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固定化酶反应器在高效液相色谱分析中的应用 总被引:1,自引:1,他引:1
高效液相色谱法(HPLC)是分离含多组分的复杂体系的最有效手段之一,但检测体系的灵敏度总不能令人满意。折光率检测器通用,但灵敏度不高;紫外、荧光、电化学检测器要求化合物须有生色团、荧光团和电活性基团。近年来,柱前和柱后标记方法发展较快,扩大了这些检测器的应用范围。在标记方 相似文献
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高效液相色谱-柱后化学发光法检测人体尿液中的卡托普利 总被引:1,自引:0,他引:1
在酸性条件下,Ce?氧化Ru(bipy)32+生成Ru(bipy)33+,同时氧化卡托普利生成二硫化物中间活性态([RS-SR]*),Ru(bipy)33+和二硫化物中间活性态之间相互反应产生强烈的化学发光。基于此,根据发光试剂Ru(bipy)32+水溶性好、试剂稳定等特点,将其加入到流动相中,通过高效液相色谱分离,建立了柱后化学发光快速灵敏检测卡托普利的方法。在以甲醇-0.01mol/L KH2PO4-1g/L Ru(bipy)32+(80∶20∶2,V/V)为流动相,流速为0.9mL/min,8.0×10-4 mol/L Ce?的优化实验条件下,方法的线性范围为2.0×10-7~1.0×10-4 mol/L(R2=0.9988),检出限为6.0×10-8 mol/L(S/N=3),并对1×10-5 mol/L卡托普利平行测定11次,相对标准偏差(RSD)为1.8%。将本方法用于人体尿液中卡托普利含量的测定,结果令人满意。结合化学发光光谱,对该体系发光机理进行了探讨。 相似文献
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高效制备液相色谱柱技术的研究进展 总被引:16,自引:0,他引:16
本文概述了高效制备液相色谱柱的柱型结构、填料以及柱填充方法等研究的最新进展,讨论了制备柱与分析柱的不同特征,对目前普遍使用的压缩型制备柱的类型、结构及填充方法作了较为全面的评述,总结比较了工业化制备色谱填料不同于分析色谱填料的特点,探讨了高效制备液相色谱柱技术的应用和发展前景. 相似文献
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环糊精(Cyclodextrin,简称CD)是由吡啶喃葡糖与α-1,4-葡糖苷反应生成的环状低聚糖。环糊精的口袋结构和疏水性内腔能包结不同的化合物。这种包结作用被广泛利用在分析化学中。本文介绍三种β- 相似文献
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分别对反相、正相、离子交换、体积排阻及亲和等色谱柱的清洗与再生方法加以系统综述.使用适当的方法对受污染的色谱柱进行清洗与再生,可恢复其部分分离能力,延长使用寿命.对硅胶基质反相色谱柱,可选择一系列溶剂,按洗脱能力逐渐增强的顺序依次冲洗,或者使用二甲基甲酰胺、乙酰丙酮、SDS及盐酸胍等强洗脱试剂清洗;硅胶基质正相色谱柱用极性逐渐增强的溶剂系统冲洗;有机聚合物、石墨碳及氧化锆固定相色谱柱,用稀酸、稀碱和有机溶剂结合清洗,可将受污染的色谱柱柱效提高50%以上. 相似文献
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聚硅氧烷涂敷的反相高效液相色谱固定相 总被引:5,自引:1,他引:5
用甲基乙烯基聚硅氧烷涂敷于硅烷化的微粒硅胶上,制备出一种新型的涂敷型反相高效液相色谱固定相。该固定相对极性、非极性和碱性化合物均有良好的分离能力,峰对称性好。对其恶性循环 了考察,连续使用三个月后,固定相的碳量和色谱性能仍保持不变。 相似文献
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提出了用Ni(Ⅱ)处理10μm强酸型阳离子交换剂Partisil-10SCX再吸附葡萄糖氧化酶以制备固定化酶的新方法。酶的吸附和固定化酶的活性较一般的物理吸附有明显的改善。由此制得的固定化酶柱后反应器接入微型高效液相色谱-电化学检测体系进行了血清和全血中葡萄糖含量的测定,并实现了葡萄糖和尿酸的同时检测。 相似文献
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以甲醇或甲醇与水作流动相,ODS为固定相,测定环己酮的多种过氧化物。平均回收率100.2%~101.6%,测定的相对标准偏差为1.02%~2.51%。 相似文献
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《Analytical letters》2012,45(3):323-332
Abstract A Selective and sensitive assay of hypoxyanthine, xanthine and inosine by reversed-phase liquid chromatography coupled with immobilized enzyme reactors is described. The flourometric detection of hydrogen peroxide using immobilized peroxidase and p-hydroxyphenylacetic acid was applied to the assay of hypoxanthine, xanthine and inosine, which were oxidized to hydrogen peroxide in the presence of the immobilized enzymes (purine nucleoside phosphorylase and/or xanthine oxidase. The enzymes were immobilized the the intermolecular cross-linking method on controlled pore-glass. The method established was applied to serum and urine samples. The detection limits of hypoxanthine, xanthine and inosine were approximately 130, 300 and 650 pg per injection, respectively. 相似文献
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以石英毛细管作为酶固定化的载体, 在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM), 再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上, 并对酶固定化条件进行了优化, 制备了多层酶反应器. 利用该酶反应器对马心细胞色素C等蛋白质进行了酶切, 并对酶切的条件进行了优化. 实验结果表明, 该固定化酶反应器具有较高的酶切效率、良好的重现性和稳定性, 可用于蛋白质组学的研究. 相似文献
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电渗泵在微柱液相上的应用 总被引:6,自引:0,他引:6
设计评价了一种能够取代机械泵的电渗泵 (EOP) ,该泵可以产生 2 0MPa~ 6 0MPa的输出压力和几十nL/min~ 3μL/min的输出流量 ;用乙腈 水作为流动相 ,在 14cm× 32 0 μmi d (C18,5 μm )微柱上分离了萘、蒽、菲3种物质的混合试样 ,证明EOP在微柱液相领域有广阔的应用前景。 相似文献
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固定化谷氨酸脱羧酶柱式反应器测定L-谷氨酸 总被引:1,自引:0,他引:1
用羧甲基化的N,N’-甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖(简称CM-CADB)凝胶树脂为新型载体,研究了谷氨酸脱羧酶(GDC)在CM-CADB上的固定化与环境的依赖关系.确定了酶固定化最佳条件,研究了固定化GDC的活性与底物浓度、pH、温度的依存性,动态响应特性,热稳定性和寿命,求算了米氏常数.将固定化GDC酶柱与进样系统具CO_2气敏电极的离子活度分析器-计算机数据采集系统匹配,构成酶反应谷氨酸检测装置,测定了固定化GDC酶柱的能斯特线性响应曲线,线性回归方程为y=43.3x+181.6,r为0.9936. 相似文献
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一种金属螯合连续棒色谱柱的制备及色谱性能 总被引:4,自引:0,他引:4
金属螯合色谱(IMAC)在生物大分子的分离和纯化中有广泛的应用,通过改变IMAC的洗脱条件和被螯合的金属离子种类,生物大分子可获得选择性分离。目前,IMAC通常以有机和无机微球作固定相,由于柱死体积的存在,使色谱柱空间利用率低,且降低了蛋白质分离的柱效。近年报道的连续棒色谱柱是由直径1μm左右的微粒堆积而成的整体,消除了色谱柱的死体积,该类色谱柱用于蛋白的反相、疏水、离子交换和亲和色谱分离均可获得高的分离效率。然而,至今尚未见到对金属螯合连续棒色谱柱制备及应用的研究报道。对蛋白的IMAC分离机理研究中,研究流动相pH对分离的影响是主要手段之一,但通常研究的pH值的5.0-9.0的窄范围内。本文提出和制备了以交联聚甲基丙烯酸缩水甘油酯连续棒为基质的金属螯合色谱柱,并研究了pH在2.0-11.0的较宽范围内对蛋白保留的影响。 相似文献