毛细管电泳-激光诱导荧光法测定细胞中谷胱甘肽

谷胱甘肽(GSH)在抵抗氧化应激和重金属解毒过程中发挥着重要作用,建立灵敏、准确的GSH定量分析方法对于研究细胞重金属毒性机制具有深远意义。该研究以肝癌细胞(HepG2)为研究对象,以活性基团为芳香邻二醛的2,3-萘二甲醛(NDA)为标记试剂,建立了一种高灵敏度的测定细胞中GSH含量的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE-LIF)。实验考察了缓冲溶液的种类、pH、添加剂等对GSH与NDA的反应速率和NDA-GSH检测灵敏度的影响。比较了pH为7.4和9.2的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液、pH为9.2的硼砂和Tris缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度和反应速率,结果显示在pH为9.2的硼砂缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度最高且反应速率最快。进一步比较了4种添加剂对NDA-GSH灵敏度的影响,结果显示以β-环糊精(β-CD)作为添加剂效果最好。在最优的实验条件下,GSH与NDA可以在5 min内达到反应平衡,3 min内检测到NDA-GSH电泳信号。采用外标法对细胞中的GSH进行定量分析,方法线性范围为0.01～20.00 mmol/L, GSH的检出限和定量限分别为0.006μm...     

GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物6A,6A’-二苯胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-AnSeCD). 采用双酶偶联法测定GPX的活力结果显示, 6A,6A’-二环己胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-CySeCD)催化谷胱甘肽还原H2O2和枯烯H2O2的活力均比6-AnSeCD的高. 为了进一步考察6-CySeCD和6-AnSeCD与GSH之间的相互作用, 进行了分子动力学(MD)模拟和分子对接研究. 结果表明, 与GSH的结合使GPX模拟物的构象发生变化, 这种改变可能是影响桥连GPX模拟物催化活性的关键因素.     

海藻中类金属硫蛋白的分离表征及对Zn,Cu的诱导响应

以海带为试验载体,利用葡聚糖凝胶柱,建立了海藻中类金属硫蛋白(MT-like)的分离、提取纯化技术;采用紫外分光光度法比对类金属硫蛋白与兔肝Zn-MTs的紫外吸收,并用凝胶电泳法对其分子量范围进行表征,同时利用质谱法精确测定其分子量;并在ZnCl2,CuCl2,ZnCl2+CuCl2不同条件下胁迫培养藻体,考察了海带对重金属的富集能力,探索藻体中MT-like对Zn及Cu元素的诱导响应。结果显示,MT-like与兔肝Zn-MTs在294 nm处有相似的紫外吸收峰,在SDS-PAGE凝胶电泳图上显像类似,分子量范围相近,经电喷雾离子源质谱测定该蛋白质的分子量约为6.5 ku。另外,海带对重金属的富集能力较强,对Zn元素的富集能力明显高于Cu元素;Zn2+对藻体MT-like的产生有促进作用,而MT-like随着Cu2+诱导时间的增长先增加后降低,且Cu2+对Zn2+诱导存在拮抗效应。     

基于聚集诱导发光的荧光多肽探针检测谷胱甘肽EI北大核心CSCD

采用固相合成法将聚集诱导发光分子NI-COOH与GSH响应的多肽序列共价连接,得到兼具NI探针的聚集诱导发光性能和GSH响应性的多肽探针(NI-GFFKESSRGD),可用于GSH的体外检测。在50~600μmol/L的GSH浓度范围内,多肽探针的荧光强度和GSH浓度呈良好的线性关系,在该范围内可对未知浓度的GSH样品进行准确定量,误差小于0.5%。当多肽的浓度进一步增加至2.0%(w/w)时,可形成GSH响应的超分子水凝胶,其微观形貌上呈现纳米纤维交联的网状结构,流变性能上具有良好的粘弹特性和剪切稀化特点,是一类优秀的可注射性材料。多肽探针对成纤维细胞和肿瘤细胞具有良好的细胞相容性,表明该探针在非入侵性的活体生物分子检测上具有良好的应用前景。     

便携式远程激光诱导击穿光谱系统及其定量分析性能

因高温、辐射等极端环境限制,核领域亟需具备在线快速检测特性的分析仪器。基于小型风冷脉冲激光器与小型光纤光谱仪实现了远程激光诱导击穿光谱技术（LIBS）装置的小型化,对该便携式远程LIBS系统的定量分析性能进行了研究,实现了5 m外样品的元素遥测。在单脉冲激光能量100 mJ,脉冲延时1.0 μs的分析条件下,实现了白水晶、陶瓷及铝合金样品中Mn、Si、Al、Na、Ba、Ca及Cr元素的激发,验证了LIBS技术对材料组分和物料成分的远程探测能力,对铝合金样品的定量分析结果显示,该远程遥测系统对铝合金样品定量测量结果的最大相对平均偏差为12%,具备执行核领域快速分析场景下的半定量检测能力。     

二极管阵列检测-激光诱导荧光光度法测定食品中痕量铜

为了建立食品中痕量铜的新分析方法,本文利用自行组装的激光诱导荧光－CCD二极管阵列检测器－计算机联用装置,研究了铜催化H2O2氧化罗丹明B的反应体系,在氨－氟化铵（pH=9.0)缓冲溶液中,激发波长532．0nm,发射波长580．0nm条件下,采用催化荧光光度法实现了食品样品中痕量铜的测定,方法的线性范围0．5－4．0ug/L,方法的检出限为0.5ug/L,加标回收率为86．9％－108．6％,s相对偏差不大于9．70％。     

谷胱甘肽响应的非病毒基因传递体系研究

现代基因技术和人类基因组工程图谱的完成,为采用基因分子生物学方法治疗各类疾病,提高人类生命质量开辟了广阔的前景．由于裸DNA分子难以在体液中稳定存在,在主要器官中只能实现低层次的表达,寻求实现广泛基因表达的基因传递系统已成为基因治疗在大规模临床应用中的关键问题,聚乙烯亚胺(PEI)具有“质子海绵”效应,     

基于激光诱导击穿光谱技术结合随机森林算法快速定量分析土壤中重金属元素

土壤中重金属的检测对土壤污染分析及监控具有重要意义.本研究建立了一种基于激光诱导击穿光谱(Laser induced breakdown spectroscopy,LIBS)技术结合随机森林(Random forest,RF)算法快速定量分析土壤中重金属元素的方法.采用激光诱导击穿光谱仪对22组土壤样品的LIBS光谱进...     

谷胱甘肽亲和色谱介质的制备及对谷胱甘肽硫转移酶蛋白的纯化

融合表达系统能够为目标蛋白质提供一个用于亲和色谱纯化的标签蛋白,同时可以改善目标蛋白质的可溶性等性质,谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白表达系统就是其中的一种。然而,该系统纯化所采用的亲和色谱介质的制备技术被国外一些生物制品大公司所垄断。鉴于此,本实验室通过悉心研究,摸索出一套较成熟的亲和色谱介质的制备方法。     

激光诱导击穿光谱定量分析全血中的锂元素

锂（Li）盐作为一种精神科药物常被用于治疗重性抑郁障碍,然而长期服用Li盐会产生高中毒风险,及时监测患者血液中Li元素的浓度,对确保用药安全和临床治疗效果非常重要。激光诱导击穿光谱（Laser-induced breakdown spectroscopy, LIBS）作为一种快速分析技术,被广泛应用于实际场景下复杂基质的元素分析。本研究采用LIBS技术结合偏最小二乘法（Partial least squares, PLS）对血液基质中的Li元素进行定量分析。采用45组临床血液样品,分别构建血浆和全血基质下Li元素的定量分析模型,通过五折交叉验证方法对PLS算法中的潜变量数进行优化。结果表明,基于血浆基质构建的PLS定量分析模型预测决定系数（R2）为0.992,预测均方根误差（RMSEP）为0.204μg/mL,相对标准偏差（RSD）为2.14%;基于全血基质构建的PLS定量分析模型R2为0.984, RMSEP为0.728μg/mL, RSD为3.45%,因此,基于血浆定标值所建立的LIBS模型定量分析全血中锂元素的效果更佳。LIBS技术为临床血锂的快速检测评估提供了一种新的选择,具有...     

谷胱甘肽分子印迹聚合物的制备及其性能研究

采用新型光源高压汞灯制备了三肽分子谷胱甘肽的分子印迹聚合物(MIPs),反应时间缩短,制备条件温和.对MIPs做了一系列的静态吸附实验,结合荧光测定法研究了不同单体-模板比例下MIPs表现出来的吸附性能.对最佳比例制备的MIPs进行了一系列性能研究,包括吸附等温线的测定、Scatchard分析以及薄层色谱分离实验等.结果表明,所合成的MIPs对GSH具有良好的吸附和选择识别能力,最大吸附量为45·4mg/g,特异因子达到了4·98.     

谷胱甘肽分子印迹聚合物的制备及其性能研究

采用新型光源高压汞灯制备了三肽分子谷胱甘肽的分子印迹聚合物(MIPs), 反应时间缩短, 制备条件温和. 对MIPs做了一系列的静态吸附实验, 结合荧光测定法研究了不同单体-模板比例下MIPs表现出来的吸附性能. 对最佳比例制备的MIPs进行了一系列性能研究, 包括吸附等温线的测定、Scatchard分析以及薄层色谱分离实验等. 结果表明, 所合成的MIPs对GSH具有良好的吸附和选择识别能力,最大吸附量为45.4 mg/g, 特异因子达到了4.98.     

实用型简易激光诱导荧光检测器的研制及性能测试

基于正交型结构,研制了一种简易实用的高效液相色谱激光诱导荧光检测器。以930荧光光度计为骨架,用岛津RF-535荧光检测池,配以自制可调稳压电源,分别以波长532am和405nm的自制激光器为激发光源,以罗丹明B和荧光素为荧光试剂评价体系的性能。罗丹明B的检出限为2．0×10^-8mol／L（S／N〉10）,荧光素的检出限为3．0×10^-10mol／L（S／N〉10）。测试结果表明该检测器达到了设计要求,具有足够的实用灵敏度和较宽的线性范围。     

Ni-Cr烤瓷合金的X射线荧光无标样定量分析

介绍了X射线荧光光谱的无标样定量分析软件应用于医疗用Ni-Cr烤瓷合金的检测,分析了合金中Ni、Cr、Mo、Al、Co、Ti、Si、Fe、Cl等元素的含量．结果表明该方法的分析速度快、准确度高,是一种实用的应用软件．     

两亲性双硫键双菁染料的合成及谷胱甘肽响应荧光性质研究

菁染料具有优秀的光学性质,常用于肿瘤组织的实时可视化荧光成像。但普通菁染料成像背景较高,对肿瘤组织的靶向能力差。将菁染料自组装成纳米粒子可使染料形成聚集并实现荧光淬灭（聚集淬灭效应）,降低其在普通组织的成像背景;同时,纳米粒子的高渗透长滞留效应（EPR效应）可提高染料对肿瘤组织的靶向能力。本文设计合成了一种双硫键双菁染料（SO₃Cy7-ss-Cy7.5）,该染料由于两亲性的特性易在水溶液中自组装成纳米粒子,荧光淬灭高达92%;当纳米粒子与谷胱甘肽（GSH）响应后,淬灭的荧光逐渐恢复,最终实现16倍的荧光强度增强。因此,该双菁染料具有良好的肿瘤组织高分辨成像潜力。      

毛细管电泳手性分离-激光诱导荧光检测普萘洛尔对映体

用异硫氰酸荧光素衍生普萘洛尔,衍生产物用毛细管电泳分离,激光诱导荧光方法检测。在含有10mmol/L-βCD,50mmol/L硼砂(pH=9.0)的溶液中,普萘洛尔对映体得到了基线分离。本方法线性范围宽(R型:2.0×10-3~1mg/L),灵敏度高(检出限均为1.24μg/L),可用于活体中普萘洛尔对映体的药代动力学研究。     

在线衍生微流控芯片电泳和激光诱导荧光法测定单细胞中谷胱甘肽

微流控分析芯片的网络结构和微米通道尺寸适合于单细胞进样、控制和分离分析^[1~4].在测定细胞内容物时,大多采用柱前细胞内衍生法^[1,2,4],但操作复杂,需多次离心分离,且能透过细胞膜标记胞内组分的荧光试剂较少.     

CCD阵列检测-激光诱导荧光光度法测定食品中锌

利用自行组装的激光诱导荧光 CCD阵列检测器 计算机联用装置 ,建立了测定食品中锌的灵敏方法。在乙酸 乙酸铵缓冲溶液 (pH 4 )中 ,Zn(Ⅱ )与SCN- 、若丹明B(RhB)反应生成Zn SCN RhB配合物 ,经乙醚萃取后 ,在激发波长 5 32nm和发射波长 5 80nm进行荧光强度测定。研究了表面活性剂对Zn SCN RhB配合物荧光强度的影响 ,优化了荧光反应及食品样品的处理条件 ,并用于食品试样中锌的测定。方法的检出限为 4ng·ml- 1,加标回收率为 90 .0 %～ 110 .0 % ,相对标准偏差为 2 .0 %～ 9.7% ,能满足食品卫生检验的要求。     

谷胱甘肽与衡土离子作用的13^C NMR研究

本文利用顺磁稀土离子的诱导化学位移变化的性质, 研究了多官能团配体谷胱甘肽(GSH)与稀土的配位作用。在水溶液中GSH通过分子两端的羧基负离子与稀土形成遥爪配位结构。谷氨酸和甘氨酸羧基与Eu^3+的配位稳定常数分别为12.5±0.1L.mol和100.0±0.5L/mol。从13^C化学位移的pH变化曲线求得谷氨酸和甘氨酸羧基解离的pK~a值分别为2.20±0.02和3.50±0.04。对Dy^3+、Ho^3+、Er^3+、Tm^3+和Yb^3+作用下, GSH的13^C位移数据分析表明, 配体与这些离子形成同构的配合物, 分子两端羧基均可能以双齿形式与稀土配位。