均相时间分辨免疫分析铕穴状螯合剂的合成

以2,6-二（溴甲基）吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为起始原料,经溴化、取代、加成及酸化反应合成了两种铕穴状荧光螯合剂Eu³⁺ 2,6-{N,N′,N,N′-[二（2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基）]二（氨甲基）}-吡啶-二羧酸[Eu³⁺ bpy.bpy.py(CO₂H)₂, 1]和Eu³⁺2,6-{N,N′,N,N′-[二（2,2′ 联吡啶-6,6′-二甲基）]二（氨甲基）}-吡啶-二[N-(2-氨基乙基)酰胺]{Eu³⁺bpy.bpy.py[CONH(CH₂)₂NH₂]₂, 2},其结构和性能经¹H NMR, MS(ESI)和荧光光谱表征。结果表明：1的最佳激发波长为312 nm,发射特征峰位于598和615 nm,荧光寿命为1 064 μs,量子产量为10%。 2的最佳激发波长为311 nm,发射特征峰位于597和616 nm,荧光寿命为398 μs,量子产率为12.1%。     

时间分辨荧光免疫分析的新进展

对2003~2015年间时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)的新进展作了综述,包括荧光共振能量转移TRFIA、酶放大TRFIA和基于纳米颗粒的TRFIA,以及时间分辨荧光免疫分析与流动注射分析、实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)等技术联用的应用情况,并对TRFIA的发展前景进行了展望(引用文献82篇)。     

时间分辨荧光免疫分析法直接测定雌二醇

合成了雌二醇抗原,并获得了雌二醇单克隆抗体,通过酶联免疫吸附法测得效价为１．０×１０＾７。使用洗脱增强－时间分辨荧光免疫分析法测定了血清中的雌二醇,浓度范围为１．０×１０＾－２－１．０×１０＾３μｇ／Ｌ,最低检出限为５．６ｎｇ／Ｌ,批内ＲＳＤ％小于３．７％,批间ＲＳＤ％小于７．５％。将测定结果 放射免疫分析法作了比较。     

时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮（CTTA）为铕（Eu)的螯合剂,羊抗鼠（SAM）的IgG为二抗,用SAM－IgG-CTTA-Eu作标记二抗,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定离雌二醇（E2）的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高,测定雌二醇（E2）的线性范围为2．5－200pg/mL,检测限为2.5pg/mL。这一方法可望用于E2的临床检测。     

铕标记抗原、激光时间分辨荧光免疫分析尿中白蛋白

放射免疫分析法(RIA)将免疫反应的特效性与放射性测量的灵敏性相结合,是当今最广泛采用的方法之一。但RIA药盒使用寿命受放射性同位素半衰期的限制以及操作放射性对人体和环境可能导致某些危害,促使人们力图改善以非放射性物质标记的其它免疫分析法的灵敏度。1979年Soini和Hemmila提出的时间分辨荧光免疫分析(TR—FIA),以稀土螯合物作标记物连接到抗体或抗原上,免疫反应完成后,用时间分辨技术测荧光,很容易将稀土螯合物的荧光与背景荧光压分开。由于TR—FIA能达到甚至超过RIA灵敏度,标记物没有辐照分解之患,测定动态范围广,方法简便快速,     

时间分辨荧光免疫分析高灵敏检测嗜水气单胞菌

建立了生物素-链霉亲和素时间分辨荧光免疫分析（BAS-TRFIA）高灵敏检测嗜水气单胞菌的新方法.以兔抗IgG包被微孔板,加入嗜水气单胞菌菌株B18和生物素化IgG,生成的夹心复合物用Eu³⁺-链霉亲和素作为示踪物,Eu³⁺可与离解增强液形成时间分辨荧光（TRF）,通过TRF值对病原菌定量.方法的检测限为1.0×10² cfu/mL,在1.0×10~1.0×10⁶ cfu/mL范围内线性良好,相关系数0.9716.用该法检测时,不同来源的嗜水气单胞菌以及其它气单胞菌均呈阴性.板内和板间的变异系数分别小于5.00%和9.00%.所有相关检测试剂37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变.对60份人工感染的美洲鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织进行检测,阳性检测率为98.33%.结果表明,BAS-TRFIA法检测嗜水气单胞菌,灵敏度高、特异性好、操作简便,该方法为水产养殖病原菌检测提供了新的思路.     

时间分辨荧光免疫法测定肉类食品中的沙丁胺醇

研制一种可检测肉类食品中沙丁胺醇的时间分辨免疫荧光分析(time-resolved x12 25·1 luoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。将抗SAL的单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,用Eu3+标记SAL单克隆抗体作为检测抗体,建立SAL单标记TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的灵敏度、精密度、稳定性等指标。自制试剂盒SAL的线性范围为0~500 ng·L~(-1),最低检出浓度为0.12 ng·L~(-1);稳定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒检测阴性样本,阴性符合率为100%。与高浓度的克伦特罗有一定的交叉反应,与500 ng·L~(-1)以内肾上腺素(AD)、去肾上腺素(NO)均无交叉反应,三种样品中SAL的加标回收率分别为108.3%、104.5%、98.6%。所研制的试剂盒的各项性能稳定、灵敏性高、可测范围宽,稳定性好,具有良好的应用前景。     

稀土螯合物探针及其在时间分辨荧光免疫分析中的应用

本文总结了近年来所用的稀土螯合物探针及其在时间分辨荧光免疫分析中的应用，着重介绍了稀土螯合物探针标记的原理和特点，评述了ＬＫＢ体系和ＣｙｂｅｒＦｌｕｏｒ体系的相对优缺点，展望了荧光免疫分析的发展趋势     

硒的激光—时间分辨荧光分析

本文介绍了一种以PTQA作荧光增强剂,用激光-时间分辨发光分析仪测定硒的新方法。PTQA与Se(Ⅳ)反应,其产物经激发可产生荧光(λ_(ex)/λ_(em)=357 nm/495 nm)。在0.02ng/ml～10 ng/ml范围内,硒浓度与荧光强度呈正相关(r≥0.999),方法灵敏度为0.02 ng/ml。文中推荐了方法的最佳测量条件,并用标准牛肝粉(NBS1577a)进行了检验。     

时间分辨荧光免疫分析方法检测烟草中菌核净残留

建立了简便、灵敏地检测烟草中菌核净残留的时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),及配套的无净化的快速前处理技术。采用镧系元素螯合物Eu-N1标记亲和纯化后的羊抗兔IgG示踪抗体。采用间接竞争TRFIA法建立了菌核净标准抑制曲线,方法的检出限I10为2.0μg/L;抑制终浓度I50为32.00μg/L;检测线性范围为4～128μg/L。考察了丙酮提取后33%,10%和1%的烟草基质对菌核净-TRFIA分析方法的影响,表明在1%烟叶基质条件下,建立的菌核净的抑制曲线的线性范围与标准抑制曲线趋于平行,确定烟草样品的前处理稀释倍数为100倍,计算得到基质影响因子(Im)为17.1。对烟叶样品中添加1,7和24mg/L的菌核净标样,连续3d的添加回收实验表明,方法的回收率为73%～128%,相对标准标准偏差(RSD)在4.3%～13.2%之间;烟草中菌核净的实际最低检出限为1mg/L。本方法可望用于烟草中菌核净残留的快速筛选检测。     

激光时间分辨荧光免疫分析法测定人尿中免疫球蛋白G

时间分辨荧光免疫分析(TR-FIA)是近十年发展起来的一种新型非同位素分析技术,其基本原理是:比较高频率的脉冲光激发荧光标记物,每个激发脉冲后延迟一段时间,让短     

基于时间分辨方法的LicT蛋白荧光动力学特性

使用时间分辨荧光方法,结合紫外吸收光谱和稳态荧光光谱技术,测量了LicT蛋白中色氨酸残基的荧光动力学特性,进而对LicT蛋白质激活前后的局部微环境和结构变化进行了研究。LicT蛋白质的激活态使得有关糖类利用的基因转录过程继续进行,促进机体新陈代谢。通过色氨酸残基的荧光发射和寿命的差异判断出激活型蛋白AC 141和野生型蛋白Q 22不同的结构性质和微环境差异。在此基础上,通过衰减相关光谱(DAS)和时间分辨发射光谱(TRES)阐释了两种蛋白色氨酸残基和溶剂的相互作用,说明了激活型AC 141的比野生型Q 22的结构更加紧密。此外,TRES还说明了蛋白中的色氨酸残基存在连续光谱弛豫过程。各向异性结果则对残基和整个蛋白的构象运动进行了阐述,说明了色氨酸残基在蛋白质体系内有独立的局部运动,且在激活型蛋白中该运动更加强烈。     

镥铕共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌

建立了共发光时间分辨荧光免疫检测嗜水气单胞菌的新方法,以嗜水气单胞菌菌株B11包被微孔板,与Eu3+标记的兔抗IgG免疫反应后,加入含有共发光离子Lu3+的解离增强剂,由于Eu3+和Lu3络合物的共发光效应,时间分辨荧光大大增强,有效放大了检测信号,提高了检测灵敏度.优化了共发光体系的条件,方法的检出限为1.0×103...     

呋喃它酮代谢物时间分辨荧光免疫分析法的建立与应用

建立了Eu3+标记的间接竞争时间分辨荧光免疫分析法( Indirect competitive time-resolved fluoroimmu-noassay , ic-TRFIA)用于鱼肉样品中呋喃它酮代谢物AMOZ的检测。通过单因素实验考察了包被抗原浓度、抗体稀释倍数、竞争反应时间等参数对方法灵敏度的影响。结果表明,ic-TRFIA的最佳反应条件为：包被抗原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释5×104倍,最佳竞争时间为50 min。在优化的条件下,方法的检出限( LOD, IC10)为0.01 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为0.26 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.025~2.83 ng/mL,对鱼样中AMOZ回收率在78.0%~86.0%之间,各样品变异系数均小于15%,与HPLC-MS/MS对比检测结果显示相关性良好。本方法灵敏度高、特异性好,能够满足实际样品的检测需求。     

一种荧光增强型硫化氢荧光探针的制备及应用

<正>公布号:CN104860840A;公布日:2015.08.26申请人:苏州罗兰生物科技有限公司摘要:本发明公开了一种可以用于硫化氢荧光识别的新型化合物,具体涉及一种新型荧光探针的制备方法及其应用,属于化学分析检测技术领域。该荧光探针用于环境或生物     

时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的产酸克雷伯氏菌

从皮肤点状出血的日本鳗鲡中分离出产酸克雷伯氏菌菌株B12,经福尔马林灭活后,注射新西兰兔,制备免疫抗血清,G蛋白亲和层析纯化得到抗体（IgG）,以固定于微孔板的IgG作为捕获抗体,Eu³⁺螯合物标记的IgG作为检测抗体,建立了产酸克雷伯氏菌的夹心型时间分辨荧光免疫检测法（TRFIA）,并研究了抗体浓度、免疫时间及离解时间对检测的影响。本方法检出限为5.0×10³ cfu/mL;线性范围5.0×10³～1.0×10⁷ cfu/mL,相关系数达0.99以上。交叉反应表明其具有较高的特异性,板内和板间相对标准偏差分别为5.64%和2.27%。将本方法标准化后,检测了29份人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,结果满意。     

均相催化剂活性的一种理论判据

在目前条件下,催化剂活性的半经验处理是十分有意义的.为此,本文建议一个近似的理论判据——相对活化能ΔE_R. 将催化过程中的决定反应速度一步表示为: