交配与未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质组学的初步分析

采用双向电泳和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)研究三疣梭子蟹交配与未交配雌性个体肝胰腺蛋白质表达.使用PDQuest软件分析双向电泳凝胶图像,结果显示:交配组和未交配组凝胶图像上分别能检测到(400±25)和(530±16)个蛋白点,其中共有15个蛋白点表达量有显著性差异(P0.05).与未交配组相比,交配组三疣梭子蟹肝胰腺中6个蛋白点的表达量显著性上升.经质谱鉴定为:磷酸丙糖异构酶、磷酸丙酮酸水合酶、过氧化氢酶、δ-谷胱甘肽S-转移酶、ATP合酶α-亚基和胰凝乳蛋白酶.此外,交配组三疣梭子蟹肝胰腺中9个蛋白点的表达量显著性下降.经质谱鉴定为:延伸因子2、长链酰基CoA脱氢酶、假血蓝蛋白1、假血蓝蛋白2、异柠檬酸脱氢酶、线粒体乙醛脱氢酶X、转酮醇酶、血蓝蛋白α-亚基和腺苷高半胱氨酸酶A.该结果可为揭示三疣梭子蟹卵巢发育机理提供重要参考.     

含蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿体核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法,提取、分离和纯化了pVFB33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解,构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱,同时,对实验结果进行了分析讨论.     

rbcL基因在水稻叶绿体DNA基因库克隆中的定位

由水稻品系珍汕９７不育系为材料制得的叶绿体ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）基因库中，筛选到屯含核酮糖１，５－二磷酸羧化酶／加氧酶大亚基基因（ｒｂｃＬ）的重组质粒，对该重组质粒用ＰｖｕⅡ，Ｐｓｔ１ｔ和ＳａｌＩ限制性内切酶进行了分析并制得了限制图谱，ｒｂｃＬ基因在该图谱上进行了定位。     

含蚕豆核酮糖1，5一二磷羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿沐核酮糖M J一二磷酸趁化酶/un氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法，提取、分离和纯化了pVFD33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解，构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱.同时，对实脸结果进行了分析讨论.     

海滨锦葵早期盐胁迫应答基因表达

利用cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)对盐胁迫下海滨锦葵早期根和叶片的基因差异表达进行了分析.结果表明,海滨锦葵早期盐胁迫应答基因的表达模式可以分为4类:抑制表达、重新诱导、上调表达和下调表达.对38个差异表达的盐胁迫应答基因片段进行了回收测序和BLASTX比对,其中34个差异表达片段与其他物种有高度同源性,4个差异表达片段为新基因片段.进一步对其中的6个差异表达基因的转录水平进行的实时RT-PCR相对定量分析,Avp1,Nhx1和Oat在根和叶中都上调表达;Gapdh和Pmp在根中下调表达而在叶中却上调表达;Chx1在根中上调表达而在叶中却下调表达.盐生植物海滨锦葵在盐胁迫的早期阶段可能通过细胞离子区域化以调节离子平衡外,还可能在整株水平上把钠离子区域化到根部.     

副猪嗜血杆菌的MLST分析及数据库建立

对副猪嗜血杆菌86个分离株的7个看家基因,包括ATP合成酶β链(atpD)、翻译起始因子IF-2(in-fB)、核糖体蛋白β亚基(rpoB)、苹果酸脱氢酶(mdh)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6pgd)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(g3pd)和延胡索酸还原酶B(frdB)进行了PCR扩增;对扩增产物进行了测序;对序列编辑、队列     

子群为类正规或自正规的群

对所有子群或为类正规或为自正规的有限群(称为PS群)进行了研究,获得了这类群的一些性质,并在极大子群为幂零或内幂零的条件下获得了这类群的分类.主要结果为:设G是一个PS群,则G的极大子群为幂零或内幂零当且仅当G为下列群之一:(1)G是Dedekind群;(2)G=<α,b|=αp=bq,=1,αb=αλ,q|p-1,p|λq-1,p()λ-1>;(3)G=<α,b,c|αp=bqβ=cr=1[b,c]=[α,c]=1,1,αb=αλ,p()λ-1,p|λq-1,q|p-1,r|λ-1>;(4)G=<α,b,c|αp=bq=cr=1,[b,c]=1,αb=αλ,αc=αs,p(λ-1)(s-1),p|λq-1,p|sr-1,rq|p-1>,q＞r;(5)G=<α,c|αq=crn=1,αr=αλ,q()λr-1,q|λr2-1,r2|q-1>,n≥2;(6)G=<α,c|αq2=crn=1,αc=αλ,q()λ-1,q2|λr-1,r|q-1>;(7)G=<α,b,c|αq=br=crn-1=1,[α,b]=[b,c]=1,ac=αλ,q()λ-1,q|λr-1,r|q-1>,n≥2;(8)G=<α,b,c|αq=b4=c4=1,b2=c2,[α,b]=1,αc=α-1,bc=b-1>,q是奇素数;(9)G=<α,b,c|αp=bq=crn=1,[α,b]=1,αc=αλ,bc=bλ,p()λ-1,q()λ-1,pq|λr-1,r|p-1,r|q-1>.     

常春卫矛中五环三萜成分的研究

运用现代先进分离技术从卫矛科药用植物常春卫矛中分离得到3个已知齐敦果烷型五环三萜,运用质谱、核磁共振、红外光谱和紫外光谱等现代波谱技术,参考相关文献资料确定了化合物的结构,分别为3β-甲氧基-齐敦果-11-酮-18-烯、3,11-二羰基齐敦果-12-烯和28-羟基-齐敦果-12-烯-3,11-二酮.并且对它们的化学位移做了全归属.     

北美海蓬子胆碱单加氧酶基因CMO的克隆及表达研究

胆碱单加氧酶(CMO)是合成植物小分子非毒性有机渗透调节物质甜菜碱过程中重要的限速酶.文中采用RACE技术以北美海蓬子为实验材料克隆CMO基因的全长c DNA序列(Genbank登录号:KM884944),并做相关的生物信息学分析.研究结果表明,该基因c DNA全长1 834 bp,其中开放阅读框(ORF)有1 317 bp,编码439个氨基酸,预测其蛋白分子量为49.537 k Da,理论等电点(p I)为6.15;序列分析显示北美海蓬子CMO蛋白中含有2个重要的保守域和功能域,不存在跨膜区域;除了与蒺藜苜蓿及水稻的同源性分别为46%和49%外,与其他植物CMO蛋白序列相似性均达到55%以上;系统进化树分析显示,它与欧洲海蓬子的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果显示,随着Na Cl浓度的升高,北美海蓬子CMO基因的表达量增加,说明该基因可通过盐胁迫诱导表达.     

青花菜抗病防卫基因BoSGT1的克隆、序列分析与诱导表达

SGT1参与了细胞周期、逆境反应、蛋白质泛素化和信号转导等过程,在植物抗病反应中起着重要作用.以青花菜(Brassica oleracea var.italica)为材料,克隆到SGT1基因,命名为BoSGT1,其基因组DNA和编码区全长分别为2 007和1 068bp,具有9个内含子;BoSGT1编码了355个氨基酸,编码蛋白含3个TPR、1个CS和1个SGS结构域.BoSGT1与14个SGT1的序列相似性为60%~87%,其中与拟南芥SGT1b的相似性最高;SGT1间的遗传距离为0.003~0.486,BoSGT1与血红老鹳草SGT1、拟南芥SGT1a及SGT1b聚为一组,与其他物种SGT1的关系相对较远,在进化树上处于不同分支.BoSGT1的表达受霜霉菌(Hyaloperonospora parasitica)和核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的诱导,在霜霉菌侵染下,6,12和24h的表达量增加;在核盘菌诱导下,6,12,24和36h的表达量增加,暗示BoSGT1的表达与霜霉病及菌核病的抗病反应有关.BoSGT1的克隆和表达分析为进一步研究其功能奠定了基础.     

美人蕉和绿萝在修复富营养化水体过程中对Cr(Ⅵ)胁迫的生理生化响应

研究了陆生植物美人蕉（Canna indica）和绿萝（Scindapsus aureum）在修复富营养化水体过程中对不同质量浓度Cr（Ⅵ）胁迫的生理生化响应.结果表明,Cr（Ⅵ）胁迫影响植物生长,Cr（Ⅵ）质量浓度为10 mg·L-1时两种植物生长明显受到抑制.Cr（Ⅵ）质量浓度为2 mg·L-1时促进美人蕉及绿萝可溶性蛋白质的合成,提高了美人蕉及绿萝SOD、CAT、POD活性,对两种植物MDA积累无明显影响;当Cr（Ⅵ）质量浓度5 mg·L-1时抑制美人蕉和绿萝可溶性蛋白质合成及绿萝CAT活性,提高美人蕉SOD、CAT、POD及绿萝SOD、POD活性,对美人蕉MDA积累影响不大,增加绿萝MDA积累;当Cr（Ⅵ）质量浓度达到10 mg·L-1时,明显抑制两种植物可溶性蛋白质的合成,且抑制美人蕉CAT、POD活性和绿萝CAT活性,提高美人蕉和绿萝SOD活性及绿萝POD活性,显著增加两种植物MDA积累.本试验条件下,美人蕉生长速度大于绿萝,对铬胁迫的耐受能力更强.     

高山雪鸡（Tetraogallus himalyensis G.R.Gray）冬季食性的研究

１９９０～１９９２年的每年冬天，在天山达板城山区对高山雪鸡ＴｅｔｒａｏｇａｌｌｕｓｈｉｍａｌａｙｅｎｓｉｓＧ．Ｒ．Ｇｒａｙ）的冬季食性及食物成分进行厂研究．结果表明，雪鸡日取食两次，饱食１次需６０ｇ左右高山植物，含２４科４３种以上植物的根，细茎、叶、种子等；食物富含锰（Ｍｎ）、镍（Ｎｉ）、铬（Ｃｒ）等多种微量元素，但粗脂肪、蛋白质和总糖含量都较低，氨基酸的组分比例也不够合理，营养和能源价值都较低，表明高山雪鸡对包括贫瘠食物条件在内的恶劣自然环境条件具有很高的适应性和抗逆性．     

SARS-CoV S蛋白的原核表达及其粘膜免疫效应

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的S（Spike）蛋白是病毒表面最主要的膜蛋白，在病毒的感染过程中起重要作用，是冠状病毒的主要抗原．以SARS冠状病毒的cDNA为模板，通过PCR得到S△1（151～1200bp）、S△2（1201～2250bp）和S△3（2251～3150bp）3段基因序列，克隆到表达载体pET-32a，在大肠杆菌BL21中诱导表达得到包涵体蛋白，经Western blot检测正确后，将此作为抗原以滴鼻和腹腔注射两种小同的途径免疫BALB／c雌性小鼠，3次免疫之后采集小鼠的血清和肺洗液，经酶联免疫吸附实验（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）检测其中的抗体IgG和IgA．结果表明S蛋白通过滴鼻途径既能刺激产生一定的血清IgG，更能诱导肺粘膜产生特异IgA抗体．进一步比较分析发现，诱导粘膜免疫的效应区域主要位于S△2（401～750aa）蛋白区段．     

水稻高温、干旱响应基因OsHdr5的克隆与表达谱分析

低温、高温、干旱等非生物逆境通常会严重影响到水稻的生长及产量.为深入了解水稻逆境反应的分子机理和挖掘耐逆相关基因,本文采用Affymetrix水稻表达芯片对水稻多逆境下的全基因组表达谱进行分析,并筛选出众多表达特异基因.OsHdr5是其中一个在多个生长发育时期与组织器官中受高温、干旱诱导均显著上调的基因,用实时定量PCR方法(real-time PCR)对其表达水平进一步分析,两组结果基本吻合.用PCR方法扩增获得长为743bp的全长基因序列,其ORF区编码167个氨基酸残基,组成的肽链含有磷酸化激酶位点,形成的二级结构包含一个由6个α螺旋和2个β折叠组成的跨膜结构域,进一步分析推测其可能是叶绿体膜上与细胞跨膜信号传递相关的功能蛋白.     

暂存和运输方式对野生三疣梭子蟹暂养的影响

三疣梭子蟹是我国重要的海产经济蟹类, 野生梭子蟹的暂养是一种高效利用梭子蟹自然资源的经济手段. 为探究适合野生三疣梭子蟹暂养的方法, 研究了野生三疣梭子蟹捕捞后不绑螯堆积式暂存(M1)、绑螯单个体式暂存(M2)两种暂存方式以及橡皮筋绑螯堆叠盛放于塑料筐中运输(T1)、不绑螯单个盛放于单体盒中运输(T2)两种运输方式分别对其暂养存活的影响, 并以超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、血糖、皮质醇、热休克蛋白(HSP70)几种生理指标了解其生理响应特征. 结果显示: (1)不同暂存方式对野生三疣梭子蟹暂养的影响中, M2方式暂存的蟹暂养累积存活率为91.4%, 显著高于M1 (P<0.05), M1组蟹累积存活率为70.0%; 根据对M1、M2组蟹血淋巴中几种生理指标的检测, 引起两组蟹存活率差异的原因可能是M1暂存方式对蟹造成不可逆的损伤胁迫, 抗氧化及应激能力显著降低, 生理机能和免疫防御能力受损. (2)不同运输方式对野生三疣梭子蟹暂养的影响中, T2方式运输的蟹暂养累积存活率为41.5%, 略高于T1 (P>0.05), T1组蟹累积存活率为30.8%; 根据对T1、T2组的蟹血淋巴中几种生理指标的检测, 引起两组蟹存活率差异的原因可能是以T1方式运输的蟹受到挤压胁迫, 抗氧化及应激能力略低于T2. 综上分析, 以绑螯单个体式的暂存方式和不绑螯单个盛放于单体盒中的运输方式获取的野生三疣梭子蟹更适合暂养.     

HPLC/ICP-MS法测定水质中Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的研究

采用高效液相色谱(HPLC)和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术建立了三价铬Cr(Ⅲ)和六价铬Cr(Ⅵ)两种铬形态的分析方法.通过对流动相的组成、浓度、pH值等色谱条件的优化以及雾化气、等离子体气、冷却气、碰撞气流量等质谱条件的优化,最后使用20mm.mol-1的乙酸铵和2mm.mol-1乙二胺四乙酸(EDTA)溶液作为流动相,并用四丁基氢氧化铵(TBAH)调节pH值(pH=7.5),成功分离了Cr(Ⅲ)、Cr(Ⅵ)两种铬化合物,两者的检出限均达到1.0μg.L-1.用该方法对环境水样进行Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)测定,加标回收率为85.0%～101%.     

渐降低温胁迫对黄瓜幼苗叶绿体膜相关指标的影响

为了进一步说明模拟自然界温度渐降低温胁迫的冷害作用的机理,以黄瓜品种“津优1号”为试材,以直降低温胁迫（昼温/夜温=（10±0.5）℃/（5±0.5）℃）为对照CK,常温（昼温/夜温=（25±0.5）℃/（18±0.5）℃）为对照CK₁,研究渐降低温胁迫（即以1 ℃·h^-1的平均降温速度进行降温处理）对黄瓜幼苗叶绿体膜相关指标的影响.结果表明：（1）Ca²⁺ATPase和Mg²⁺ ATPase活性在低温胁迫过程中呈先上升后下降趋势,随着低温胁迫的进程,渐降低温胁迫下2种酶活性下降的幅度明显低于直降低温胁迫.（2）经过低温胁迫,冷害指数、叶绿体膜蛋白质量浓度和叶绿素质量浓度显著下降.（3）处理T的冷害指数、膜蛋白和叶绿素质量浓度、Ca²⁺ ATPase和Mg²⁺ ATPase活性均显著高于CK.总之,渐降低温胁迫可以减少叶绿体膜的损伤,增强抵御低温逆境胁迫的能力.     

与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

红枣汁与魔芋凝胶复合果冻的研制

采用正交优化方法,以红枣汁与魔芋精粉为主要原料研制红枣汁复合果冻.对红枣汁、魔芋精粉、κ-卡拉胶混合胶等的用量、氯化钾添加量、蔗糖与柠檬酸添加比例等工艺条件进行了研究,得到了红枣汁魔芋凝胶复合果冻的最佳工艺配方:红枣汁8.00%、魔芋精粉0.28%、κ-卡拉胶0.42%、氯化钾0.60%、白沙糖5.00%、柠檬酸0.10%.该配方制作的果冻呈橘黄色,香味浓郁,爽滑可口.