胶体金免疫层析法对组织样品中磺胺甲嗯唑残留的快速检测

研究了用于快速检测组织样品中磺胺甲嗯唑残留的胶体金免疫层析检测试剂。采用免疫竞争法,将抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,同时将人工合成的磺胺甲嗯唑抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线（T线）,将抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体的羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素薄膜表面作为质控线（C线）。T线的人工抗原与待测样品中的磺胺甲嗯唑竞争结合胶体金标记的磺胺甲嗯唑多克隆抗体,通过T线与C线的显色对比读出结果。采用该检测试剂检测组织试样时,定量下限可达20μg／L,整个检测过程只需3—5min,且与磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、盐酸克伦特罗、四环素、青霉素、链霉素无交叉反应。检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为组织中磺胺甲嗯唑残留现场监控的有效筛检手段。     

胶体金免疫层析法快速检测三聚氰胺

采用戊二醛法制备三聚氰胺-BSA偶联抗原,胶体金标记三聚氰胺单克隆抗体,建立了检测三聚氰胺的胶体金免疫层析试验。结果显示,该试验具有良好的敏感性,胶体金免疫层析试验对鲜奶、奶粉和饲料样品中三聚氰胺的最低检测量分别为1.0、2.0和2.5μg/g,该法适合现场快速检测三聚氰胺。     

近红外光谱快速测定复方磺胺甲噁唑药效成分

基于近红外漫反射光谱技术,利用偏最小二乘多元校正方法建立了复方磺胺甲噁唑片中的两个有效成分磺胺甲噁唑(SMZ)和甲氧苄啶(TMP)含量的快速同时测定方法。对于SMZ和TMP定量分析模型,相关系数分别为99.969%与99.938%,校正集残差分别为0.217与0.159,而预测根均方差分别为0.310和0.418。该方法具有简单、快捷、两组分同时准确测定以及样品不经任何预处理等特点。     

胶体金免疫层析法快速检测水产品中河豚毒素的研究

该文将特异性识别河豚毒素的单克隆抗体加以胶体金标记用作示踪物,建立了豚毒素的胶体金免疫层析技术快速检测方法。优化了胶体金体系的pH值、抗原抗体浓度、离子浓度、表面活性剂种类以及样品前处理方法。结果显示：在最优条件下,建立的胶体金免疫层析法对河豚毒素的定量检出限为0.5 ng/mL,线性范围为0.8～10.6 ng/mL,定性检出限（裸眼判别）为12.0 ng/mL。河豚、织纹螺等样品的加标回收率为70.5%～110%,相对标准偏差为3.7%～7.1%,检测结果与LC-MS/MS法一致。所建立的胶体金免疫层析技术在现场快速检测方面具有良好的可行性和实用性,可用于大量样品的快速筛查和河豚毒素中毒后的快速诊断。     

磺胺甲噁唑的二阶导数差示脉冲极谱法测定

建立了磺胺甲噁唑的二阶导数差示脉冲极谱定量分析方法,磺胺甲噁唑在10% HCl-(硼酸-氯化钾缓冲溶液)-水(5:5:90)的底液中,于-1.45 V(vs.Ag/AgCl)处出现一良好的二阶导数差示脉冲极谱峰,磺胺甲噁唑浓度与其峰高在0.08～0.80 mmol/L范围内呈线性关系(p＜0.01),检测限为8.6 nmol/L.本法简便、快速、灵敏,结果准确.     

毛细管电泳-安培法测定复方磺胺甲噁唑片中的有效成分

采用毛细管电泳-安培法(CE-AD)同时分离测定了磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole,SMZ)、磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)和抗菌增效剂甲氧苄胺嘧啶(trimethoprim,TMP)3种常用磺胺类抗菌药物成分,考察了实验参数对分离、检测体系的影响。在优化实验条件下,以300μm碳圆盘电极作为工作电极,检测电位为1050mV(vs.SCE),在Na2B4O7(13mmol/L)-KH2PO4(18mmol/L)(pH5.8)的缓冲溶液中,分离电压18kV,进样6s,3组分在14min内可实现基线分离。上述3组分浓度分别在5×10-4~5×10-2、5×10-4~0.1和5×10-4~5×10-2g/L范围内与其峰电流强度呈线性关系,检出限达5.1×10-5~8.0×10-5g/L(S/N=3)。该方法已成功应用于复方磺胺甲噁唑片中抗菌活性成分的含量测定,结果令人满意。     

改良的QuEChERS/UPLC法测定鱼组织中磺胺甲噁唑、乙酰磺胺甲噁唑与甲氧苄啶

建立了快速检测鱼体自然比例的带皮肌肉、肝脏、肾脏、鳃和血浆中磺胺甲■唑(SMZ)及其代谢物乙酰磺胺甲■唑(N-ac-SMZ)和增效剂甲氧苄啶(TMP)的超高效液相色谱法(UPLC)。自然比例的带皮肌肉、肝脏、肾脏和鳃组织采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理;血浆样品采用液液萃取法进行前处理。以甲醇-0.1%乙酸水溶液为流动相,Acquity UPLC~? BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为分离柱,检测波长为270 nm,数据采集模式为吸光度-基线中值滤波(MBF),外标法定量。结果表明,3种目标物在0.05～10 mg/L范围内线性良好,相关系数r~2≥0.998 9,方法检出限和定量下限分别为25、50μg/kg。在0.05～2.00 mg/kg加标水平下,回收率为68.2%～97.3%,相对标准偏差为1.7%～13%。该方法操作简便、准确、灵敏,适用于鱼体各组织中此3种目标物残留量的检测和药代动力学及组织分布规律研究。     

猪肉中1-氨基乙内酰脲的胶体金免疫层析法快速检测

基于免疫竞争胶体金免疫层析原理,研制了检测食用肉中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)的免疫试纸条。用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗1-氨基乙内酰脲的衍生物(CPAHD)的单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,CPAHD-BSA(Bovine serum albumin)抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成AHD胶体金免疫层析快速检测试纸条。在5 min内肉眼观察结果,该试纸条对AHD的最低检测限为2.33μg/L,除与呋喃妥因有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应,用该试纸条和ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay)检测猪肉中添加的AHD,结果呈现很好的相关性。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,可作为呋喃妥因残留批量检测的筛选方法。     

毛细管电泳-场强放大堆积技术对制剂中磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的测定研究

利用高效毛细管电泳-场强放大柱内堆积技术分离测定磺胺嘧啶(SD)和磺胺甲噁唑(SMZ)。采用未涂层熔融石英毛细管柱(60.2 cm×75μm,有效长度50 cm),以50 mmol/L NaH2PO4(pH6.0)为运行缓冲液,分离电压27.5 kV,柱温25℃,检测波长214 nm进行测定。进样前压力进水3.42 kPa×12 s;电动进样-10kV×9 s。SD和SMZ的线性范围分别是0.05~10.00 mg/L(r=0.999 9),0.025~5.00 mg/L(r=0.999 4),检出限分别为1.74、1.39μg/L;将此方法应用于实际样品测定,SD回收率为98%~103%,SMZ回收率为97%~103%。     

纳米钛富集水样重金属镉-胶体金免疫层析法快速检测方法的建立

研究了纳米TiO2分离富集水样中痕量镉的最佳反应条件,应用自制抗Cd(Ⅱ)-iEDTA(Isothiocya-nobenzyi-EDTA)螯合物的单克隆抗体,建立了快速检测环境水样中重金属镉残留的胶体金免疫层析法。采用纳米钛富集水样中的痕量镉,用洗脱剂将吸附的镉离子洗脱后,再采用胶体金免疫层析法快速判断镉离子浓度,进而分析水样中的重金属镉含量。结果表明,pH 9.0时,Cd可被纳米TiO2定量富集,吸附于纳米TiO2上的镉离子可用0.1 mol/L的EDTA.2Na(乙二胺四乙酸二钠)溶液定量脱附。在优化实验条件下,纳米TiO2对Cd的吸附容量为14.7 mg/g,富集倍数可达50倍。制备了比色法判定结果的胶体金试纸条,并建立了纳米TiO2富集-胶体金试纸条联用检测方法。对实测样品的检测耗时约90 min,该方法对Cd的定量下限可达5μg/L,适用于环境水样的检测。     

重金属铬离子胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立了水样中铬离子(Cr3+)检测的免疫试纸条检测方法。将自制的抗Cr3+-EDTA单克隆抗体标记于金颗粒后,包被于玻璃纤维上,将Cr3+-EDTA-BSA抗原和羊抗鼠IgG二抗分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),组装试纸条。该试纸条可检测经亚硫酸氢钠还原为Cr3+的Cr6+,检出限为50μg/L;与10种重金属进行交叉实验验证,除与1 000μg/L的Fe3+有微弱交叉外,与其他重金属均无交叉反应;比较试纸条与仪器法ICP检测加标水样,两种方法的结果呈正相关。该试纸条可在3～5 min内肉眼观察结果,适用于现场检测,满足水样或土壤中重金属铬残留的监测要求。     

Comparison of Fluorescence Immunochromatographic Assay Strip and Gold Colloidal Immunochromatographic Assay Strip for Detection of Microcystin

Abstract

Microcystins are a family of cyclic polypeptides produced by different species of cyanobacteria (blue green algae), which can form blooms in lakes and water reservoirs. However, it is difficult to detect microcystins directly in the water since the concentration of the toxins in water is usually too low. It is necessary to develop a simple and quick method to detect microcystins. In this paper, different detection characteristics of fluorescence immunochromatography and gold colloidal immunochromatography for analysis of cyanobacterial toxins were studied. These two immunochromatography assays are easy to perform, rapid, sensitive, and their quantitative range is within detectable microcystin concentrations in water samples. The fluorescence immunochromatographic system has the unique advantages of low detection limit, and satisfactory accurate results are obtained. The gold colloidal immunochromatographic system has the strong advantage of direct detection of microcystins at the test site without having to bring the samples back to the laboratory. Therefore, these two techniques supplement each other.     

氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立

利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA).将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制备了氯噻啉胶体金增强免疫层析试纸条.系统优化了试纸条的工作条件,并通过交叉反应、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)验证评价GICA的敏感性、特异性、精确性和准确性.在最优条件下,试纸条可在10 min内实现可视化判读,检出限(LOD)为25 ng/mL,除与毗虫啉有较大交叉反应外,与其它类似化合物无交叉反应.氯噻啉在河水、大米、黄瓜、番茄、梨、甘蓝和苹果样品中的添加浓度为0.05,0.5和5μg/g时,GICA的检测结果均符合添加水平.在未知浓度河水和梨样品的检测中,GICA的检测结果与HPLC方法相符.     

峰蜜中杀虫脒的快速测定法

建立了测定峰蜜中杀虫脒的薄层色谱法,不需要大型仪器和特殊试剂,不受基体干扰,整个测定过程仅需３ｈ,回收率在７０％以上,能满足蜂蜜生产和加工现场检验工作需要     

上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测己烯雌酚

采用溶剂热法合成上转换纳米颗粒(UCNPs)-NaYF4∶ Yb,Er,进行表面功能化修饰,将其与己烯雌酚(DES)单克隆抗体偶联,制备荧光探针,以牛血清白蛋白-己烯雌酚(BSA-DES)偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线(T线)和质控线(C线),建立了上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测DES的方法.实验结果表明,此试纸条定量检测DES线性范围为25～ 10000 ng/mL(y=0.43927x-0.57647,R2=0.996),检出限为20.84 ng/mL,单个样品检测时间为15 min,批内和批间变异系数均小于10％,特异性识别能力强,在37℃存放下7天检测值RSD的平均值约为15％.加标回收实验显示平均回收率为90.1％～115.2％,相对标准偏差小于5％,与高效液相色谱法有较好的一致性.     

HPLC快速测定鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留

本实验研究一种快速，简便的测定鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留量的高效液相色谱法。本法采用微量化技术处理样品，以乙腈－氯仿为提取剂提取样品中残留的二氯二甲吡啶酚，提取液经挥发干后，在正已烷和硫酸钠水溶液两相间进行分配以去除脂类物质，然后再用乙腈－氯仿人中将二氯二甲吡啶酚提取出来，将有机相挥发至干，残渣定量溶解于流动相中，以ＲＰ－ＨＰＬＣ分离，紫外检测器于２６５ｎｍ波长下检测，外标法定量。空白鸡肉样品添加     

Application of Colloidal Gold to Fluorophotometric Determination of Human IgG

A method for the determination of human immunoglobulin G(IgG) based on a colloidal gold label by fluorospectrophotometry was developed. The sandwich immunoreaction among goat-anti-human IgG, human IgG and goat-anti-human IgG labeled with colloidal gold nanoparticles was applied in this experiment. First, a sandwich immunocomplex was formed on the surface of 96 well clear polystyrene high bind stripwellTM microplate. After the formation of the sandwich immunocomplex, a solution was added to dissociate the immunocomplex at room temperature. Then the solution of each well was transferred into the corresponding test tube. Thirdly, the rhodamine B solution was injected into each test tube. The rhodamine B chloraurate was extracted into ether that was measured with a spectrofluorometer. The experimental results indicate that the fluorescence intensity increased with the increase of human IgG concentration. The fluorescence intensity of rhodamine B chloraurate at 570 nm was proportional to the logarithm of human IgG concentration in a range from 10 to 5×105 ng/mL. It was shown that the determination of human IgG was easily made with the proposed fluorospectrophotometry.     

基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器

利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB-BSA复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失.将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反射光的强弱计算出克伦特罗的浓度.结果表明:用光电传感方法检测盐酸克伦特罗的线性范围为1～10 μg/L,检出限为0.05 μg/L,回收率为85.5％～96.0％.此光电型传感器检测克伦特罗具有简便、快速、灵敏、特异性强的优点.