秀丽小杆线虫Caenorhabditis elegans pkc-2基因cDNA的克隆和表达

蛋白激酶C在秀丽小杆线虫中具有调节肌细胞渐进性萎缩的功能.为了揭示它的调节机制,本研究克隆了秀丽小杆线虫中蛋白激酶C pkc-2基因的cDNA pkc-2-c,构建了含该pkc-2 基因cDNA亚型的重组质粒pPD 118.20-pKG 63;揭示了该cDNA在秀丽小杆线虫体壁肌细胞中的定位.     

遗传毒物对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)寿命的影响

研究了丝裂霉素C,噻替哌和环磷酰胺对秀丽隐杆线虫(C.elegans)温度敏感突变型DH26衰老的影响。结果表明,除极高浓度(100μg/ml)的丝裂霉素C能缩短线虫寿命外,其余对寿命均无影响。     

马拉硫磷对秀丽隐杆线虫的急性毒性研究

研究了马拉硫磷对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)形态、行为和生理生化等方面的影响,发现马拉硫磷可以导致线虫体型、繁殖能力、衰老、趋化性以及一些代谢酶类变化,但对线虫的寿命、运动能力和靶标酶并未产生显著影响.表明秀丽隐杆线虫对马拉硫磷有较强的耐受性,体内可能存在对马拉硫磷高效的代谢途径.     

利用秀丽隐杆线虫构建抗菌物质体内筛选模型

以秀丽隐杆线虫为模式生物,建立抗菌物质活体筛选模型．以铜绿假单孢菌感染线虫后,加入不同剂量已知抗生素治疗,观察线虫存活情况及体内细菌数量变化,确定模型建立的操作条件．结果表明,线虫感染程度可量化操作,最佳操作参数为：铜绿假单胞菌培养时间10～12h,菌液浓度A600值1．0—1．2,线虫感染时间15h．抗生素的使用能够显著提高感染线虫存活状况,其中环丙沙星治疗浓度范围为0～20μg／mL,线虫存活率和药物剂量之间具有稳定的线性关系．     

溶酶体活性影响秀丽隐杆线虫脂肪沉积的作用

文章通过在秀丽隐杆线虫的生长培养基(nematode growth medium, NGM)中补充1 mmol/L葡萄糖或0.02 mmol/L棕榈酸诱导线虫的脂肪沉积,结果发现,随着线虫脂肪沉积的增加,其溶酶体数量和酸化水平显著提升,说明溶酶体可能参与了营养物诱导的线虫脂肪沉积;用溶酶体抑制剂氯喹和溶酶体生物合成关键转录因子hlh-30的突变体抑制线虫溶酶体活性,结果发现线虫脂肪沉积水平显著降低;利用线虫溶酶体营养感应和脂代谢相关信号关键分子aak-2、daf-15和rsks-1的突变体,发现mTORC1信号通路在上述溶酶体影响的线虫脂肪沉积中发挥关键作用,结果表明,溶酶体通过mTORC1信号通路影响线虫能量营养过剩所导致的脂肪沉积。     

余甘子对秀丽隐杆线虫的抗衰老作用

以模式生物秀丽隐杆线虫(简称线虫)为模型,考察质量浓度分别为1.0,2.0,4.0mg/mL的余甘子提取物对线虫的抗氧化作用.实验结果表明:1.0 mg/mL的余甘子提取物能显著提高线虫产卵量,且对线虫的运动能力无显著影响,即在实验的质量浓度范围内,余甘子提取物具有低毒性;1.0mg/mL的余甘子提取物能显著延长线虫的寿命,并具有抗氧化压力作用;1.0mg/mL的余甘子提取物可显著提高线虫体内过氧化物酶活性,从而达到抗氧化的保护作用.     

以秀丽隐杆线虫为模型的玛咖功效评价

先对玛咖进行脱油、水提、冻干,再将所得水提物冻干品与Escherichia coli OP50菌液进行混合,稀释至终质量浓度为1,2mg/mL.以秀丽隐杆线虫(简称线虫)为模型,考察玛咖水提物对线虫的抗氧化作用:经寿命、产卵、吞咽、运动能力实验表明,玛咖水提物对线虫无明显毒性作用,且1,2mg/mL玛咖水提物均能显著延长线虫寿命;由玛咖水提物对线虫热激氧化压力诱导表明,玛咖水提物对线虫体外热激氧化压力有保护作用;通过油红O对脂肪染色表明,玛咖水提物具有一定降脂功效.     

microRNA-260在秀丽隐杆线虫衰老进程中的作用研究

本文以秀丽隐杆线虫(C. elegans)为模式生物,通过测定microRNA-260(miR-260)编码基因敲除后(Deletion)突变株与野生株(N2)线虫寿命、生殖能力、进食能力和热刺激条件下的生存能力,研究miR-260在衰老进程中发挥的作用.利用线虫体内衰老相关关键基因表达量的分析,探讨miR-260干预衰老的可能分子机制.实验结果显示：miR-260突变株系相对于野生型线虫寿命缩短,子代数目减少,进食能力的衰弱速度减慢,热刺激条件下的生存条件能力降低.结论：miR-260敲除后总体上加快秀丽隐杆线虫突变体衰老的进程.其可能的分子机理为,miR-260主要通过影响饮食限制通路和TOR信号通路中共同关键基因eat-2以及JNK信号通路中的jnk-1基因等的表达来调控线虫的衰老进程.     

水溶性人参皂苷对秀丽隐杆线虫生物学功能的影响

 以秀丽隐杆线虫作模式生物, 研究水溶性人参皂苷成分对线虫的寿命、 产卵和运动等生命活动的影响. 结果表明: 质量浓度为200 μg/mL的人参皂苷可使线虫寿命延长, 减缓衰老; 质量浓度为500 μg/mL的人参皂苷则对线虫具有一定的毒性作用.     

秀丽线虫基因敲除突变库中sec-10突变种系的筛选

从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的基因突变库中筛选出目的基因的突变种系,并对其进行分子机制的研究,是研究不同基因及其蛋白产物作用机制的一项基本技术.以sec-10突变种系的成功筛选为例,详细描述如何通过PCR检测方法从笔者实验室所构建的国内第一个秀丽线虫基因敲除突变库(可进行多达几百次的筛选量)中筛选出目的基因的突变种系,同时证明突变库的可用性.根据sec-10基因序列设计多套针对不同靶点的含干扰引物的巢式引物,通过凝胶电泳正确判断扩增产物的特异性和干扰引物对长片段产物的抑制特性,以选择有效的检测引物.简化了线虫复苏后的饲养方法,以取代恒温恒湿培养箱的使用.通过纯和致死平衡子的引入,克服了sec-10基因突变致死所导致的无法稳定传代的问题.总结了从秀丽线虫基因突变库中筛选突变种系的注意要点,为国内其它线虫基因突变库的筛选提供重要的参考意见.     

Cloning and expression analysis ofMBLL cDNA

Thembl (muscleblind) gene ofDrosophila encodes a nuclear protein which contains two Cys₃His motifs. The mutation ofmbl gene will disturb the differentiation of all theDrosophila’s photoreceptors. Primers have been designed according to human EST086139, which is highly homologous tombl gene. Human fetal brain cDNA library has been screened and a novel cDNA clone has been obtained. The 2595 bp cDNA, designatedMBLL (muscleblind-like), contains an open reading frame which encodes 255 amino acids and has 4 Cys₃His motifs (GenBank Acc. AF061261). The amino acids sequence shares high homology toDrosophila’s mbl. The Northern blot and RNA dot blot hybridization of 43 human adult tissues and 7 fetal tissues show thatMBLL is a widely expressed gene, but the expression amounts differ in these tissues.     

佛手GRAS基因的克隆及表达分析

利用抑制消减杂交法从芸香科柑橘属不耐寒植物佛手中分离得到了一个表达序列标签(EST)片段,结合RACE技术克隆获得该基因的1 669 bp序列,编码区长1 236 bp,编码413个氨基酸.通过Blastn同源序列比对分析,结果显示该基因与拟南芥已知的GRAS基因同源性较高;与GenBank数据库比对分析,表明该基因具有GRAS特有的保守结构域.因此,命名该基因为:CmsGRAS(GenBank登录号:JF440647).用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法研究了该基因在低温胁迫处理下的表达特性,结果显示该基因在低温胁迫后的表达量有明显的变化.     

Cloning and analysis of a cDNA encoding acetohydroxy acid isomeroreductase from G2 pea

Using cDNA representational difference analysis (cDNA RDA) method, we have successfully isolated a gene fragment whose expression was specifically induced by external GA₃ application. Screening a G2 pea cDNA library using this fragment as a probe, we obtained a 2036 bp full-length cDNA. It contains a 1746 bp open reading frame and encodes a protein of 581 amino acids with a theoretical molecular weight of 64 ku. It shares high-level sequence identity withAAIR genes from other plant species. This cDNA was cloned into expression vector and recombinantE. coli DH5α cells with remarkable AAIR enzyme activity were obtained.     

Trichototaxis songi细胞皮层色素颗粒的显微和亚显微观察

应用微分干涉相差显微术、扫描电镜和透射电镜显微术等显示了腹毛目纤毛虫Trichototaxis songi细胞形态及细胞皮层结构,观察到：细胞皮层存在红色色素颗粒和无色颗粒两种皮层颗粒．皮层色素颗粒与纤毛虫细胞呈现红色有关,它们使细胞的颜色保持不变．作者认为,这些色素颗粒可能已成为细胞皮层结构的基本成分,与纤毛器的功能作用有关;并且它们很可能是一类共生于纤毛虫细胞皮层内及皮层表面的细菌共生体．     

斑马鱼Cyclin C的cDNA克隆及其在发育过程中的表达

细胞周期蛋白C(cyclin C)与细胞周期依赖性蛋白激酶cdk8结合,通过磷酸化RNA 聚合酶 II 和 TFIIH调控转录.在脊椎动物胚胎发育过程中有关细胞周期蛋白C合子型转录激活机制尚知甚少.本研究克隆了斑马鱼细胞周期蛋白C基因,并用Northern杂交和整体原位杂交技术检测其在胚胎发育过程中的表达状态.结果显示,斑马鱼细胞周期蛋白C高度保守,与人细胞周期蛋白C有88％的蛋白序列同源;斑马鱼细胞周期蛋白C在母型期开始表达,其表达伴随中囊胚转换时期的合子型转录激活以及整个胚胎发育过程.     

翘嘴鳜髓过氧化物酶基因克隆及重链序列的原核表达

利用RT PCR和RACE PCR方法,从翘嘴鳜中克隆出髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）cDNA全长。其开放阅读框有2?292个核苷酸,编码763个氨基酸的蛋白。虽然序列相似性分析发现该蛋白与哺乳动物MPO相似性为64%～65%,但分子质量大小相近。翘嘴鳜含有1个与人MPO相似的血红素基,1个保守的Ca2+结合位点,6个分子内二硫键,以及6个糖基化位点。由此推测翘嘴鳜MPO蛋白的空间结构及催化机制可能与哺乳动物的相似。将翘嘴鳜MPO的部分DNA序列连接到pET 32a c(+)载体上,成功构建了1个重组表达质粒pET MPO,该质粒在大肠杆菌（DE3）中获得了高效表达。另外,利用重组蛋白N末端带有的6×His标签,通过Ni2 NTA柱纯化获得了翘嘴鳜MPO重组蛋白。     

九龙牦牛CAST基因部分序列的克隆及其表达差异研究

根据牛钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastatin, CAST） 设计并合成一对引物,从九龙牦牛肌肉组织提取总RNA,利用RT-PCR扩增获得九龙牦牛CAST基因部分片段,利用SQRT-PCR技术检测九龙牦牛各组织中CAST mRNA的表达差异．结果,成功克隆九龙牦牛CAST部分cDNA序列485bp,获得GenBank登录号为FJ483833;用DNAman软件分析发现九龙牦牛CAST基因与普通牛的核苷酸同源性依次为99％;SQRT-PCR组织表达检测表明,CAST基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪中均表达,在心脏中表达最高,在脂肪组织中表达最低．