实验3组为2 d自然光照,3 d完全遮光;实验4组为全程遮光.实验为期70 d.结果如下:各实验组60 d后性腺指数(GSI)出现显著差异,至实验结束时,实验1组最高,为94.0×10-4,实验4组最低,仅38.0×10-4.血淋巴睾酮含量30 d时各组即出现差异,至实验结束时睾酮含量以实验1组最高,为1.475 ng／mL,实验4组最低,仅0.305ng／mL.肝体指数(HSI)亦在30 d时出现差异,实验结束时以实验2组最高,为0.081,实验1组略低,为0.077,而实验3、4组分别为0.058和0.059.此外,至实验结束时不同光照时间组肝胰腺总脂含量也存在明显差异,各组总脂含量分别为:实验1组25.3％,实验2组26.5％,实验3组20.6％,实验4组19.1％.结果表明,光照时间不仅对雄性中华绒螯蟹生殖系统的发育、性激素的分泌有重要影响,还会影响肝胰腺对物质的积累,适量的光照时间为雄蟹发育所必需.     

一个在中华绒螯蟹性腺中特异表达的Sox基因HMG盒区的克隆与鉴定

根据人的睾丸决定因子（SRY）的高速泳动组蛋白区设计简并引物,以中华绒螯蟹雌雄个体的基因组DNA为模板进行PCR扩增,从雌雄体均扩出220bp左右的条带,说明中华绒螯蟹中存在SRY基因的同源体,且无性别差异．经克隆、测序后得到两条SRY盒区相关基因（Sox基因）片段,ES1和ES2,其序列与人相应Sox基因保守区的最高同源性分别为66％和93％．ES1和ES2在成体8种组织中的检测结果表明,ES1在精巢、肌肉、心脏、肝脏、鳃、胸神经团、不同时期的卵巢及排出的成熟卵等组织中均表达,而ES2只在精巢、成熟的卵巢以及排出的成熟卵中有表达,说明ES2基因可能参与性腺的发育和早期胚胎发育过程．     

保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响

以精子存活率和精子密度作为判据，研究了低温（4 ℃）条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测，六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示，六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差，保存2 d后精子即全部死亡，而两种无钙离子人工海水的保存效果较好，其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳，其保存6 d后的精子存活率达92.19%，精子密度亦保持较高水平；故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液，研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示，不同精子密度的保存效果差异显著，其中以106～107个/mL的保存密度效果最好，在保存2 d后精子存活率仍保持在95 ％以上；在7~10的范围内保存效果较好，保存15 d后精子存活率均在90%以上；在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000 mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中，渗透压在750～850 mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好，该条件下保存15 d后精子存活率仍在75 ％以上.以上结果证实，中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为：精子密度为106～107个/mL，渗透压范围为750～850 mOsmol/kg H2O，pH值为pH 7~10.     

中华绒螯蟹首次排卵后卵巢发育的组织学研究

利用组织切片技术,结合外观特征,在光学水平对江苏南通地区第一次排卵后18天内（即卵巢的二次发育）的中华绒螯蟹的卵巢发育进行组织学和细胞学的观察研究．本实验可以观察到卵细胞发育的四个不同时期：初级卵母细胞小生长期、初级卵母细胞大生长期、成熟期以及退化时期的卵细胞．排卵后的卵巢在营养贫乏的情况下,出现直接退化现象;而在营养丰富的情况下,处于大生长前期的卵细胞则会迅速生长,为二次排卵做好准备．     

中华绒螯蟹高血糖素的分离及其功能初探

以中华绒螯蟹眼柄视神经节为材料,通过蛋白液相色谱仪分离具有提高血糖浓度的物质;同种生物体内活性鉴定结果显示,样品9具有高血糖活性,为高血糖素或含有高血糖素.经进一步对样品分离和收集后对其部分生化性质进行分析,初步确定它是具有高血糖的作用和酸性等电点的热稳定产物.     

中华绒螯蟹螺原体类螺旋蛋白SLP25对中华绒螯蟹和RAW264.7细胞免疫反应的研究

中华绒螯蟹螺原体是一种引起中华绒螯蟹颤抖病的新型病原微生物,对中华绒螯蟹养殖业造成了很大的损失.本文研究了螺原体的一个特有蛋白——螺旋蛋白所引起的中华绒螯蟹和小鼠RAW264.7细胞的免疫反应.克隆和原核表达中华绒螯蟹螺原体类螺旋蛋白SLP25后,用以感染中华绒螯蟹和小鼠巨噬细胞RAW264.7,用实时定量PCR和Western Blot的方法检测宿主免疫相关基因或蛋白表达量的变化.类螺旋蛋白SLP25刺激后,中华绒螯蟹的抗脂多糖因子、酚氧化酶原、消极素轻链和Peroxiredoxin 6等基因的mRNA表达量变化显著;RAW264.7细胞内的TNF-α、IL-1β和IL-10等基因的mRNA表达量变化显著,而TGF-β1和CD40的mRNA表达量变化不显著;同时RAW264.7细胞内P38和ERK蛋白的磷酸化水平变化显著,而JNK蛋白的磷酸化水平变化不显著.通过本文的研究表明类螺旋蛋白SLP25可以引起宿主广泛的免疫变化,进而证明其是重要的毒力相关因子.     

光伏板对中华绒螯蟹养殖环境和生长的影响研究

光伏发电作为清洁能源近年来不断取得发展,土地等有限资源限制光伏发电的发展,将中华绒螯蟹养殖同光伏发电结合起来是一种综合利用资源的新尝试,然而光伏板对中华绒螯蟹养殖环境及生长有无影响尚无研究.因此,本研究于2019年4月到10月,在通威南京龙袍“蟹光一体”养殖基地,检测了光伏板的存在对养殖环境和中华绒螯蟹生长情况的影响....     

液相色谱—串联质谱法测定中华绒螯蟹中21种磺胺类药物残留

建立了一种液相色谱-电喷雾串联质谱同时测定中华绒螯蟹中21种磺胺类药物残留的方法.均质样品先后用乙腈、二氯甲烷提取,合并提取液,取部分提取液经氮吹浓缩.残渣用1 mL流动相溶解,饱和正己烷脱脂净化.采用ZOR-BAX Eclipse XDB-C8色谱柱,以含0.2%乙酸的水溶液和甲醇(7:3)为流动相,梯度洗脱,在电喷雾-多反应监测离子模式下,进行定量定性分析.方法的定量限为5μg/kg;以标准加入法计算回收率,在4～40μg/kg添加范围内,平均回收率为71.8%～106%;相对标准偏差为0.44%～10.1%.     

直链藻强化的轮虫对中华绒螯蟹潘状幼体Ⅱ期与Ⅲ期生长及脂肪酸组成的影响

用直链藻强化培养的轮虫,其EPA和DHA含量显著增加,以强化72 h效果最佳,其EPA和DHA含量分别为10.36%和3.12%;用不同密度的强化轮虫培养中华绒螯蟹溞状幼体Ⅱ期与Ⅲ期(Z2与Z3),结果表明:轮虫密度为20 ind/mL时Z2的变态率与存活率分别为60.60±2.64%和63.20±2.48%,密度为30 ind/mL时Z3的变态率与存活率分别为57.40±1.63%和62.00±2.98%,均为最佳;收集该阶段溞状幼体,对其脂肪酸含量进行分析,强化轮虫培养的溞状幼体的EPA和DHA含量分别为15.09%和7.24%,显著高于未经强化的酵母轮虫培养的溞状幼体(p<0.05).     

中华绒螯蟹弧菌病及病原检验

对一起自然发生的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis H．Milne-Edwards）病例进行了检验,结果表明该病是由鳗利斯顿氏菌（Listonella anguillarum）所引起的病害。对从病（死）蟹肝胰腺中分离做纯培养的6株菌（HF010522-1至HF010522-6）进行了形态特征、主要理化特性等方面的鉴定;同时,选择代表菌株（HF010522-1）对健康蟹进行了人工感染试验,结果显示出较强的致病作用;另外,测定了HF010522-1菌株的16S rRNA基因序列、构建了系统发育树;选用37种抗菌类药物对3株菌做药敏试验,结果均表现对头孢噻肟等31种药物呈现敏感或高度敏感、对头孢拉啶低度敏感、对青霉素G等5种耐药。     

中华绒螯蟹不同生理时期肌肉组织中同工酶的分析比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对中华绒螯蟹附肢肌肉中乳酸脱氢酶(LDH)、醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化物酶(P()D)及淀粉酶(AMY)等同工酶进行了比较分析,结果表明中华绒螯蟹附肢肌肉在不同生理阶段同工酶的表达上具有一定特异性。