电穿孔法转染原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的条件优化

目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等.方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,选择不同的电压梯度、脉冲长度及DNA剂量,采用电转仪将pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,用荧光显微镜观察转染后不同时间pEGFP-N1瞬时表达情况及细胞存活情况,流式细胞仪检测其转染效率.结果:在电压为250v、脉冲数1、脉冲长度15μs、DNA质粒6μg时,电穿孔法将pEGFP-N1质粒导入瘢痕疙瘩成纤维细胞转染率最高,细胞存活率最高,转染后24h明显表达,48h后表达最强.结论:在适当的电压、脉冲长度下,选择适当的DNA用量,在转染后一定的时间范围内,电穿孔法转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少.电穿孔法是研究原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为较为理想的转染方法.     

慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞有效性的试验研究

目的:观察慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白(lenti-EGFP)通过两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞的有效性,为角膜疾病尤其是准分子激光术后角膜Haze形成的基因治疗提供实验基础.方法:Lenti-EGFP通过角膜基质注射和刮除角膜上皮敷贴带lenti-EGFP的棉片两种不同方法体内转染大鼠角膜基质细胞,转染后定期...     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养及生物学行为研究

目的:建立可靠的人瘢痕疙瘩成纤维细胞培养方法,为瘢痕疙瘩体外研究提供平台.方法:采用组织块贴壁法进行瘢痕疙瘩成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养;描述其生长曲线、分裂指数、形态及波形蛋白表达.结果:瘢痕疙瘩成纤维细胞培养成功率43%(6/14),48～65天可传第一代,以后每5～10天可传一代,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性.结论:培养出的瘢痕疙瘩成纤维细胞可用作体外实验研究.     

兔声带成纤维细胞的体外分离培养、鉴定与标记

目的探讨体外培养兔声带成纤维细胞(Vocal Fold Fibroblasts,VFFs)的培养及标记方法。方法消化培养法分离、培养兔声带成纤维细胞,倒置显微镜观察其生长和形态特征,并传代、鉴定。增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体(Ad-EGFP)标记体外培养的VFFs,取12只新西兰兔,以1×100万/0.1ml分别注入损伤模型左侧声带,观察注入VFFs的生长情况。结果兔声带成纤维细胞可以在体外原代和传代培养,具有成纤维细胞的典型形态。波形蛋白免疫荧光染色阳性,Ad-EFGP可以成功转染VFFs。将VFFs诸如声带后15d,组织学切片未发现成活细胞。结论用消化培养法可成功获得VFFs,Ad-EGFP是一种理想的示踪标记物。     

0.1 THz辐照对成纤维细胞迁移及细胞骨架的影响

近年来太赫兹技术的发展和广泛应用使得太赫兹的生物效应引起了人们的广泛关注。研究连续波0.1 THz对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3细胞迁移及细胞骨架的影响。采用划痕实验研究0.1 THz辐照对NIH3T3细胞迁移能力的影响,通过荧光染色的方法观察细胞骨架F-actin的形态,通过细胞免疫荧光染色方法检测细胞黏附相关蛋白Paxillin和E-cad-herin的表达水平。划痕实验结果表明,0.1 THz辐照能显著促进NIH3T3细胞迁移,增加细胞增值率;荧光染色结果表明,0.1 THz辐照能够改变NIH3T3细胞F-actin的形态,发生细胞收缩和变形;细胞免疫荧光染色发现,0.1 THz辐照显著降低细胞骨架相关蛋白Paxillin和E-cadherin的表达水平。0.1 THz辐照能够改变成纤维细胞NIH3T3细胞黏附状态,促进细胞迁移及增殖。     

慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的实验研究

目的：观察慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法：转染组用慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白（Lentivirus-enhanced green fluorescent proteins,Lenti-EGFP）转染细胞,对照组则加入空白培养液,在不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）及感染后不同时间段在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染率;RT-PCR检测EGFP mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞技术（Flow cytometer,FCM）检测病毒对细胞增殖和凋亡的影响。结果：Lenti-EGFP转染细胞后从48h开始可见绿色荧光,在MOI=500时,转染后第5天转染率可达51%;RT-PCR检测转染组有EGFP的mRNA表达;MTT结果显示在MOI为1~500时,漫病毒不影响细胞的增殖;在MOI=500时,FCM检测慢病毒载体对细胞凋亡无影响。结论：慢病毒载体可以在体外稳定有效转染兔角膜基质细胞且不影响细胞活性,是角膜基质细胞理想的基因转染载体。     

Nd:YAG激光照射对培养癜痕疙瘩成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨Nd：YAG激光诱导癜痕疙瘩成纤维细胞凋亡的机制。方法：以波长1064nm、功率密度100mW／cm^2的Nd：YAG激光照射培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用流式细胞仪测定细胞凋亡和Bcl-2,P53和survivin蛋白的表达。结果：在培养增生性瘢痕成纤维细胞有Bcl-2,P53和survivin蛋白低表达,Nd：YAG激光照射后,Bcl-2和survivin表达降低,P53的表达无变化。结论：Nd：YAG激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Bcl-2和survivin表达蛋白有关。     

扇贝多肽减轻中波紫外线诱导人真皮成纤维细胞损伤的超微结构研究

目的：观察扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)辐射损伤体外培养的人真皮成纤维细胞超微结构的影响。方法：建立单次UVB辐射损伤体外培养的人真皮成纤维细胞的病理模型,应用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果：模型组成纤维细胞超微结构在2h后即出现变化．包括胞内空泡形成、线粒体嵴断裂、基质空泡化、粗面内质网扩张、核异染色质浓缩及边集,呈现早期细胞凋亡改变。而用0．25％～l％的PCF预处理细胞30min,可减轻成纤维细胞受损的程度,且呈量效关系。结论：扇贝多肽可有效地保护人真皮成纤维细胞对抗UVB的辐射损伤。     

氯胺酮对He-Ne激光照射促人正常皮肤成纤维细胞增殖作用的影响

针对动物模型伤口的光生物调节作用，用He-Xe激光对人正常皮肤成纤维细胞增殖的促进作用作为细胞模型．研究了麻醉药氯胺酮的影响。用MTT法测定细胞增殖作用。分别研究了1．56mW／cm^2He—Ne激光(0，10，30，100和300s照射)对人正常皮肤成纤维细胞的增殖作用和氯胺酮(0，0．6，1．2和2．0μg／mL)预处理划He—Ne激光(300s照射)细胞增殖作用的影响。氯胺酮(0．6，1．2,2．0μg/mL)预处理能抑制468．7mJ／cm^2He—Ne激光促人正常皮肤成纤维细胞增殖的作用。这说明动物实验中用于麻醉的药物可能对激光促进伤口愈合的实验结果有影响。     

shRNA对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3及Ⅰ型胶原表达的影响

目的：构建抑制瘢痕成纤维细胞（keloid fibrobtast,KFB）Smad3基因表达的shRNA真核表达载体一研究Smad3 shRNA对KFBSmad3及Ⅰ型胶原（typ e I collagen,COLIA2）表达的影响：方法：用前期实验筛选出的1对最有效SiRNA重组构建Smad3shRNA表达质粒;通过脂质体介导的方法,将Smad3shRNA转染剑KFB,用RTPCR及Western blot的方法检测Smad3、COLIA2在不同时间点（0d至9d）表达的变化。结果：①重组质粒经酶切鉴定和测序、RT-PCR和westerll blot的结果均证实Smad3shRNA载体构建成功。②转染Smad3shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA蛋白表达都显著减低,到72h作用最强：光密度分析与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。COLIA2的mRNA与蛋白表达都明硅下降（P〈0．05）．结论：体外构建的shRNA-Smad3RNAi真核表达载体能显著抑制KFBSmad3的表达。并使其Ⅰ型胶原mRNA和蛋白水平表达出现相同的变化,提示Smad3 shRNA可能是改善皮肤创而愈合和抑制瘢痕增生一个新的治疗方向。     

PDT对SW480细胞和转染CD自杀基因的SW480结肠癌周期和凋亡的影响

目的:观察PDT对SW480细胞和转染CD自杀基因的SW480结肠癌细胞周期和凋亡的影响.方法:采用脂质体基因转移技术将CD基因转染SW480结肠癌细胞后,进行PDT处理,用流式细胞仪分析ALA-PDT结合CD/5Fc自杀基因系统对结肠癌细胞周期和凋亡的影响.结果:ALA-PDT可使SW480细胞G1,细胞比率明显降低,S期细胞比率升高;ALA-PDT不会增加SW480细胞凋亡.PDT与5-Fc结合对SW480-CD细胞各周期比率的影响与对照组相似,表明对各期细胞影响度相似;两种方法结合可以明显诱导SW480细胞凋亡.结论:静止期SW480细胞对PDT比较敏感,增殖期细胞相对不敏感.PDT与5-Fc结合对静止期和增殖期癌细胞均有杀伤作用,且可明显诱导细胞凋亡.     

Effect of deoxycholic acid on performance of dye-sensitized solar cell based on black dye

The effect of coadsorption with deoxycholic acid (DCA) on the performance of dye-sensitized solar cell (DSSC) based on [(C4H9)4N]3[Ru(Htcterpy)(NCS)3](tcterpy= 4,4′,4"-tricarboxy-2,2′:6′,2"-terpyridine), a socalled black dye, had been investigated. Results showed that the coadsorption of DCA with the black dye results in significant improvement in the photocurrent and mild increase in the photovoltage, which leads to an enhancement of overall power conversion efficiency by 9%. The enhancement of photocurrent was attributed to the increased efficiency of charge collection and/or electron injection. The coadsorption with DCA suppressed charge recombination and thus improved open-circuit photovoltage.     

TiO2纳米管阵列对染料敏化太阳能电池性能的影响

通过恒压阳极氧化法在Ti箔表面制备了结构规整的TiO2纳米管阵列,研究了氧化时间和退火温度对纳米管阵列的尺寸和晶体结构的影响。用制得的纳米管阵列电极组装了染料敏化太阳能电池(DSSC),研究了纳米管长度、退火温度和电极面积对DSSC光电性能的影响。结果表明,纳米管管径和壁厚均与氧化时间无关,而纳米管长度则随着氧化时间延长而增加。在450℃及更低温度退火时,纳米管中只出现锐钛矿相;而在500℃退火时,纳米管中则又出现了金红石相。由厚度为27μm、退火温度为450℃的纳米管阵列电极组装成的DSCC具有最佳的光电转化性能。DSCC的光电转化效率随电极面积的增加而降低。     

光动力作用对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡发生率的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用流式细胞仪检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率。结果 :光动力实验组人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率达 2 6.11± 2 .5 9% ,与对照组相比 ,差异非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用能有效诱导人膀胱癌细胞株BIU -87的凋亡发生。这可能是其抑癌作用机制之一。     

洋葱根冠外缘细胞编程性死亡过程中的超微结构研究

洋葱根冠外缘细胞在发育过程中发生细胞编程性死亡。用透射电镜观察结果表明,根据冠中部细胞（1）代谢活跃,中部两侧细胞（Ⅱ）逐渐粘液化同时表现出逐渐的液泡化过程,边缘1－3层细胞（Ⅲ）则表现出类似动物细胞编程性死亡的典型超微结构特征,该染色质凝聚在核膜边缘,胞质及细胞器表现出一种自噬作用,同时发现在动物细胞编程性死亡中未报道的核突起现象。     

Effect of electric field polarity on inter-poly dielectric during cell operation for the retention characteristics

Retention characteristic represents a capability to maintain the storage data and it is related with the reliability of memory device. The retention characteristic is degraded by the leakage of charges from a floating gate to a control gate, and thus the leakage current at low and moderate electric field of inter-poly dielectric (IPD) is one of the important characteristic for floating gate type flash memories. In addition, it is necessary to investigate the effects of the electric field polarity on the electric characteristics of IPD because the electric field polarity is changed as the cell operations such as the programming and erasing. Therefore, in this paper, the variation of the leakage current of IPD at moderate electric field region is measured with varying the previously applied electric field polarity. Based on the result, the effect of sequential change of an applied electric field polarity on the electrical characteristics is analyzed.     

光动力作用对人膀胱癌细胞株BIU-87增殖代谢活性的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用MTT法检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87增殖代谢活性。结果 :光动力实验组吸光密度值 (0 .1683± 0 .0 3 3 7)显著低于实验对照组 (0 .5 12 8± 0 .0 3 82、0 .7775± 0 .0 93 2、0 .72 2 3± 0 .0 3 5 5、0 .72 10± 0 .0 3 69) (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用降低了人膀胱癌细胞株BIU -87的增殖代谢活性 ,这可能是其抑癌作用机制之一。     

露蜂房蛋白对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞超微结构的影响

目的：观察中药露蜂房蛋白(NVP)成份对急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)超微结构的影响。方法：采用体外细胞培养,加入不同浓度露蜂房蛋白成分作用于AML患者BMMNC,培养72h收集细胞,常规制备超薄切片,透射电子显微镜下观察AML患者BMMNC的超微结构。结果：露蜂房蛋白各处理组细胞核染色质浓缩、边集,呈新月形或环状或细胞核碎裂呈块状。线粒体出现空泡样变及髓样变。结论：中药露蜂房蛋白成份有明显诱导AML患者体外培养BMMNC凋亡的作用,并呈现典型的细胞凋亡超微结构改变。