单因子和正交设计法建立分枝杆菌多重PCR体系

为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成3对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了鉴别分支杆菌的多重PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行了验证。结果显示:该方法对结核分枝杆菌标准株H37Ra能扩增出506、396和984bp,对卡介苗(BCG)能扩增出506和984bp片段,对禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌能够扩增出506bp片段,对大肠杆菌等的扩增结果均为阴性。建立的多重PCR敏感度最低可检出6.6×10-6 ng。结论:该方法具有特异性高、敏感性好等特点,可用于奶牛结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断。     

正交设计优化芥菜ISSR反应体系研究

利用正交实验设计,对芥菜ISSR-PCR反应的5因素4个水平进行研究,建立了芥菜ISSR—PCR反应的最佳体系,即在20μL反应体系中,模板DNA40ng,引物10pmol,10×反应缓冲液,dNTPs为0．5m mol／L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2＋ 2．0mmol／L．并进一步进行梯度退火实验,找到了芥菜ISSR最适的退火温度为51℃．     

利用多重PCR探究男性尖锐湿疣与HPV感染之间的相关性

本文的主要目的是建立一种针对人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus, HPV)检测的多重PCR方法,并利用这种方法探究男性尖锐湿疣与HPV感染之间的相关性.首先建立一种检测HPV的多重PCR方法,然后运用该方法对156例男性尖锐湿疣标本的HPV3种低危(HPV6,11,42)和6种高危(HPV16,18,33,52,56,58)亚型进行检测,并与反向膜杂交检测结果进行比较.结果156例标本中阳性标本数69例,占总标本数的44.23%,其中单一感染标本数48例,占69.57%,混合感染标本数     

鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立鸽圆环病毒(PiCV)TaqMan探针荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。方法 通过比对NCBI发表的PiCV各分离株序列,选取其polymerase基因保守序列设计引物探针,建立PiCV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性及敏感性进行验证;取浓度为3.48×10⁵和3.48×10⁴copies/μL的质粒标准品,每个浓度做6个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,验证方法的重复性和稳定性;用该方法检测采自北京某养殖场的鸽肝、脾、肺、法式囊样本各40份及鸽盲肠样本36份,以验证此方法在实际应用中的检测能力。结果 建立的PiCV荧光定量PCR方法在3.48×10⁷～3.48×10¹ copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,标准曲线Slope为-3.381,R²值为1,扩增效率为97.61%。可检测到的PiCV最低浓度为34.8 copies/μL,与常规PCR法相比,检测灵敏度高2个数量级;以猪圆环病毒2型、禽腺病毒I型及III型、禽白血病病毒、禽网状...     

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒三重PCR检测方法的建立

通过设计三对引物分别扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪轮状病毒(RV)的特异性基因,建立了一个能对TGEV、PEDV及RV感染鉴别诊断的三重PCR方法。该方法能同时检测TGEV的M基因252bp片段、PEDV的N基因540bp片段及RV的VP7基因412bp片段,而对CSFV、PCV2、PRRSV、PRV等无扩增,其检测TGEV、PEDV及RV的极限为100pg核酸/μL;用该方法对临床收集的26份粪便样品进行检测,结果表明:建立的多重PCR方法具有特异性强,强灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。     

正交设计优化混凝土配合比的研究

本文介绍了正交设计方法的基本原理和特点,并通过一个计算实例来详细说明了正交设计方法的使用,说明正交设计方法在混凝土配合比设计中是行之有效的。     

多重PCR法快速鉴定转基因小麦植株及后代

根据转基因植物中常用的报告基因uidA、选择基因bar的序列,设计合成两对不同的引物,建立了在转基因小麦材料分子确证中,应用一次PCR反应同时扩增检测两种或多种外源基因的多重PCR方法．通过对质粒pAHC25以及30个转基因小麦样品进行PCR扩增分析,比较多重PCR的检测结果与单基因的PCR扩增结果,发现两者结果完全一致．     

多重PCR筛选临床细菌耐药整合子基因

目的：建立多重PCR方法并对临床菌株进行扩增及整合子分类。方法：采用多重PCR对21株来自临床的耐药菌株进行了第一、二和三类整合酶基因（int Ⅰ）筛选。结果：16株携带第一类整合酶基因;1株携带第一和第二类整合酶基因;2株含第二类整合酶基因;1株含第三类整合酶基因;1株不含第一、二和三类整合酶基因。结论：筛选细菌耐药整合子基因分类的多重PCR方法简便可靠;整合子广泛存在于临床耐药细菌中。     

PCR检测HBV和HCV条件的优化

目的:探索早期诊断HBV和HCV的原理和新技术.方法:主要通过PCR反应条件的探索及改变PCR反应过程中Mg2 浓度、退火温度和改用不同的Taq DNA聚合酶,研究了HBV毒株前C区基因和HCV毒株C区核心蛋白.结果:在实验选择范围内,检测HBV病毒时, 4.0 mmol/L为最佳Mg2 浓度,61 ℃为最佳退火温度,天源公司的Taq DNA聚合酶灵敏性最高,对质粒浓度的要求达到10-9.当检测HCV病毒时, 1.5 mmol/L为最佳Mg2 浓度,59.7 ℃为最佳退火温度,天为时代公司的iTaq聚合酶灵敏性最高,对质粒浓度的要求达到10-4.     

正交设计法在结构防火试验中的应用

建筑防火设计中材料的高温性能主要通过试验的方法来进行。通过对大量的试块进行试验 ,总结出材料的高温性能。这种方法所需构件多 ,并且具有一定的随机性。本文通过在结构防火试验中引入正交设计法 ,大大减少构件的数量 ,并能进一步得出各因素以什么样的水平搭配起来 ,使构件性能良好     

正交设计在合成高吸水树脂中的应用

为制得在盐溶液中吸水倍率尽可能高,吸水后凝胶强度、分散性、表面干爽性、弹性等性能均好的高吸水树脂,在对丙烯酸与丙烯酰胺共聚合影响因素考察的基础上,运用正交设计法,用正交表L18(37)安排实验,分别找出了影响常压和加压下吸水率的诸因素的排列次序和各自的最佳条件.并在综合分析的基础上,得到了制备符合上述要求的高吸水树脂的制备条件,制得的高吸水树脂常压下吸水率为60g/g,与日本三洋公司样品接近,加压下的吸水率为18 g/g,比其高70%.     

正交试验设计法在水泥预分解炉设计中的应用

在分解炉计算机仿真试验平台进行仿真试验的基础上提出了正交试验设计方法,并以DD型分解炉为例进行了分解炉结构参数的优化设计,经过对试验结果的统计分析和方差分析,得到了影响显著性因子R1和优化结果：分解炉下喷口半径Rl=0．66m,分解炉的生料分解率平均提高1．3％．研究表明：分解炉的仿真试验与正交试验设计法相结合可有效地解决分解炉结构参数的优化设计问题。     

正交设计在欧洲菘蓝组织培养中的应用

以欧洲菘蓝下胚轴和子叶为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行了优化筛选.分析结果表明,6-BA和2,4-D的交互作用对下胚轴愈伤组织的诱导有显著影响,结合直观分析确定下胚轴的愈伤组织最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 mg.L-1(后同) 2,4-D 0.5;6-BA和NAA的交互作用对子叶愈伤组织诱导有极显著影响,结合直观分析确定子叶最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 NAA 0.2.在不同培养基对欧洲菘蓝愈伤组织分化能力的影响试验中,各种因子在所试浓度范围内的作用均不显著,有待进一步试验.根据直观分析我们认为MS 6-BA 2 NAA 1诱导的愈伤组织更有利于分化.不定芽在转移到MS NAA 0.5一个月后80%以上都能长出很好的根系.生根后的组培苗经过3天炼苗后移栽至花盆后80%以上可以存活.     

遗传算法参数的正交设计

遗传算法参数的设置问题一直是遗传算法中的重要研究课题之一。本文探索用正文法对遗传算法中的参数进行设置。     

基于正交设计方法的混输泵叶轮优化设计

以自主研发并取得外特性试验数据的第三代混输泵叶轮为基础,应用L_9(3~4)正交表,以混输泵增压和效率为考查指标,对混输泵叶轮进行4因素3水平的正交设计,获得9组参数组合.采用雷诺平均数值模拟方法,对正交设计中每种组合进行性能预测,分析得到一组最佳的参数组合作为优化后的叶轮参数,然后设计出与优化后叶轮配套的导叶,即得到一套优化后的增压单元设计参数.分别建立优化前后混输泵增压单元的计算流场,并对二者进行数值模拟计算.结果表明:优化后增压单元内流场特性相比优化前得到明显改善,增压提高约14.97%,效率增加约8.07%.     

基于正交设计的免疫克隆遗传算法

针对遗传算法存在早熟及局部搜索能力弱等问题,提出一种基于正交设计的免疫克隆遗传算法,将正交实验设计原理、免疫克隆理论以及标准遗传算法有效结合起来,增强算法的收敛速度和搜索精度。对算法进行了验证,表明该算法求解精度高出几个数量级,寻找到全局最优解的次数明显增加。     

基于虚拟样机技术的汽车操纵稳定性参数正交优化设计

以某型轿车底盘为研究对象,采用虚拟样机软件ADAMS建立整车多体动力学仿真模型;结合汽车操纵稳定性的客观定量评价标准,建立了直接生成操纵稳定性评价值的ADAMS函数;用ADAMS软件结合正交试验方法对整车操纵稳定性进行了虚拟正交优化设计。虚拟样机技术在车辆操纵稳定性参数正交优化中的应用,不仅使仿真模型与集中质量模型相比提高了精度,还分析出整车操纵稳定性的主要零部件影响因素,得到了最优的一组设计方案。由于是直接对具体零部件的优化,整个设计过程适于在企业中应用。     

ZnO薄膜的正交实验设计及其分析

采用溶胶-凝胶工艺在Si(111)衬底上制备了ZnO薄膜,考虑影响晶体质量的4个因素,应用正交实验法进行了工艺优化;利用X射线衍射仪对薄膜的晶体结构进行了分析讨论.结果表明,当陈化温度50℃、预处理温度200℃、退火温度650℃和Zn2+浓度0.35 mol/L时,ZnO薄膜的C轴择优取向度最高.     

正交试验法在自密实混凝土配合比设计中的应用研究

本文根据自密实混凝土流变性特点，筛理出影响流变性的8种主要因素，并按L27(3^13)正交试验表设计混凝土的配合比，经试验与优化分析，确定了多个强度等级的自密实混凝土适用配合比，并在复演性试验和工程应用中加以验证。