水稻中一个与花发育相关的MADS-box基因的表达检测

根据MADS－box基因的保守区结构，设计简并性引物，利用RT－PCR从水稻（Oryza sativa L.)中克隆到一个新的水稻MADS－box基因cDNA睛段，将它命名为FDRMADS5．该基因核苷酸序列851bp,编码160个氨基酸，有典型的植物MADS－box基因的结构，FDRMADS5的Southern分析，表明它为单拷贝基因，用Northern检测了FDRMADS5的表达情况，发现该基因除了在花中有表达外，在水稻的根尖和幼苗端中也有微量的表达，这一结果表明，水稻的MADS－box基因功能可能并不局限于控制花的发育。     

大肠癌相关新基因SNC 66在大肠癌组织及正常粘膜中表达的比较研究

分别采用RT－PCR的方法和RNA探针与mRNA原位分子杂交的技术，以β－actin为内对照，配对研究新基因SNC66在大肠癌组织和大肠粘膜中的表达与定位情况。结果表明，SNC66在大肠癌组织中的表达显著低于其在大肠粘膜中的表达，存在明显的表达降低或表达缺陷。SNC66在大肠粘膜中的表达以隐窝处最丰，越接近绒毛顶端表达越少，表明SNC66是一个表达行为类似免疫球蛋白基因的大肠癌负相关基因。     

BHIVgag—pol基因在MT—4细胞中的表达

以HIV－1 HXBc2毒株为遗传背景,通过DNA重组技术构建出嵌合有BIV R29gag-pol基因的重组病毒BHIV cDNA。BHIV cDNA经电转染导入人源细胞MT－4后,分别收集第1d到第7d的细胞和培养液上清进行检测。RT－PCR分析证实BHIV的gag基因已得到转录;反转录酶活性测定表明,BHIV中源于BIV的反转录酶已得到正确转录、翻译并加工成熟。这些结果说明重组病毒BHIV cDNA中HIV控制下的BIVgag-pol基因能够的MT－4细胞内正确表达。     

血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达

Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子。从胎盘组织中提取总RNA,根据已知canstatin基因序列,设计特异引物,应用RT－PCR方法扩增出该基因片段。DNA序列测定表明,与文献报道的该基因比较,核苷酸序列完全一致。将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体pPROEX-HTb中,在大肠杆菌E;coli BL21中经IPTG诱导获得了表达,表达量约占菌体总蛋白量的20％以上。     

一步法RT—PCR检测石蜡包埋滑膜肉瘤中SYT—SSX融合基因的表达

运用一步法RT－PCR技术检测14例石蜡包埋滑膜肉瘤组织中t(x;18）(p11.2;q11.2）染色体易位所致的融合基因SYT－SSXmRNA的表达,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤各一例做对照。结果表明,14例滑膜肉瘤中12例有SYT－SSX融合基因的表达（85．7％）,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤均有阴性。     

5种细胞周期调控基因在小鼠生殖细胞发育过程中的表达研究

 以成熟(10周龄以上)的昆明种正常小鼠的精巢和卵巢为材料,利用地高辛标记的基因探针进行组织切片上的DNA-mRNA分子原位杂交,研究了PCNA,cdc2,cyclin D1,p2 1和 p16 5种细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达.结果表明:PCNA基因在睾丸组织的精原细胞和精母细胞中有强杂交信号,而在雌性生殖细胞及滤泡细胞的发育过程都没有杂交信号;cyclin D1,cdc2,p2 1,p16基因在生殖细胞的发育过程中都没有,表明这些基因并没有参与小鼠生殖细胞的生长和分化调控.这些事实表明在生殖细胞发育过程中,控制细胞增殖和增殖抑制的基因与培养细胞有不同的机制,它们可能采用了不同的调控系统.     

PTEN基因在哈萨克族食管癌组织中的表达及意义

通过观察PTEN在哈萨克族食管癌癌组织及相应正常组织中的表达,探讨PTEN基因在哈萨克族食管癌发生中的作用。采用RT-PCR方法检测PTEN基因mRNA在36例哈萨克族食管癌及相应正常组织标本中的表达,选取mRNA水平差异组织标本,采用Western-bolt方法检测其蛋白水平的表达情况。结果显示,PTEN基因mRNA在36例癌组织中有30例表达,阳性率为83.33%。其中癌组织表达量高于相应正常组织(TN)21例,占70%;癌组织表达量等于相应正常组织(T=N)4例,占13.33%;癌组织表达量低于相应正常组织(TN)5例,占16.67%。PTEN基因mRNA在正常组织中表达仅有9例。癌组织与相应正常组织相比,PTEN基因的表达量明显增高。PTEN蛋白的表达在癌组织与相应正常组织中无明显差异。结果表明,PTEN基因的异常表达主要在转录水平,可能不是哈萨克族食管癌发生发展中的主导基因,其对哈萨克族食管癌发生发展过程中的具体作用有待进一步研究。     

发育调控基因Pax5 mRNA在膀胱癌中的表达及意义

了解发育调控基因Pax5在膀胱肿瘤中的表达,探讨其在膀胱肿瘤发生发展中的作用,采用逆转录PCR（RT－PCR）和Southern杂交方法检测13例膀胱移行细胞癌（TCC）组织、4例癌旁组织、3例正常组织和3种癌细胞系（膀胱移行细胞癌、结肠腺癌、肺癌）中Pax5mRNA的表达。结果显示,3种癌细胞系中均有Pax5mRNA表达;13例膀胱肿瘤组织和4例癌旁组织中Pax5mRNA阳性表达分别为10例和3例,阳性率为77％和75％。3例正常组织中仅有1例检出Pax5mRNA表达。Pax5基因在膀胱肿瘤组织中的表达提示Pax5调控通路可能在膀胱肿瘤发生发展中具有重要作用。     

2个水稻花发育相关MADS-box基因的全序列cDNA克隆及结构分析

一组具有MADS-box结构域的转录因子在控制花器官的诱导与发育中起着重要作用．以水稻广陆矮4号(Oryza sativa L．Guang-Lu—Ai No．4)幼穗总RNA为模板，根据MADS-box保守区的序列设计简并性引物。利用3′-RACE的方法获得了2个新的水稻花发育相关MADS-box基因，分别命名为FDRMADS3和FDRMADS4；并利用5′-RACE的方法获得了该2个基因完整的cDNA序列，包括完整的编码区，5′-UTR和3′-UTR．它们编码的蛋白质都具有典型的MADS-box结构域和半保守的K区，其与水稻中其他家族成员的MADS-box结构域同源性高达90％以上，这说明它们都是典型的MADS-box基因．     

Bax基因在不同组织细胞中的表达

Ｂａｘ基因在不同组织细胞中的表达陈亚兵，曾桂生，蔡毓，俞春东，陈华，温龙平（肿瘤细胞工程国家专业实验室）近年来，细胞编程死亡已成为细胞生物学研究的热点．细胞编程死亡是在组织、器官、系统发育成熟过程中发生的一种自杀性细胞死亡现象，无功能或老化细胞通过此...     

人血管内皮抑制素基因在毕赤甲醇酵母中的表达

对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F＇中,提取质粒测序,证实序列正确.再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组的人血管内皮抑制素蛋自在毕赤甲醇酵母KM71中获得了有效表达.     

实验性全脑缺血再灌流CNSbcl—2基因变化研究

目的 探讨ｂｃｌ－２基因表达在全脑缺血再灌流不同时间的变化规律。方法 本试验在对小鼠双侧颈总动脉阻断再灌流后１，３，７，１４，２８，４２ｄ分别取额叶皮层海马区脑组织，采用免疫组织化学染色，逆转录ＰＣＲ技术对ｂｃｌ－２基因表达进行检验。结果ｂｃｌ－２基因在正常神经细胞中有较弱表达，再灌流１ｄ后其表达开始增加，到７ｄ时达高峰并持续到１４ｄ，与对照组有显著差异（Ｐ〈０．０１）。结论 ｂｃｌ－２基因抑制     

人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达

用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１ ０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的 ３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性．     

全长人lrp基因及其截短和定点突变体真核表达载体的构建

为了对脂多糖应答基因（lrp）的功能进行深入的研究,实验用PCR及双PCR法扩增出lrp基因的截短体（lrp△C）和突变体（lrpm）序列,测序正确后将正常lrp基因及其截短体和突变体序列均连入真核表达载体pcDNA3．1（＋）,构建重组质粒pcDNA3．1（＋）-lrp、pcDNA3．1（＋）-lrp△C和pcDNA3．1（＋）-lrpm。DNA测序结果显示,PCR反应成功得到了lrp基因的截短体和突变体序列;重组质粒酶切鉴定结果显示：人lrp基因及其截短体、突变体成功连入了真核表达载体pcDNA3．1（＋）。     

人组氨酰-tRNA合成酶基因的克隆与表达

用RT-PCR方法从人胎盘总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,选用IMPACT-CN系统中的pTYB11,构建克隆与表达载体,转化大肠杆菌ER2566.经筛选与鉴定,得到3个阳性重组子,对其进行诱导表达获得Jo-1融合蛋白,western-blotting检验结果显示,该融合蛋白具有Jo-1免疫原性和免疫特异性.     

多重PCR技术分析日本对虾Marsupenaeus japonicus精巢和卵巢差异表达基因

通过多重PCR方法,对采用SSH(抑制消减杂交)技术制备日本对虾卵巢特异探针并筛选卵巢cDNA全长文库所获得的8个阳性克隆进行分析,研究这些新克隆的基因在精巢和卵巢的差异表达情况。这8个基因可分为二类,一类为卵巢特异表达的基因,一类为卵巢的表达量高于精巢的差异表达基因。     

植物基因差异表达的研究方法及进展

对目前在植物基因差异表达研究领域主要采用的消减杂交,DDRT-PCR,cDNA-RDA,cDNA-AFLP,SSH,基因芯片和SAGE等研究方法的原理、特点、研究进展以及发展趋势进行了综述.这些方法各有特点,可根据研究工作的需要选择合适的研究方法.