凝血酶时间法测定家兔血浆中重组水蛭素

建立了凝血酶时间(thromb in tim e,TT)法测定国产重组水蛭素血药浓度的方法,以便为进一步研究该药在家兔体内的药物代谢动力学提供方法学基础。重组水蛭素血浆水平依其抗凝血酶活性(TT延长)予以测定。对该法的影响因素进行了探讨,最适测定条件确定为5 U/mL的凝血酶溶液,0.1 mol/L pH 7.4的Tris-HCL缓冲液及血浆各50μL;结果发现对凝血酶时间延长百分率的对数与浓度呈线性相关,r为0.98~0.99;线性范围为0.12~0.60 mg/L,定量限为0.12 mg/L。日内和日间精密度(RSD)分别为5.6%~9.1%和9.2%~11.5%;方法回收率97.5%~99.2%;超出线性范围的高浓度血浆样品作2~100倍稀释,其稀释回收率为92.4%~94.8%。血浆样品在-20℃冰冻保存,至少1星期内稳定。应用本方法测定家兔iv重组水蛭素2.0 mg/kg后不同时间血药浓度,表明该药符合二室模型、一级动力学过程。     

应用基质辅助激光解吸质谱快速分析重组水蛭素产物的纯度与分子量

利用MALDI－TOF－MS测定了具有抗凝血活性的水蛭素基因重组产物（rHV-2)的纯度和分子量，实验测定结果与理论计算值一致，证明此基因重组产物的一级结构是正确，在表达，复性和纯化的过程中没有氨基酸的选择，变异和修饰。     

小鼠血浆中染料木素水溶性代谢产物和染料木素脂肪酸酯的分离及测定

本文建立了小鼠灌胃染料木素单体后血浆中水溶性染料木素代谢产物和染料木素脂肪酸酯的分离及测定方法。血浆样品经乙酸乙酯萃取后上Sephadex LH-20柱,分别用体积比1∶1的正己烷/氯仿和甲醇洗脱,染料木素脂肪酸酯用脂肪酶酶解后转化成染料木素,水溶性代谢产物用葡萄糖醛酸酶及硫酸酯酶水解成染料木素,然后采用液相色谱串联飞行时间质谱(Q-TOF LC/MS)检测染料木素。血浆中染料木素在10～10000 ng/mL范围内线性关系良好,检测限为1 ng/mL。10批次小鼠血浆中水溶性代谢产物平均为526.006 ng/mL,染料木素脂肪酸酯平均为58.976 ng/mL。采用SephadexLH-20柱具有良好的分离效果,脂肪酶水解染料木素脂肪酸酯稳定、专一性强,用Q-TOF LC/MS检测染料木素快速、灵敏。     

薄层扫描法测定槐角及槐角丸中染料木苷和总染料木素的含量

槐角(Fructus Sophorae)为豆科植物的干燥成熟果实,冬天采收,有人工栽培和野生,全国大部分地区有生产.槐角丸是由槐角、黄芩、枳壳、防风、当归、地榆组成的常用中成药,具有清肠疏风、凉血止血的功效.槐角在处方中是君药,而染料木素、染料木苷为槐角的主要成分,具有极强的抗癌活性、抗繁殖性、抗氧化性、抗菌和消炎作用.关于槐角丸的有效成分测定方法主要有紫外分光光度法测总黄酮,薄层色谱法测定芦丁和黄芩苷,高效液相色谱测定黄芩苷和测定染料木素.本文在硅胶G薄层色谱板上,采用双波长薄层扫描法建立了测定槐角、槐角丸中的染料木苷和总染料木素的分析方法.染料木苷和染料木素的薄层展开剂分别为三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(2574)和三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(1510.1),染料木苷和染料木素分别在0.5～3.0 μg和0.9～5.0μg范围内呈良好线性.该方法快速、简便,为中药槐角和中成药槐角丸的质量控制提供科学依据.     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定血液与尿液中赛拉嗪及代谢产物2,6-二甲基苯胺

建立了一种超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱同时测定血液和尿液中赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺的分析方法。样品经乙酸乙酯-正己烷(1∶1,体积比)提取,C18色谱柱分离,电喷雾正电离条件下进行全离子扫描模式检测。借助分析软件,通过对化合物离子精确质荷比、同位素轮廓丰度、特征二级质谱以及保留时间的比对,对目标物进行验证。方法的回收率为72.5%~87.8%,相对标准偏差为6.8%~9.7%。赛拉嗪在血液和尿液中的检出限分别为0.2,0.1μg/L,定量下限分别为0.6,0.3μg/L;2,6-二甲基苯胺在血液和尿液中的检出限分别为0.5,0.3μg/L,定量下限分别为1.5,1.0μg/L。方法快速、灵敏度高、重现性好,适用于中毒人体的血液和尿液中赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺的检测。     

一种基于适配分子的偏振荧光检测法

凝血酶适配分子（aptamer)可与凝血酶以高亲和力结合，二者的结合可改变荧光素标记的适配分子溶液的荧光偏振强度，据此建立了适配分子荧光偏振法测定血酶的新方法。方法的线性范围是0.1-4IU/mL；检出限为0.09IU/mL。将该方法用于人体血浆中凝血酶含量分析，结果满意。     

基于聚集诱导荧光性质的免标记DNA四链体检测以及凝血酶的传感研究

基于带正电荷硅杂环戊二烯衍生物的聚集诱导荧光性质,利用其与富含G的单链DNA和四链体作用后的荧光强度差别,发展了一种免标记的DNA四链体检测方法,并将该方法应用于凝血酶的荧光分析.     

高灵敏选择性检测凝血酶的适体纳米银共振散射光谱探针

采用四氢硼钠制备了较稳定的纳米银,并用凝血酶(TB)适体修饰纳米银制各了识别凝血酶的适体纳米银探针.在pH 7.0的Tris-HCl缓冲溶液及KCl存在下,适体纳米银探针与凝血酶特异结合生成G-四分体和纳米银聚集体,导致体系在480 nm处的共振散射峰增强.随着凝血酶浓度的增大,生成的纳米银聚集体越多,共振散射强度线性...     

非标记凝血酶阵列电化学适体传感器的研究

基于自制的集成化三阵列金膜电极,构建了一个简单、灵敏、非标记的凝血酶阵列电化学适体传感器。以聚乙烯不干胶掩膜版法结合金属溅射沉积技术,在FR-4玻璃纤维板上制作了由3个金膜工作电极、1个大面积金膜对电极和1个厚膜Ag/AgCl参比电极构成的集成化金膜阵列电极系统。以集成化金膜阵列电极作为基础电极,采用巯基自组装技术将带巯基的凝血酶适体固定在3个金工作电极表面,巯基己醇封闭后获得三阵列凝血酶适体传感器,以电活性物质铁氰化钾作为电化学探针,基于凝血酶适体和凝血酶结合前后铁氰化钾在电极表面传质的不同导致电流变化进行凝血酶的测定。采用方波脉冲伏安法,铁氰化钾氧化峰电流的变化值与凝血酶浓度在 1.52~63 nmol/L范围内呈良好的线性关系,检出限(S/N=3)为0.92 nmol/L。     

The Determination of Ioglycamic Acid in Bile and in Urine by High Performance Liquid Chromatography

Abstract

A fast, simple and specific method for the determination of ioglycamic acid in bile and in urine is described. Reversed-phase ion-pair chromatography with methanol-water (67.5: 32.5) in the presence of the counter ion tetrabutyl-ammonium phosphate as the mobile phase separates ioglycamic acid in 5 min at a flow rate of 1 ml/min. Under the same conditions urinary creatinine can be simultaneously determined and may be used as an endogenous internal standard. Bile and urine from a healthy subject were screened for possible metabolites but these are not detected.     

Metabolites of A Novel Antibiotic Bitespiramycin in Rat Urine and Bile

A sensitive analytical method to identify active metabolites of bitespiramycin in rat urine and bile was developed by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry(LC/ESI-MS^n).Bitespiramycin and its major active metabolites in rat urine and bile were isolated and identified as M1 serial(spiramycin Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ),M2 serial(platenomycin A1,josamycin and leucomycin A1) and M3 serial(deisovalerylplatenomycin A1,deisovaleryljosamycin,deisovalerylleucomycin A1).     

尿中磺酸化胆汁酸的流动注射固定化酶化学发光法

肝胆系统有疾患，会导致尿中磺酸化胆汁酸浓度的增加。根据尿中磺酸化胆汁酸的浓度可以判断肝脏机能是否正常。基于流动注射分析原理，利用化学发光法和固定化酶反应，建立了一个新的尿中磺酸化胆汁酸的临床快速分析法。进样量为20μL；分析速度30样/h；检出限为0.1μmol/L；RSD小于2.2%；线性范围在0.1-12μmol/L之内。     

A Sensitive and Selective LC-MS Method for the Determination of Lurasidone in Rat Plasma,Bile, and Urine

A liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) assay was developed and validated for the quantification of lurasidone, an atypical antipsychotic drug, in rat plasma, bile, and urine. Rat plasma, bile, or urine samples were processed by liquid–liquid extraction and injected onto an LC-MS system for the quantification of lurasidone and ziprasidone (an internal standard). Lurasidone and ziprasidone were separated from endogenous substances using a Gemini C6-Phenyl column with mixture of acetonitrile and 0.1 % formic acid (80:20, v/v) as the mobile phase. Quantification was performed using the selected ion monitoring mode at m/z 493 for lurasidone and m/z 413 for the IS. The detector response was specific and linear for lurasidone in the concentration range 5–5,000 ng mL⁻¹ The intra- and inter-day accuracy and precision of the method were determined to be within the acceptable criteria for assay validation guidelines. In addition, lurasidone was stable under a variety of processing and handling conditions. Lurasidone concentrations could be readily measured in rat plasma, bile, and urine samples up to 24 h after an intravenous or oral administration, suggesting that the assay can be used in pharmacokinetic studies of lurasidone in rats.

     

采用超低场生物力谱技术研究核酸适配体与凝血酶蛋白的相互作用

蛋白质和核酸是构成生命体最为重要的两类生物大分子,它们之间的相互作用是分子生物学研究的中心问题之一,也是许多生命活动的重要组成部分。本文基于一种全新的超低场生物力谱技术,以凝血酶蛋白为研究对象,考察了凝血酶与其对应的核酸适配体之间的相互作用。结果表明,凝血酶蛋白与核酸适配体之间的结合力大小约为80 p N。同时,在分子水平上获得了凝血酶蛋白与核酸适配体之间的解离动力学信息。