褶纹冠蚌寄生蚌螨群落结构

通过对太湖、巢湖、鄱阳湖中褶纹冠蚌寄生蚌螨的感染调查，发现3个湖泊的褶纹冠蚌中有3种蚌螨寄生，但蚌螨群落组成不同。弯弓蚌螨是巢湖的绝对优势种，优势度指数为99．7％；太湖的优势种是Y纹蚌螨，优势度指数70．3％，次优势种为弯弓蚌螨，优势度指数23．4％；鄱阳湖优势种是Unionicola spp，优势度指数52．4％，次优势种为弯弓蚌螨，优势度指数29.5％。蚌螨在宿主褶纹冠蚌内都呈聚集分布，但3个湖泊中不同种寄生蚌螨的分布参数不同，说明其聚集强度不同。利用卡方对种间关联关系进行检验，结果表明鄱阳湖中Y纹蚌螨与弯弓蚌螨之间呈负关联关系（x^2=5．95〉x0.05^2 =3，84，V=-0．57），弯弓蚌螨与Unionicola spp．呈正关联关系（x^2=4．22〉x0.05^2=3．84，V=0．48）。由群落相似系数可以看出3个湖泊寄生蚌螨群落相似程度较低。     

褶纹冠蚌内4种蚌螨的时空生态位分析

对鄱阳湖地区4种蚌螨在褶纹冠蚌(Cristaria plicata)内的生态位宽度和生态位重叠进行了研究。结果表明,褶纹冠蚌内弯弓蚌螨(Unionicola arcuata)种群数量最大,丰盛度为20.26±50.00;丫纹蚌螨(U.ypsilophora)种群数量最小,丰盛度为0.29±1.28。弯弓蚌螨和丫纹蚌螨在外鳃分布数量最多,分别为9.031 7±20.153和0.206 3±0.975 4;簇刺蚌螨(U.penicillatus)在内鳃分布数量最多,为0.688 5±6.764;敏捷蚌螨(U.agilex)则在斧足上分布较多,为0.615 1±0.443 9。弯弓蚌螨的时间生态位宽度值最大,为0.240 7;敏捷蚌螨的宽度值最小,为0.099 6。簇刺蚌螨与弯弓蚌螨的时间生态位重叠值最大,为5.221 2;簇刺蚌螨与敏捷蚌螨之间没有时间生态位重叠。敏捷蚌螨的空间生态位宽度值最大,为0.526 7;丫纹蚌螨的宽度值最小,为0.287 8。弯弓蚌螨与丫纹蚌螨的空间生态位重叠值最大,为2.649 4;丫纹蚌螨与敏捷蚌螨的重叠值最小,为1.910 0。弯弓蚌螨的时-空二维生态位宽度值最大,为0.103 8;敏捷蚌螨的宽度值最小,为0.052 8。簇刺蚌螨与弯弓蚌螨的时-空二维生态位重叠值最大,为11.598 9;簇刺蚌螨与敏捷蚌螨之间没有时-空二维生态位重叠。褶纹冠蚌内4种蚌螨对资源的竞争可能集中在时间上;经过长期的协同进化,弯弓蚌螨较适宜在褶纹冠蚌内生存,簇刺蚌螨有可能与之发生竞争。     

柱状黄杆菌对褶纹冠蚌抗氧化系统主要因子的影响

利用柱状黄杆菌为刺激物,对褶纹冠蚌进行注射感染,在注射后3、6、12、24、48h后分别取血清、肝胰腺,测定其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性和谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)的含量的变化。结果表明,经柱状黄杆菌感染后,实验组血清中的SOD活性在6h时与对照组有显著性差异;GPX的活力在3h与对照组有明显的差异,GSH的含量在24h明显低于对照组。而实验组肝胰腺中GPX的活力在24和48h时显著高于对照组。实验组血清和肝胰腺中MDA和H2O2的含量与对照组没有明显的差异。褶纹冠蚌注射柱状黄杆菌感染后,血清中各抗氧化指标比肝胰腺中的变化大。更多还原     

氯苯和乙腈混合液对褶纹冠蚌抗氧化因子活性的影响

将褶纹冠蚌暴露于氯苯和乙腈的等浓度混合液中,测定了毒物对蚌的血清和肝胰脏抗氧化酶活性。结果表明,血清中SOD的活性先抑制后诱导,肝胰脏中SOD的活性均被诱导;血清中GSH-PX活性在0.1和1mg·L-1浓度组中先被诱导再被抑制,肝胰脏中0.1mg·L-1浓度组先抑制后诱导;血清和肝胰脏中H2O2酶都被诱导;血清中GSH含量上升,肝胰脏中0.1和1mg·L-1浓度组中GSH含量上升,10mg·L-1浓度组中GSH含量一直下降;血清中MDA含量在0.1和1mg·L-1浓度组中被抑制,10mg·L-1浓度组中被诱导后恢复到对照组水平,肝胰脏中各浓度组中持续被诱导。并且低浓度组比高浓度组对污染物的抗氧化作用敏感。褶纹冠蚌肝胰脏中GSH含量可以用来指示生态环境中氯苯和乙腈的污染。     

褶纹冠蚌硫氧还蛋白基因克隆及空间结构分析

运用RACE-PCR方法从褶纹冠蚌血细胞中克隆出硫氧还蛋白(Trx)的cDNA。结果表明褶纹冠蚌TrxcDNA序列全长为1 169bp,其中5′非编码区(UTR)长11bp,3′非编码区长840bp,含有PolyA尾和典型的腺苷酸信号序列AATAAA,开放阅读框长度为318bp,编码105个氨基酸。预测蛋白质分子量为11.6kDa,等电点为5.38,未发现有信号肽。氨基酸序列中含有1个Thioredoxin结构域(T3-K104),区域内包含一个保守的CGPC活化位点。序列同源性比较结果显示褶纹冠蚌Trx与太平洋牡蛎和紫贻贝的氨基酸序列一致性分别为56%、52%。预测的Trx空间结构由5个β折叠和4个α-螺旋组成,α-螺旋包围β折叠形成紧密的球形,这一结构与人的Trx空间结构相似。     

利用相差显微镜和流式细胞术分析褶纹冠蚌血细胞类型

利用相差显微镜对褶纹冠蚌的血细胞进行了观察,结果发现颗粒细胞和无颗粒细胞两大类。颗粒细胞还可以根据细胞和颗粒的大小分为大颗粒细胞和小颗粒细胞,无颗粒细胞也可以根据细胞的大小和细胞的核质比分为透明细胞和淋巴样细胞。另外,利用流式细胞仪进一步分析了褶纹冠蚌血细胞的类群。通过测试前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)两个参数,分别代表细胞的大小和细胞的颗粒度,绘制双参数(SSC×FSC)点图和等高图,FSC和SSC单参数直方图,得出褶纹冠蚌血细胞可以分为两大群,即颗粒细胞(A)和无颗粒细胞(B)两种类型,其中颗粒细胞群可以划为两个亚群,即大颗粒细胞(A1)和小颗粒细胞(A2),无颗粒细胞群也可以划为两个亚群,即透明细胞(B2)和淋巴样细胞(B1)。在四种血细胞中,小颗粒细胞和透明细胞是主要的细胞类群,分别占血细胞总数的56.54%和35.90%,而大颗粒细胞和淋巴样细胞数量较少,分别为4.57%和2.99%。     

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP70基因的克隆及表达研究

运用兼并引物结合RT-PCR方法从褶纹冠蚌(Cristaria plicata)血细胞中克隆出热休克蛋白70(HSP70)的cDNA序列。用半定量PCR方法研究了HSP70mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达情况。结果表明:HSP70cDNA全长为2 664bp,5’非编码区364个核苷酸,3’非编码区383个核苷酸,开放阅读框为1 917     

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP7O基因的克隆及表达研究

运用兼并引物结合RT-PCR方法从褶纹冠蚌(Cristaria plicata)血细胞中克隆出热休克蛋白70(HSP70)的cDNA序列.用半定量PCR方法研究了HSP70 mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达情况.结果表明:HSP70cDNA全长为2664 bp,5’非编码区364个核苷酸,3’非编码区383个核苷酸,开放阅读框为1917 bp,编码638个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论等电点为5.61,分子量为70.3 kD.HSP70基因不含内含子.氨基酸序列分析发现,推导的氨基酸序列含有HSP70家族的3个标签序列(I10 DLGTTYS17,V198 FDLGGGTFDVSIL211和V336VLVGGSTRIPKV QK350).氨基酸序列同源性比较显示HSP70与紫贻贝(Mytihcs galloprovincialis)和美洲牡蛎(Crassostrea virginica)氨基酸序列同源性分别为79.47％和77％.半定量PCR分析显示在正常褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃、闭壳肌和肝胰腺5种组织中均能检测到HSP70的基因表达.经过热休克或病原菌刺激后,蚌各组织中HSP70 mRNA的表达显著增加,其中热休克处理后,蚌的鳃和血液中HSP70 mRNA表达量增加最为显著;而嗜水气单胞菌刺激后蚌的肌肉和鳃组织中HSP70 mRNA表达量增加最明显.     

重金属对褶纹冠蚌Cu/ZnSOD基因mRNA表达和酶活性的影响

为研究重金属离子对褶纹冠Cu/ZnSOD基因mRNA表达和酶活性的影响,采用Cd2+,Cu2+和Pb2+单一胁迫褶纹冠蚌72h,检测0,6,12,24,48和72h,Cu/ZnSODmRNA表达和酶活性的变化。结果表明:在Cd2+胁迫下,Cu/ZnSODmRNA表达量及酶活性均随暴露时间延长而逐渐升高,72h达到峰值,且48和72h均显著性高于对照组(P<0.05);在Cu2+胁迫下,Cu/ZnSOD mRNA表达量及酶活性具有先升高后降低的趋势,12h两者达到峰值,其中,Cu/ZnSOD mRNA表达量在12h显著高于对照组(P<0.05),Cu/ZnSOD酶活性在6,24,48和72h的表达量均显著高于对照组(P<0.05);Pb2+胁迫与Cu2+胁迫趋势相似,Cu/ZnSODmRNA表达量及酶活性均在48h达到峰值,Cu/ZnSODmRNA表达量在24,48和72h显著性高于对照组(P<0.05),Cu/ZnSOD酶活性在48和72h的表达量均显著高于对照组(P<0.05)。说明褶纹冠蚌内脏团中Cu/ZnSODmRNA和酶可以作为生物标志物对水环境中的重金属污染进行检测。     

长吻鮠肝脏线粒体DNA的研究

采用密度梯度离心法及ＤＮａｓｅⅠ、ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化了长吻鮠　（ＬｅｉｏｃａｓｓｉｓＬｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ）肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）．用９种限制性内切酶对ｍｔＤＮＡ进行了分析．ＸｈｏⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＸｂａⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＳａｌⅠ在长吻　ｍｔＤＮＡ分子上分别具１、３、３、２、１、２、４、７、０个切点．ｍｔＤＮＡ分子量约１０．３１×１０５道尔顿，大小为１６．６９ｋｂ．根据单酶和双酶解片段的数目和分子量，建立了长吻　ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱．     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｕｓ）肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了分析，其分子大小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＸｂａⅠ，ＢｇｌⅠ，ＨｉｎｄⅢ，ＢｇｌⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点．根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱     

鳙鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱

用１１种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＢｃｏＲⅠ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ）分析鳙鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，简称ｍｔＤＮＡ），构建了全部１１种酶２２个切点的物理图谱．鳙鱼线粒体ＤＮＡ的分子大小约为１６．４４ｋｂ．酶切位点的分布是非随机的．     

限制酶Bsp63 I的化学修饰与抑制动力学研究

经亲和层析得到Ｂｓｐ６３Ｉ．用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶的巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明：这些基团均与该酶活性有关．动力学研究表明磷酸吡哆醛对酶的抑制是一种类反竟争性抑制．     

限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度．测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１．用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３一丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基团均与该酶活性有关．     

紫云英根瘤菌5个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒外源片段的酶切图谱

对来源于紫云英根瘤菌７６５３Ｒ总ＤＮＡ基因文库的５个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒ｐＮＲ１０２，ｐＮＲ１０３，ｐＮＲ１０８，ｐＮＲ２０３和ｐＮＲ２１３，ＥｃｏＲⅠ酶切表明它们分别携带有一个４．６８，５．０１，５．０４，５．１０或９．３８ｋｂ的外源ＤＮＡ片段．选用１１种内切酶进行单、双酶切分析，建立了重组质粒外源片段的酶切图谱，５个质粒都具有１．７ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＢｇｌⅡ片段和１．９ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＳａｃⅠ片段．     

9个PstI接头片段的合成及其酶反应研究

采用固相亚磷酸三酯法和化学与酶促相结合的方法合成了９个ＰｓｔＩ接头片段，并对它们进行了酶切反应研究．结果表明：ＰｓｔＩ识别序列中尿苷的存在只降低其互补链的切割程度，对其本链没有影响；ＰｓｔＩ切割底物是按两步单股切割机制进行，作用的最小底物是含有识别序列的８～１２聚脱氧核糖核苷酸，且对底物中识别序列两边的碱基对数目有一定要求；ＰｓｔＩ识别序列中的二个胞苷在酶反应中起的作用是不一样的     

细胞脂质分析和DNA分子杂交在短状杆菌分类学研究中的作用

利用薄层层析和气相色谱测定１２株细菌的脂肪酸组份，通过ＵＰＧＭＡ聚类分析绘制其树状图谱；用双相薄层层析获得特征性的极性酯图谱；经光敏生物素非放射性标记ＤＮＡ进行分子杂交测定实验菌株间的ＤＮＡ同源值．一致的结果表明，１２株菌株应分别划归短状杆菌属的３个种，其中有２个被命名为新种，即ＢｒａｃｈｙｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｕｍＩＦＯ１５４７２Ｔ和Ｂ．ｐａｒａｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｕｍＩＦＯ１５２２４Ｔ．应用上述方法，能有效地对难以从形态特征、生理生化特性确定其分类位置的短状杆菌进一步进行分类     

缝管原子捕集原子吸收光谱分析研究

研究了Ａｇ，Ａｕ，Ｂｉ，Ｃｄ，Ｃｏ，Ｃｕ，Ｇａ，Ｉｎ，Ｎｉ，Ｐｂ，Ｐｄ，Ｓｂ，Ｚｎ等１３个元素的原子捕集与释放条件．结果表明，缝管高度和火焰状态对灵敏度影响极大．在最佳实验条件下，捕集１ｍｉｎ，测得Ａｇ，Ａｕ，Ｂｉ，Ｃｄ，Ｃｏ，Ｃｕ，Ｇａ，Ｉｎ，Ｎｉ，Ｐｂ，Ｐｄ，Ｚｎ的特征浓度分别为８．１×１０－４，１．７×１０－３，３．５×１０－３，３．７×１０－５，１．６×１０－２，１．８×１０－３，１．６×１０２，３．６×１０－３，２．２×１０－２，２．４×１０３，４．７×１０－２，１．８×１０－３，１．３×１０－４ｍｇ·Ｌ－１，比常规火焰原子吸收光谱法的灵敏度依次提高６２，１０６，２５４，２７０，５，２８，１３１，２７１，３，８３，５，２３９，７７倍，本法测定了环境、生物、医药和金属等试样中痕量元素．