与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

HBV X蛋白与宿主APOBEC3G蛋白之间的相互作用

将原核重组质粒双酶切后释放的χ基因与真核表达载体连接，构建真核重组质粒pcDNA3.1-X，然后与真核重组质粒pcDNA3.1-APOBEC3G共转染HepG2细胞，提取蛋白进行免疫共沉淀并用Western blot分析结果。免疫共沉淀后，HA-APOBEC3G融合蛋白能够在抗HBx的免疫沉淀物中检测出来，在抗HA标签的免疫沉淀物中也能检测到HBx。揭示了这两种蛋白能在受体细胞内形成复合物。结果表明乙肝病毒X蛋白与APOBEC3G蛋白在细胞内能发生相互作用，提示APOBEC3G抗HBV作用可能与乙肝病毒X蛋白有关。     

酵母双杂交筛选抑癌基因SuFu相互作用蛋白

以Hedgehog信号通路关键负调控因子Suppressor of Fused(SuFu)蛋白作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从人均一化cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质,共获得160个阳性克隆,包括Hedgehog信号通路蛋白Gli3和一些肿瘤蛋白如乙醛脱氢酶1(ALDH1A1)、激酶、转运蛋白、转录因子等.通过免疫共沉淀和免疫细胞化学实验证实,SuFu与ALDH1A1发生相互作用,后者可能参与Hedgehog信号通路的调控.     

环加氧酶2基因的原核表达、抗体制备及其在肝癌中的表达

用PCR技术扩增环加氧酶2（COX-2）基因的C末端777bp的片段，插入到pET-28b（＋）中，构建原核表达载体．转入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白．用镍离子螫合柱（Ni—NTA）纯化融合蛋白，获得纯度较高的原核表达蛋白．纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，用ELISA及Western blotting分别检测抗体．用此抗体Western blotting检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达．ELISA及Western blotting结果显示免疫家兔所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价，并能够特异性的识别真核细胞中的环加氧酶2．用此抗体检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达．证实肝癌组织中伴随有环加氧酶2的大量表达．同时所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价和特异性，为进一步研究环加氧酶2的功能提供了条件。     

Mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达Mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,Mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,Mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,Mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。 更多还原     

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化E.coli BL21-codonPlus (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原 ;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.     

基于基因序列的乙型肝炎病毒基因分型方法的比较

采用3种不同的生物信息分析法对HBV S基因序列进行分析以鉴定HBV基因型,并比较分析各方法的优缺点。采集10例HBV慢性感染者血清,抽提HBV DNA,PCR扩增HBV S基因并测序。分别采用Clustal X软件和Bioedit软件计算S基因核苷酸和氨基酸同源性;DNAstart软件、Clustal X软件和Mega 4软件绘制S基因遗传进化树;以及在线Genotyping软件,将10例S基因序列与不同型及亚型HBV S序列比较以鉴定基因型及亚型。S基因核苷酸和氨基酸同源性计算结果显示1,3,4,5,7,8,9,10号标本与B2AF121243同源性最高,核苷酸同源性分别是98.0%,99.0%,98.8%,99.1%,99.2%,99.5%,99.5%,99.6%,而2号标本与C2 M38636同源性最高,核苷酸同源性为97.7%,6号标本与C4GQ377630同源性最高,核苷酸同源性为97.3%;构建系统树法鉴定结果为1,3,4,5,7,8,9,10号标本与B2AF121243进化距离最近,而2号标本与C2M38636进化距离最近,6号标本与C4GQ377630进化距离最近;Genotyping比对发现1,3,4,5,7,8,9,10号标本属于B基因型,2,6号标本属于C基因型。结论S基因核苷酸及氨基酸同源性的计算法可有效用于乙型肝炎病毒基因分型,是对现有分型方法系统树构建法以及在线Genotyping法的补充。     

多通道多频高频地波雷达DDS数字信号源的设计

采用直接数字频率合成技术(DDS)产生多频高频地波雷达信号波形,使用现场可编程门阵列(field programmable gate array,FPGA)设计多通道多频高频地波雷达DDS数字信号源,提出了运用FPGA芯片实现该信号源的一种方案.该方案的系统组成包括PC机软件、LXI接口电路、控制模块、多通道DDS系统和加法器.该信号源输出为四通道单频信号及四通道信号加权叠加合成的多频信号.系统输出频率为3～30 MHz,输出信号无杂散动态范围(SFDR)优于62 dB,输出信号相位噪声优于132 dB/Hz,实验结果可满足多频高频地波雷达发射和接收系统的要求.     

五味子乙素对心肌细胞的氧化应激损伤的保护作用及其机制

研究了五味子乙素(Schisandrin B,SchB)对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠原代心肌细胞体外氧化应激损伤的保护作用,并对其作用机制进行探讨。结果发现:与对照组相比,H_2O_2诱导组中心肌细胞的增殖明显受到抑制,氧化损伤产物丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)、促氧化蛋白p67-phox和p47-phox以及信号通路蛋白Trfa6和p-TAK1水平显著升高,而超氧化物歧化酶(SOD)及抗氧化蛋白HO-1水平显著降低,差异均有统计学意义(p0. 01);与H_2O_2诱导组相比,SchB诱导心肌细胞增殖呈现浓度依赖性,显著抑制MDA、NO、p67-phox、p47-phox、Trfa6及p-TAK1的表达,显著诱导SOD和HO-1的表达,差异均有统计学意义(p0. 05)。研究表明,SchB增强心肌细胞的抗氧化能力与抑制Traf6/TAK1信号传导有关。     

反应条件对水热合成二硫化镍NiS2粉晶的影响

本文采用水热法一步合成了二硫化镍粉晶,利用X射线衍射(XRD),扫描电子显微镜讨论了样品N iS2粉晶的晶体结构及形貌,研究了X射线衍射峰积分强度以及半峰宽等随反应条件的变化,并分析了N iS2粉晶的合成机理.     

重组甲鱼载脂蛋白B的研制及其阻断STSSSV感染的活性初探

为了制备甲鱼(Pelodiscus sinensis)载脂蛋白B (Pelodiscus sinensis Apolipoprotein B, PApoB) 基因的原核表达产物, 并探索其是否具有阻断甲鱼系统性败血症球状病毒(Soft-shelled Turtle Systemic Septicemia Spherical Virus, STSSSV)感染的功能, 为最终控制和防治甲鱼系统性败血症疾病奠定基础, 构建了PApoB的原核表达系统, 纯化了重组PApoB, 并将其用于阻断STSSSV感染的分析: 根据甲鱼PApoB的基因序列, 设计引物, 扩增其第9932-11209bp(3294-3696 aa)区段, 将其连接至表达载体pET-28a(+)中, 转化大肠杆菌Rosetta株, 经硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 并用亲和层析法纯化获得了重组PApoB; 将FITC标记的STSSSV与PApoB孵育后对甲鱼细胞进行攻毒, 显微镜下观察, 结果PApoB添加组的病毒荧光信号明显低于非添加组, 表明该重组蛋白可以阻断STSSSV的感染.     

RNA药物抗乙型肝炎病毒的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)导致的慢性感染已经成为威胁全球健康的主要问题之一.传统的抗乙肝药物如以拉米夫定和阿德福韦为代表的核苷类似物以及干扰素类药物在临床上都存在一定的局限性,因此寻找新的抗乙肝药物已经成为当务之急.本文主要从小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA)和配体指数富集的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选的RNA适配子这3个方面来分别阐述用小分子RNA药物抗HBV的研究进展和展望.     

钼、硼浸种对大豆幼苗生理特性的影响

以浙春3号大豆为研究材料，设置了不同的钼、硼浸种对大豆种子的萌发和幼苗生理特性的影响，结果表明：低浓度钼或硼有利于大豆种子的萌发，钼、硼浸种时间以12h最佳，钼浸种或不过量硼浸种将增大豆幼苗的呼吸速率，提高过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化岐化酶（SOD）等抗逆性酶的活性，降低质膜透性（MP）及丙二醛（MDA）和脯氨酸（Pro)的含量，中等浓度的钼、硼浸种效果最显著，而高浓度浸种将产生相反的效果。     

人丙型肝炎病毒研究进展

扼要介绍了近年来ＨＣＶ研究的进展，包括病毒形态、基因组结构、病毒蛋白质及其加工、病毒流行病学、病毒与肝癌关系、病毒抗体检测试剂的发展及疫苗研究，并对抗体检测试剂的发展趋势和目前疫苗研究中的问题进行了分析．     

催化铁-氧腐蚀电池处理活性艳红X-3B

在活性碳与铁屑组成的腐蚀体系中添加氧催化剂 Mn O2 ,并进行曝气形成催化铁 -氧腐蚀电池 .使用这种催化铁 -氧腐蚀电池对活性艳红 X- 3B模拟染料废水进行了处理 ,并研究了若干因素对其处理效果的影响 .结果表明 ,该法比普通铁屑处理法效果大有提高 ,处理 10 m in脱色率就可达到 98%以上 ,COD去除率高达 82 % (一般在 70 %～ 80 %之间 ) ,最佳处理效果时的 p H=7,不需要另调 p H,对处理条件要求宽松 ,应用前景广泛 .     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E1在小鼠和家兔中免疫应答研究

探讨丙型肝炎病毒包膜蛋白E1作为丙肝候选疫苗的可行性．用大肠杆菌表达的非糖基化HCV(丙型肝炎病毒)E1包涵体蛋白免疫小鼠和家兔，分析该包涵体蛋白在小鼠和家兔中所引起的免疫应答及其安全性．该E1蛋白具有良好的免疫原性，能诱导小鼠和家兔产生针对E1的特异性体液免疫应答．小鼠CD8^ T细胞数量在免疫后有明显升高．免疫小鼠未见明显的毒副作用．推测HCV E1这种包涵体结构可能有利于E1抗原的呈递．而HCV E1蛋白的糖基化并不是其免疫原性所必须的．     

催化铁氧腐蚀电池处理 活性艳红的电化学机理

用紫外扫描吸收光谱、电化学循环极化、腐蚀电位监测和恒电位电解等方法研究了催化铁氧腐蚀电池处理活性艳红X-3B的电化学机理.结果表明,活性艳红X-3B在铁氧腐蚀电极上发生电化学还原而分解成小分子,达到脱色的目的,但模拟废水COD下降不大,电极反应过程属扩散步骤控制.