一种新型独特芋螺毒素的分离与结构鉴定

从中国南海的一种食虫芋螺独特芋螺(Conus caracteristicus)的毒液中分离得到一种新的芋螺毒素, 对其进行了结构鉴定和化学合成. 结果表明, 这是一种新的T-超家族芋螺毒素.     

α-芋螺毒素构效关系与分子设计

α-芋螺毒素(α-conotoxins)是从芋螺毒液中提取到的一类活性多肽. 与其它家族的芋螺毒素相比, 它们含二硫键少, 结构相对简单, 由于作用于神经肌肉接头的N-乙酰胆碱受体(nAChRs)的不同亚型, 拮抗乙酰胆碱, 可作为鉴定nAChRs亚型及其亚基的有效工具, 已成为芋螺毒素结构改造的最佳先导化合物. 利用HyperChem软件包的量子化学半经验方法AM1对8个具有代表性的α-芋螺毒素进行了量子化学计算, 研究了它们的电子结构及构效关系. 结果表明, 空间结构的相似性使它们作用于同一受体, 局部结构差异而导致的电子结构的较大差别是它们能作用于不同受体亚型的重要原因. 在此基础上, 以α-芋螺毒素GI为模型设计了7个类似物并进行了量子化学计算, 比较了类似物与GI在空间结构及电子结构方面的特征.     

新型桶形芋螺毒素BtIIIB的分离纯化、氨基酸序列测定及二硫键定位研究

采用凝胶色谱、高效液相色谱等方法从栖息于我国南海的桶形芋螺的毒液中纯化出一个新的芋螺毒素BtIIIB．采用氨基酸组成分析、质谱分析和Edman降解测定BtIIIB为15肽, 其氨基酸序列为: CCELPCHGCVPCCWP．结构中含有6个半胱氨酸, 形成3对分子内二硫键．采用部分还原的方法, 分步还原毒素中的二硫键, 用氰基化试剂衍生生成巯基, 然后在碱性条件下将衍生的产物进行裂解, 用MALDI-TOF MS测定裂解后片段的分子量, 确定了其二硫键的配对方式为Cys¹-Cys¹³, Cys²-Cys⁹, Cys⁶-Cys¹²的部分交叉式结构, 是芋螺毒素中比较特别的配对方式．     

半胱氨酸肽片段连接法合成ω-芋螺毒素MVIIA

ω-芋螺毒素MVIIA是已上市的镇痛药Ziconotide的有效成分.采用标准Fmoc保护策略在聚苯乙烯树脂上合成ω-MVIIA比较困难,是固相合成中的困难肽.本研究将ω-MVIIA分为N-端15肽硫酯和C-端10肽两个片段采用标准Fmoc保护策略分别合成,再通过半胱氨酸肽片段连接得到全长的ω-芋螺毒素MVIIA肽链.该方法提高了合成ω-芋螺毒素MVIIA产率.该研究为困难肽的合成提供了较好的参考方法.     

新型桶形芋螺毒素BtIIIB的分离纯化、氨基酸序列测定及二硫键定位研究

采用凝胶色谱、高效液相色谱等方法从栖息于我国南海的桶形芋螺的毒液中纯化出一个新的芋螺毒素BtIIIB.采用氨基酸组成分析、质谱分析和Edman降解测定BtIIIB为15肽,其氨基酸序列为:CCELPCHGCVPCCWP.结构中含有6个半胱氨酸,形成3对分子内二硫键.采用部分还原的方法,分步还原毒素中的二硫键,用氰基化试剂衍生生成巯基,然后在碱性条件下将衍生的产物进行裂解,用MALDI-TOFMS测定裂解后片段的分子量,确定了其二硫键的配对方式为Cys1-Cys13,Cys2-Cys9,Cys6-Cys12的部分交叉式结构,是芋螺毒素中比较特别的配对方式.     

ω-芋螺毒素的定量构效关系与虚拟筛选

ω-芋螺毒素属于海洋生物活性多肽,由24-31个氨基酸残基组成.特异性作用于电压敏感的钙离子通道(VGCCs),能够直接开发成药物或作为先导化合物进行新药开发.本文应用新型氨基酸残基结构描述符cscales和遗传偏最小二乘算法,对ω-芋螺毒素进行定量构效关系(QSAR)研究,并设计、构建了容量为2244个化合物的N-型和P/Q-型VGCC拮抗剂虚拟组合多肽库,然后分别采用QSAR模型预测和相似性搜索方法对组合多肽库进行了虚拟筛选.研究结果表明,建立的N-型和P/Q-型VGCC拮抗剂QSAR模型均具有较好的预测能力,交叉验证相关系数(CV-r2)均大于0.89.主成分分析和聚类分析结果表明,虚拟组合多肽库中化合物具有较好的结构多样性和差异性.通过虚拟筛选,得到了具有高预测活性的6个N-型和19个P/Q-型钙离子通道拮抗剂,为进一步的合成和活性评价奠定了理论基础.同时,本文建立的多肽QSAR预测模型和虚拟筛选策略,为其它多肽类化合物的定量构效关系研究和虚拟筛选提供了参考.     

新型桶形芋螺毒素BtⅢB的分离纯化、氨基酸序列测定及二硫键定位研究

采用凝胶色谱、高效液相色谱等方法从栖息于我国南海的桶形芋螺的毒液中纯化出一个新的芋螺毒素BtⅢB.采用氨基酸组成分析、质谱分析和Ednan降解测定BtⅢB为15肽,其氨基酸序列为:CCELPCHGCVPCCWP.结构中含有6个半胱氨酸,形成3对分子内二硫键.采用部分还原的方法,分步还原毒素中的二硫键,用氰基化试剂衍生生成巯基,然后在碱性条件下将衍生的产物进行裂解,用MALDI-TOF MS测定裂解后片段的分子量,确定了其二硫键的配对方式为Cys1-Cys13,Cys2-Cys9,Cys6-Cys12的部分交叉式结构,是芋螺毒素中比较特别的配对方式.     

ω-芋螺毒素的定量构效关系与虚拟筛选

ω-芋螺毒素属于海洋生物活性多肽, 由24-31 个氨基酸残基组成. 特异性作用于电压敏感的钙离子通道(VGCCs), 能够直接开发成药物或作为先导化合物进行新药开发. 本文应用新型氨基酸残基结构描述符cscales和遗传偏最小二乘算法, 对ω-芋螺毒素进行定量构效关系(QSAR)研究, 并设计、构建了容量为2244 个化合物的N-型和P/Q-型VGCC拮抗剂虚拟组合多肽库, 然后分别采用QSAR模型预测和相似性搜索方法对组合多肽库进行了虚拟筛选. 研究结果表明, 建立的N-型和P/Q-型VGCC拮抗剂QSAR模型均具有较好的预测能力, 交叉验证相关系数(CV-r²)均大于0.89. 主成分分析和聚类分析结果表明, 虚拟组合多肽库中化合物具有较好的结构多样性和差异性. 通过虚拟筛选, 得到了具有高预测活性的6 个N-型和19 个P/Q-型钙离子通道拮抗剂, 为进一步的合成和活性评价奠定了理论基础. 同时, 本文建立的多肽QSAR预测模型和虚拟筛选策略, 为其它多肽类化合物的定量构效关系研究和虚拟筛选提供了参考.     

μ-芋螺毒素及其类似物的定量构效关系研究

μ-芋螺毒素是肌肉型钠离子通道的专一性阻断剂,本文主要采用PLS（PartialLeastSquare）多元数学分析方法对μ-芋螺毒素及其17个类似物进行了定量构效关系研究,建立了QSAR模型,其模型的交叉验证值R2＝0．813,Y实验值与Y预测值的相关系数0．903．计算结果表明,对分子活性影响比较大的是13位精氨酸残基和分子中的电荷变化,增加分子的正电荷,将提高分子的活性,其次是19,2,12,9,和17位氨基酸残基．     

一种新型萤光增强稳定剂的探讨

DNS-CI(N,N-二甲基а萘胺-5-磺酰氯)可以做为标定试剂测定农药。本文介绍一种对增强、稳定DNS-化合物的萤光更有效的方法,可以使得目测检测限达到毫微克数量级,在没有大型仪器的实验室也可以开展微量分析。用DNS-Cl将农药西维因、速灭威、叶弹散、异丙隆、邻异丙隆、莎扑隆、绿麦隆、拌种灵、胺草磷、除草     

New Textile Applications of Cyclodextrins

New areas of applications of cyclodextrins with textiles are possible. The abilityof cyclodextrins to form inclusion complexes can be used, e.g., to remove malodorfrom textile materials. The permanent fixation of cyclodextrins offers new textileswith interesting properties. Thus the formation of body odor is reduced by thecomplexation of the organic compounds of sweat. The release of perfumes fromcyclodextrins is possible by the use of textiles with fixed cyclodextrins. Pharmaceutical compounds are also set free in contact with the skin. Last but not least the analysis of the different compounds of the human sweat complexed by the cyclodextrins offers new possibilities in medical diagnostics.     

一种新型的涂丝钙离子场效应敏感器件

从1970年以来,不少学者对场效应敏感器件(简称ISFET)做了研究^[1-4],本文作者利用二-(二异辛基苯基磷酸)钙为电活性物质研制成Ca²⁺-ISFET,并测定了器件的各项性能参数。     

以甲壳素制备亚麻织物防皱整理剂

以甲壳素制备亚麻织物防皱整理剂蔡伟民，唐冬雁，徐菲，王健伶，王民安（哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨１５０００６）（黑龙江省劳动保护科学技术研究所哈尔滨）关键词甲壳素，亚麻织物，防皱整理剂甲壳素是以乙二醛作为交联剂进行织物整理的．醛交联的壳聚糖（ＣＴＡ...     

A Ca2+-phospholipid-dependent protein kinase from cottonplant shoots

The Ca²⁺-phospholipid-dependent protein kinase from cottonplant shoots was purified by chromatography on DEAE-Sepharose CL-6B, and then on phenyl-Sepharose CL-4B. According to electrophoresis in PAAG, the enzyme was practically homogeneous and had a molecular mass of 57 kDa. In the presence of Ca²⁺ alone, the enzyme was activated to only a slight degree. Under the combined action of Ca²⁺ and a phospholipid the action of the enzyme rose severalfold. A determination of amino acid specificity showed that the protein kinase isolated was a serine- and threonine-specific protein kinase.A. S. Sadykov Institute of Bioorganic Chemistry, Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan, Tashkent, fax 627071. Translated from Khimiya Prirodnykh Soedinenii, No. 1, pp. 100–105, January–February, 1994.     

Probing peptide libraries from Conus achatinus using mass spectrometry and cDNA sequencing: identification of delta and omega-conotoxins

The peptide library present in the venom of the piscivorous marine snail Conus achatinus has been probed using a combination of mass spectrometry and cDNA sequencing methods. Matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDI-MS) analysis, before and following global reduction/alkylation of peptide mixtures, permits the rapid classification of individual components on the basis of the number of disulfide bonds. Mass fingerprinting and the reverse phase HPLC retention times permit a further deconvolution of the library in terms of peptide size and hydrophobicity. Sequencing of cDNA derived using O-superfamily specific primers yielded five complete conotoxin precursor sequences, ranging in polypeptide length from 75-87 residues containing six Cys residues at the C-terminus. Sequence analysis permits classification of the five putative mature peptides (Ac 6.1 to Ac 6.5) as delta, omega, and omega-like conotoxins. The presence of these predicted peptides in crude venom was established by direct matrix assisted laser desorption ionization tandem mass spectrometry (MALDI-MS/MS) sequencing following trypsin digestion of the peptide mixture after global reduction/alkylation. The determination of partial peptide sequences and comparison with the predicted sequences resulted in the identification of four of the five predicted conotoxins. The characterization of posttranslationally modified analogs, which are hydroxylated at proline or amidated at the C-terminus is also demonstrated. Crude venom analysis should prove powerful in studying both inter- and intra-species variation in peptide libraries.     

基于电化学电容检测的新型钙离子传感器

通过金-硫共价键,将巯基十六羧酸以自组装的方式固定到金电极表面。再通过EDC、NHS的活化作用,对钙调蛋白的氨基与巯基十六羧酸暴露于自组装层外的羧基进行共价键和,从而将钙调蛋白固定到电极表面,制成一种新型的钙离子电容传感器。首先对传感器进行了等效电路分析,并分别考察了不同浓度电解质溶液对基底电容的影响,确定了进行实验所需的合适电解质浓度。用本实验室自行开发研制的电化学电容分析仪研究了该传感器对钙离子的响应能力,并进一步考察了其再生能力及稳定性。实验结果表明,在10-8~3×10-6mol/L的较宽范围内,钙离子浓度的对数值与总电容信号值之间呈线性关系,而且检出限可以达到10-9mol/L。制备好的传感器浸泡在0.02 mol/L,pH 7.0的磷酸缓冲溶液中在4℃冰箱中可以保存一个月而其对钙离子的响应能力未发现有显著的下降,说明其具有良好的稳定性。使用过的传感器用EDTA进行再生后基底电容的变化不超过0.3%,说明其具有良好的再生可逆性,可以被重复利用。本工作为对钙离子进行定量检测提供了一种新方法。     

白术多糖的分离纯化与结构表征

采用UV, IR, NMR, GC-MS, 高碘酸氧化和Smith降解等物理化学方法对从白术根茎提取的白术多糖的纯度、理化性质和结构进行了表征. 以中药白术的根茎为原料, 通过热水(80 ℃)浸提和乙醇醇沉得到粗多糖, 再经DEAE-52阴离子交换柱层析分离和Sephadex G-200凝胶柱层析纯化, 得到一种水溶性的白术多糖(WAM). 经高效液相色谱(HPLC)分析, 多糖WAM是分子量约为3263的均一多糖. GC分析表明, WAM是由葡萄糖和半乳糖以摩尔比3.01:1构成的杂多糖. 甲基化分析、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解、NMR和IR等分析结果表明, WAM具有多分支结构, 主链由β-D-1→3和β-D-1→3,6吡喃葡萄糖构成, 每个重复单元具有一个支链, 支链由β-D-半乳糖构成, 连接在主链葡萄糖的6位碳原子上.     

全细胞膜片钳法研究铜对急性分离大鼠海马细胞钾电流的影响

Using the whole cell patch clamp technique, the effect of Cu^2＋on transient outward K^＋current （/to） and delayed rectifier K^＋ current （Idr） was studied in acutely isolated rat hippocampal neurons.Ito and Idr were increased when the concentration of Cu^2＋ was lower than 2 × 10^-5 and 10^-5 tool/L, respectively, and increased ratio was decreased with increasing Cu^2＋concentration in the bath solutions. When the concentration continued to increase to 5× 10^-5 and 2 × 10^- 5 mol/L, the currents were hardly changed, while the concentration was more than 10^-4 and 5 × 10^-5 mol/L, the currents were inhibited remarkably. Cu^2＋ （10^-5 mol/L） did not affect the activation and inactivation process of Ito. The activation curve of Idr was shifted toward positive potential, but 10^-5 mol/L Cu^2＋did not affect slope factor. According to these results, it was considered that Cu^2＋at low concentration in the bath solution could promote Ito and Idr while at high concentration could inhibit them, and change of amplitude was different with different membrane voltage. Conclusion was drawn： Cu^2＋may be involved in the pathophysiologic mechanism of diseases with neuropathological components.     

新型钙荧光探针在H2O2对HL-60胞浆钙影响研究中的应用

采用H2O2、黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶、H2O2/抗坏血酸/Fe^2＋（或H2O2/Fe^＋）、H2O2和辣根过氧化酶（HRP）等不同活性氧产生体系,对自行合成的胞浆特异性钙荧光探针STDIn的活性氧耐受性进行了考察.以STDIn-AM为探针标记HL-60细胞,激光共聚焦技术检测单细胞内Ca^2＋-STDIn荧光强度的变化;探讨了不同浓度的H2O2对胞内Ca^2＋浓度变化的影响,从膜结构和生物信号传导的角度研究了氧自由基对培养细胞的生物效应.