尿激酶对纤维蛋白低亲和性的结构基础——Ⅰ.尿激酶及相关环饼结构域的三维结构预测

根据凝血酶原(Prothrombin)环饼结构域-1(PTK-1)2.8晶体X光衍射结构,用残基置换和构型建造(Modeling)预测了纤溶酶原环饼结构域-1(PGK-1),组织型纤溶酶原激活因子环饼结构域-2(PAK-2)和尿激酶原环饼结构域(UKK)的三维结构。预测的三维结构显示PGK-1具有典型的配体结合部位,PAK-2在结构上不具有和配体结合的典型正电荷中心,但邻近的69位精氨酸残基能和配体的羧基生成离子对。UKK在结构上不能形成和配体结合的正负电荷中心,这可能是尿激酶对纤维蛋白低亲和性的主要原因。     

尿激酶对纤维蛋白低亲和性的结构基础——Ⅱ.尿激酶A链149—157片段对纤维蛋白促进tPA激活纤溶酶原的抑制作用

本文从低分子量尿激酶(LUK)中分离并纯化了UK 135—157片段,用放射结合分析证明UK 135—157片段和纤维蛋白对tPA的结合呈竞争关系。用酪蛋白降解系统证明此片段可抑制纤维蛋白促进tPA对纤溶酶原的激活。化学合成了UK149—157九肽(R-肽)以及由Asp取代Arg 154和Arg 156的相应九肽(D-肽),发现R-肽对纤维蛋白促进tPA激活纤溶酶原有显著的抑制作用,而D-肽却全无作用。本文结果证明:UK 149—157片段中的正电荷残基在抑制环饼结构域的纤维蛋白结合活性中起重要作用。     

GnRHa对去垂体大鼠卵巢tPA和PAI-1基因表达的调节

给去垂体大鼠注射促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物(GnRHa)可诱导卵巢颗粒细胞(GC)和膜间质细胞(TI)组织型纤溶酶原激活因子(tPA)和抑制因子(PAI-1)基因在时间上和不同细胞间的协调表达。tPA主要由GC产生,GC也分泌少量PAI-1;而卵巢中的PAI-1主要由TI产生,TI也分泌少量tPA。在排卵前GC和TI中tPA mRNA和生物活性均达到高峰;与此相反,PAI-1的表达在GC和TI中却完全不同,TI中的PAI-1 mRNA和生物活性在tPA峰值前6h达到最高水平;而GC中的PAI-1峰值却出现在排卵后。上述变化与人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导正常大鼠排卵所引起的两种基因的表达的动力学变化无异。这些结果提示,hCG(通过PKA途径)和GnRHa(通过PKC途径)这两种不同的调控信号可通过各自不同的受体,经过不同的信息传递系统而最终影响tPA和PAI-1基因的相同的协调表达引起排卵。     

大鼠颗粒细胞tPA和PAI-1表达的激素调控

本文研究了促性腺激素(FSH和LH)和促性腺激素释放激素(GnRH)类似物(GnRHa)对大鼠颗粒细胞(GC)tPA和PAI-1表达的调节。(1)FSH和LH及GnRHa或大蓟二萜醇-12-14烷基-13乙酸盐(PMA)可单独刺激GC分泌tPA;FSH(或LH)与GnRHa(或PMA)共同作用于GC时所增加的tPA活性比两者单独作用之和要高;(2)FSH和LH降低GC的PAI-1活性,而GnRHa和PMA则明显刺激GC的PAI-1活性和PAI-1 mRNA水平;(3)GnRHa和PMA刺激GC的PAI-1活性和PAI-1的mRNA水平;但在FSH或LH存在的情况下这种刺激受到完全抑制。因此促性腺激素和GnRHa对GC tPA和PAI-1表达的调控机制可能是不同的。     

牛天然纤溶酶原Kringles结构域片段的获得及其抑制内皮细胞增殖作用研究

利用猪胰弹性蛋白酶和尿激酶限制性酶切牛纤溶酶原,获得了纤溶酶原Kringles结构域片段Kringles1-3(K1-3)和Kingles1-4(K1-4),研究发现,在没有自由巯基供体存在的条件下,尿激酶酶发牛纤溶酶原也能够产生K1－4,从而认为存在由尿激酶酶切牛纤溶酶原直接产生K1－4的途径,所获得的K1－3和K1－4对恒河猴脉络膜－视网膜RF／6A血管内皮细胞的增殖有抑制活性。     

人组织型纤溶酶原激活剂表达调控及高效表达的研究——Ⅰ.t-PA mRNA 3′-UTR对其表达的调控

运用分子剪切技术构建了含不同长度3′端非翻译区(3′-UTR)的t-PAcDNA克隆,体外转录的mRNA在兔网织红细胞裂解物中翻译和COS-7细胞中表达的结果表明t-PA mRNA 3′-UTR序列对其表达有明显抑制作用,3′-UTR缺失使t-PA表达水平提高3—8倍。进一步研究表明,t-PA mRNA 3′-UTR对其表达的抑制是由3′末端长约200nt的富含AU序列所致。RNA稳定性试验证实这段富含AU的序列使t-PA mRNA稳定性下降3倍以上;将该序列插入荧光素酶(Luc)基因3′-UTR,使Luc的表达水平明显降低。分析了该序列调节t-PA表达的可能机理,提出了调控的模式。     

小鼠Sertoli细胞tPA和PAI-1基因表达的激素调节

本文首次提出证据表明:(1)在FSH和cAMP生成因子作用下,小鼠Sertoli细胞主要分泌tPA,而Leydig细胞主要产生uPA;(2)Sertoli细胞也具有分泌PAI-1的功能。PAI-1基因表达明显受FSH、生长因子和GnRH激发;(3)因为在各种激素作用下Sertoli细胞分泌到培液中的tPA和PAI-1活性蛋白与细胞中的tPA和PAI-1mRNA增加一致,激素是在转录水平上调节小鼠Sertoli细胞tPA和PAl-1的生物合成。Sertoli细胞产生的tPA可能与精子发生有关。     

重组人糖基化尿型纤溶酶原尿激活剂中糖链的组成研究

重组人糖基化尿型纤溶酶原激活剂(RHU-PA)是一种溶血栓药物。研究了使单糖从RHU-PA中定量释放的酸解条件和纯化单糖的方法。应用气相色谱技术测定了RHU-PA上的糖链由岩藻糖、甘露糖、半乳糖和N-乙酰氨基葡萄糖组成,相对摩尔比为1.0∶3.9∶1.1∶3.4。酸解法测得的总糖含量与酶解法测得的结果一致。     

应用ABEEMσπ/MM模型对重组人纤溶酶原Kringle 1结构域与配体分子的对接计算

应用原子-键电负性均衡方法的浮动电荷分子力场(ABEEMσπ/MM),对重组人纤溶酶原Kringle1结构域(K1Pg)与配体ε-Aminocaproic acid(EACA),trans-4-(Aminomethyl)cyclohexane-1-carboxylic acid(AMCHA),L-Lysine(Lys),7-Aminoheptanoic acid(7-AHA)和Benzylamine进行了半柔性对接计算.用ABEEMσπ/MM模型优化得到的复合物K1Pg/EACA和K1Pg/AMCHA的结构很接近实验晶体结构.此外通过对5种配体与K1Pg结合能的计算,得出5种配体与K1Pg结合能的大小顺序为AMCHAEACA7-AHALysBenzy-lamine,与实验中测得5种配体与K1pg的平衡结合常数K值大小顺序相一致.     

双层包裹聚磷酸铵微胶囊合成及其在环氧树脂中阻燃研究

采用原位聚合法制备了蜜胺树脂(MF)和环氧树脂(EP)双层包裹聚磷酸铵(APP),得到一种新型核壳结构的微胶囊阻燃剂(EMFAPP).用傅里叶红外光谱(FTIR)和扫描电镜(SEM)对微胶囊的核壳结构进行了表征;用极限氧指数(LOI)、垂直燃烧等级测试(UL 94)对EMFAPP在EP中的阻燃性能进行了研究.EMFAPP在EP基体中阻燃性能优异,当其添加量大于7%时EP/EMFAPP均通过UL 94 V-0级,LOI值达27.0%以上.与未包裹APP相比,EMFAPP耐水性明显提高;经水处理(75℃,6天)后,EMFAPP/EP仍可保持良好的阻燃性能.采用热重分析对EMFAPP及其阻燃复合物的热降解行为进行了研究,EMFAPP能够促进成炭,EP/EMFAPP(8 wt%)在700℃残炭率达16.2%,但其低温稳定性有所下降.此外,利用热失重-红外联用对EMFAPP/EP的热降解行为进行了研究,探讨相关阻燃机理.     

中国人ω1型干扰素基因的克隆、一级结构测定以及在大肠杆菌中的表达

采用聚合酶链反应(PCR)方法,从中国正常胎儿肝细胞染色体DNA中分离并克隆了人ω1型干扰素基因,测定了核苷酸全序列,表明原有争议的第88位密码子为GGA的核苷酸序列是正确的,因此该氨基酸为Gly。随后又利用PCR技术将所获的ω1型干扰素基因原始克隆改造成适于在大肠杆菌中表达非融合蛋白的结构形式,并以pBV220为载体在P_RP_L串联启动子控制下进行温控表达。表达产物的抗病毒活性达6.5×10~7单位/升菌液(O. D_600=0.75)。IFN-ω1不仅具有很高的抗病毒活性,同时在结构上与动物滋养层蛋白高度相似,而后者又是作为母体妊娠识别信号存在于多种动物体内的抗黄体退化蛋白,因此本文获得的这—ω1型干扰素基因及重组蛋白在理论和实际上都有进一步研究的价值。     

原发肾病综合征患儿超声颈动脉参数、血清sTREM-1、suPAR水平变化及与急性肾损伤的相关性

选取原发性肾病综合征(PNS)患儿96例作为研究组,选取同期96例健康体检儿童作为对照组,开展前瞻性队列研究,均行超声颈动脉参数、血清可溶性髓系细胞表达的触发受体-1(sTREM-1)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)水平检测,并进行对比分析.本研究发现,研究组患儿颈动脉内中膜厚度(cIMT)、平均管壁横...     

5-苯基-1,3,4-噻二唑衍生物的合成及含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶1 (SHP1)抑制活性研究

作为细胞信号转导通路的关键节点分子,含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶l(SHPl)是潜在的抗肿瘤靶点.已知的SHP1抑制剂屈指可数.设计并合成了11个5-苯基-1,3,4-噻二唑衍生物.活性测试结果表明,部分衍生物对SHPl显示了一定强度的抑制活性.其中,化合物5b [IC50=(1.33±0.16) μmol/L]对S...     

hCG和GnRHa诱发去垂体大鼠排卵及卵巢PA活性变化的比较研究

促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)能诱导去垂体大鼠排卵,与hCG相比,所诱导出的排卵时间提前2-4h.GnRH拮抗物能完全阻断GnRHa和hCG不是作用在同一受体部位上.GnRHa也同hCG一样,只增加卵巢中组织型纤蛋白溶酶原激活因子(tPA)活性,而对尿激酶型PA(uPA)无明显影响.由hCG和GnRHa所诱导的卵巢tPA活性皆在排卵前达到高峰;GnRHa也能刺激卵丘-卵母细胞复合体中tPA活性;注射hCG明显增加血清孕酮水平,而GnRHa对血清孕酮含量没有明显影响.实验说明,GnRHa和hCG诱导排卵可能都是通过增加卵巢中tPA的活性这一共同途径而实现的.     

吡啶-2-甲酸镍的合成及其晶体结构

以吡啶 2 甲酸和Ni(ClO4)2·6H2O为原料反应制得配合物[Ni(C5H4NCOO)2(H2O)2]2H2O,并通过X 射线衍射法测定其晶体结构.该化合物属于单斜晶系,空间群P21/n,晶胞参数:a=0.97351(15)nm,b=0.52254(8)nm,c=1.4483(2)nm,β=90.119(3)°,V=0.7367(2)nm3,Z=2,Dc=1.690g/cm3,μ=1.362mm 1,F(000)=388,结构偏离因子R1=0.0316,wR2=0.0902,共收集到4771个强度数据,其中1700个独立衍射点,1489个(I>2σ(I))可观测点.X 射线分析表明晶体是由分子间氢键和π π弱相互作用堆积而成的二维层状结构.     

半合成人肿瘤坏死因子cDNA的构建及其在大肠杆菌中的高表达

本文报道从人基因文库中分离淋巴毒素(LT)基因的同时,克隆了肿瘤坏死因子(TNF)基因,这两个基因相距1.2kb.TNF基因有4个外显子,第4外显子编码TNF成熟蛋白157个氨基酸中的140个.将第4外显子切出一部分,再人工合成编码其余氨基酸的DNA片段,两者连接构成重组的人TNF(rhTNF)cDNA,并克隆在大肠杆菌表达载体中成功地得到表达.5 l罐发酵得菌体约20g/l,以L929为靶细胞测定细胞毒活性为10~6-10~7单位/ml.高压液相色谱仪分离纯化rhTNF,冻干后得白色粉剂.测定了这种rhTNF的氨基端的10个氨基酸序列,证明与天然的人TNF完全相同.纯度约为95％.     

MDMV外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

报道了玉米矮花叶病毒(MDMV)全长外壳蛋白cDNA基因的克隆、序列分析和表达产物鉴定的结果。根据其cDNA序列推测的外壳蛋白氨基酸顺序全长共有313个氨基酸,分子量总和为35 400 D,与聚丙烯酰胺凝胶电泳估算的值36 000 D相近,克隆的病毒外壳蛋白基因cDNA 3′-末端非编码区含有256个碱基。将此外壳蛋白的基因插入pUC19的1acZ基因中,转入E.coli后诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异性的蛋白带,经Western吸印与抗MDMV的兔血清呈阳性反应,证实所克隆的cDNA基因为MDMV外壳蛋白基因,并且能够正确表达。     

高分子负载咪唑啉钯催化剂的合成及其对Heck反应的催化性能研究

以普通商品聚丙烯腈(PAN)为原料, 合成了四种功能基化的纤维高分子载体, 挑选出其中一种与金属钯盐反应合成出了高分子负载钯催化剂. 利用元素分析、红外光谱、原子吸收光谱、SEM及XPS等手段对其结构进行了表征. 研究了该催化剂对碘代苯与丙烯酸乙酯反应的催化性能及循环使用性能.     

WS2纳米棒的合成及其摩擦学性能

以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为表面活性剂,利用水热合成法在180℃条件下成功制备出WS2纳米棒。用XRD、SEM、TEM和HRTEM对WS2纳米棒的结构进行表征和分析,并提出了可能的生长机理。将WS2作为润滑油添加剂加到基础油中,用CETR UMT-2摩擦磨损仪测试其摩擦学性能。结果表明:WS2纳米棒作为润滑油添加剂表现出良好的摩擦性能。     

K2O对合成DMC用Cu-Ni/V2O5-SiO2催化剂性能的影响

V2O5 SiO2(VSiO) supported Cu Ni K2O catalysts for the synthesis of dimethyl carbonate were prepared using isovolumic impregnation. Based on TPR,TPD, IR and micro reactor techniques, the effect of K2O on the adsorption and reaction of CO2 and CH3OH on the catalyst were characterized. The results show that addition of K2O exerts obvious influence on the charge distribution of the active sites on Cu Ni/VSiO catalyst,increases the intensities of CO2 horizontal adsorption state, while that of the dissociation state of methanol descends. When the ratio of K is above 15 ％, K2CO3 is formed on the catalyst. Moreover,the main reaction products of CO2 and CH3OH on Cu Ni K2O/VSiO catalyst are still DMC, H2O, CO and CH2O,and with the addition of K2O, the conversion of reactants rise, but the selectivity of by-products decreases.