主动外排系统作为鲍曼不动杆菌耐环丙沙星重要机制的研究

目的探讨耐环丙沙星鲍曼不动杆菌的主动外排机制。方法试管稀释法检测56株临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感性;用直接荧光法检测耐药株在有无外排泵抑制剂时鲍曼不动杆菌胞内药物聚集浓度;结合药敏和直接荧光法两项结果筛选出6株外排抑制剂存在时胞内药物聚集浓度明显升高的环丙沙星耐药株,对该耐药组及对照敏感组做胞内环丙沙星聚集浓度的线性测定;RT—PCR法检测两组菌株主动外排泵基因adeABC的表达水平;对adeABC自身启动子区域相关基因片段进行PCR扩增并测序。结果（1）56株鲍曼不动杆菌中,48株对环丙沙星耐药（MIC〉4rag／1）;0株对环丙沙星中介（1mg／1≤MIC≤≤4mg／1）;8株对环丙沙星敏感（MIC〈1mg／1）。（2）耐药组药物积累量不及敏感组,加入外排泵抑制剂叠氮化钠后积累量上升并接近敏感组。（3）耐药组主动外排基因adeB的表达水平（2．372±0．032）明显高于敏感组（1．654±0．040）（P〈0．01）。（4）自身启动子区域相关基因片段没有发现突变。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药现象非常严峻;外排泵基因adeABC的过度表迭是鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的重要原因;adeABC基因自身启动子区域无导致adeABC过度表达的基因突变。     

铜绿假单胞菌中RND外排泵功能的研究

目的铜绿假单胞菌的耐药性与细胞膜的低通透性和膜上存在的RND外排泵有关,而且RND外排泵起主导作用。方法利用发光杆菌的荧光素酶基因操纵子luxCDABE为报道子,对铜绿假单胞菌基因组中所有的12种已知和可能的RND外排泵基因进行了系统的研究。结果低于抑制浓度庆大霉素对PAOC和PAOI有明显的调节作用。低于抑制浓度四环素对PAOJ调节作用,但属于同一类抗生素的土霉素却没有调节作用。α-氨苄青霉素对12个RND外排泵中的11个都有明显的调节。结论这些RND受不同类型抗生素调节并将它们向外排出。外排泵所向外排出的物质如抗生素,在结构上没有可识别的相关性。其中一个由基因PA2520,PA2521和PA2522组成的RND外排泵,不仅能够向外排出锌离子,而且还能向外排出抗生素。     

葡萄球菌对氟喹诺酮类药物耐药机制研究进展

喹诺酮类(quinolone)是一类以1，4-2氢-4-氧-3喹啉羧酸为基本结构的化学合成抗菌药物。由于氟基团的引入而获得一系列体外抗菌活性的优良氟喹诺酮类化合物(fluroquinolone，FQ)，如带一个氟基团的环丙沙星(ciprofloxacin，CFX)、依诺沙星(enoxacin，ENX)、诺氟沙星(norfloxacin，NFX)、氧氟沙星(ofloxacin，OFX)；带两个氟基团的洛美沙星(lomefloxacin，LFX)；三个氟基团的氟罗沙星(fleroxacin，FLRX)、托舒沙星(tosufloxacln，TFX)。     

大肠杆菌耐药机制和消除耐药性方法概述

由于广谱抗菌药的滥用以及细菌间耐药基因的转导等因素,导致耐药菌增多,尤其是大肠杆菌对常用抗菌药物耐药的发展越来越令人担忧．本文从大肠杆菌耐药的遗传学机制、生物化学机制和开发新抗菌药物及抑制剂方面的研究进行了综述,提供了大肠杆菌耐药特点及其规律的最新研究进展,从而为防治大肠杆菌耐药的产生及合理用药提供理论依据．     

利用PCR产物一步法敲除大肠埃希菌的外排泵基因acrAB

通过电转化将一段PCR产物引入宿主菌BW25113/pIJ790细胞内,PCR产物两端有与染色体同源的30个核苷酸序列,中间是抗生素抗性基因。pIJ790上编码λ噬菌体的3个重组蛋白:Exo、Bet和Gam组成Red重组系统,可实现线性片段的一步法高效重组,以PCR产物中的抗生素抗性基因取代靶基因。通过该方法得到了大肠埃希菌的外排泵基因acrAB敲除突变株,该菌株在抗菌物质的抗菌机制研究方面能发挥一定的作用。     

成都市武侯区动物性食品源大肠杆菌耐药表型的检测与分析

采用K-B纸片扩散法对36株从2011年到2013年期间分离的携带有毒力基因的动物性食品源大肠杆菌进行氨苄西林、四环素、头孢曲松、环丙沙星等12种抗菌药物的药敏试验.结果表明受试菌株对头孢噻肟、四环素、氨苄西林、诺氟沙星、阿米卡星、氯霉素和环丙沙星有较高耐药率,分别为88.89%、77.78%、69.44%、61.11%、58.33%、47.22%和47.22%.大部分受试菌株普遍存在多重耐药性,耐药谱集中在3耐、5耐、6耐和7耐,特别是5耐以上的耐药菌株占到72.1%.菌株对氯霉素、庆大霉素、四环素和氨苄西林的耐药性随时间推移有上升趋势,并推测携带eae A毒力基因型的大肠杆菌与AMK、CTX、AZT、TET和AMP耐药性之间具有一定关联性,携带aggR毒力基因型的大肠杆菌与TET、CTX、NOR、AMP和CIP耐药性之间具有一定关联性.研究结果揭示了成都市动物性食品源大肠杆菌耐药性普遍和严重,为成都市大肠杆菌耐药性的安全评价提供依据.     

中药逆转乳腺癌多药耐药的研究进展

乳腺癌严重威胁着女性健康,化学药物治疗在乳腺癌的治疗中起着至关重要的作用,但临床治疗中常因乳腺癌细胞产生多药耐药性而导致化学药物治疗的失败。本文就乳腺癌细胞多药耐药性产生的主要机制进行了论述,并介绍了单味中药成分、中药复方及中药联合在逆转乳腺癌多药耐药性中的应用及目前研究进展。     

耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌的耐药机制和应对策略研究进展

耐药的革兰阴性杆菌的流行播散是全球重大的公共卫生问题.对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株,往往对其他临床常用的抗菌药物也耐药,使得临床的抗感染治疗常面临无药可用的困境,导致高额的医疗花费和较高的病死率.对耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌的耐药机制:碳青霉烯酶的产生、孔蛋白的调节作用、药物主动外排泵的过度表达、生物膜的形成、药物作用位...     

规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因调查及其共转移研究

为了解全国20家规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因的流行现状及其共转移情况,对2013-2015年间分离自粪样和苍蝇中的549株大肠杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）方法筛选出blaCMY-2阳性菌株;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析blaCMY-2阳性菌株的遗传进化关系;K-B纸片法检测阳性菌株对13种抗菌药物的耐药性;利用PCR技术检测19种相关耐药基因以及14种毒力基因;接合转移试验和质粒复制子分型研究耐药基因及毒力基因的传播方式。结果,33株大肠杆菌呈CMY-2阳性,阳性率为6.0 %,且均表现为多重耐药;检测到15种耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、blaOXA-1、qnrBDS、aac(6’)-Ib-cr、oqxA、tetA、tetC、sul1、sul2、sul3、rmtB和flor）和4种毒力基因（iutA、traT、fyuA和VagC）;33株携带blaCMY-2基因菌株中有21株接合转移成功,blaCMY-2基因可通过lncA/C或lncI1质粒与耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、tetA或sul2）和（或）毒力基因（traT或VagC）共同转移。本研究阐明了规模化鸡场产CMY-2大肠杆菌携带耐药基因与毒力基因的情况,证实了细菌中质粒介导的耐药与毒力的共转移,为耐药性传播及疾病防控提供了参考。     

CDK4/6抑制剂耐药乳腺癌处理策略及其机制研究进展

概述了CDK4/6抑制剂耐药乳腺癌的治疗策略,分析了CDK4/6抑制剂跨线治疗、新型口服SERDs药物、PI3K/AKT/mTOR抑制剂、ADC类药物、AURKA抑制剂、HDAC抑制剂、免疫治疗和抗衰老药物在CDK4/6抑制剂进展后的临床研究结果及其相关机制。展望未来,可开展更多临床研究的潜在靶点。     

重金属对大肠杆菌的毒性研究

本文用琼脂扩散法研究了重金属对Ｅ．ｃｏｌｉ的毒性影响,并将重金属浓度与抑菌圈直径进行相关回归分析,结果表明,重金属对Ｅ．ｃｏｌｉ的毒性顺序为Ｈｇ~(２＋)＞Ｃｄ~(２＋)＞ｐｂ~(２＋)＞Ｃｕ~(２＋＞＞Ｚｎ~(２＋),重金属浓度与抑菌圈的直径呈显著的正相关,各种金属受试物都有剂量－反应关系．     

基因工程菌发酵生产l-苯丙氨酸工艺优化

对重组l－苯丙氨酸工程菌E.coli HB101.Ⅰ发酵过程中的营养物质消耗及产物l－苯丙氨酸的积累进行实验分析。得出：l－苯丙氨酸在培养温度为38.5℃，pH为7.0－7.5，溶氧控制在20％，含糖量控制在1.5%，酪氨酸添加量为1.0-1.2g/L时，产酸量最大，为工艺优化控制提供了有用的基础数据。     

鸡沙门氏菌与大肠杆菌混合感染症的病原分离鉴定

对某鸡场送检的60日龄患呼吸道病的病鸡进行病理剖检及细菌分离鉴定。采用微生物学方法鉴定出沙门氏菌和大肠杆菌,确定该病是由两种细菌感染引起的。药敏试验指导用药,投以呋喃妥因、氧氟沙星治愈。药物治疗效果与药敏试验结果一致。     

大肠杆菌SD序列与基因表达水平的关系

依据基因表达水平的理论预测方法从１３７３个大肠杆菌基因中选出了７３个甚高表达基因和１００个甚低表达基因,研究了这两类基因编码区起始密码子ＡＴＧ前－１到－２１位点（包含ＳＤ序列）的碱基构成与基因表达水平的关系。结果表明,ＳＤ序列中的富嘌呤区（约在－７到－１２位点）Ｇ和Ｔ的概率分布曲线中心到ＡＴＧ的距离（记为ＬＨ）与基因表达水平有明显的关系。甚高表达基因ＬＨ约为１０,甚低表达基因的ＬＨ约为８,另外在－     

重组人碱性成纤维细胞生长因子类似物在大肠杆菌中的分泌表达研究

用带有大肠杆菌外膜蛋白信号肽序列的重组分泌型表达载体pSE-hbFGF，在大肠杆菌BL21中分泌表达了rhbFGF类似物。SDS－PAGE、免疫印迹结果表明，表达产物分泌到了细胞周质和培养液中，用间接ELISA测定出培养上清中的rhbFGF类似物为24.5mg/L，周质中为36.5mg/L菌液（O.D600nm=10)。同时探讨了发酵培养中影响rhbFGF表达的几个关键因素，如诱导时期的选择、诱导时间的长短、培养基的选择及诱导剂的浓度等。     

杜氏藻与大肠杆菌融合初探

杜氏藻(Dunaliella peircei Nicolai)系真核单胞绿藻,无纤维素细胞壁,细胞膜外由糖蛋白类物质组成柔软的包被,E.coli(Cm~r)内含带Cm~r基因的质粒。以对氯霉素(Cm)抗性的变化作为杜氏藻和大肠杆菌融合的选择标记,因而首先测定了它们在各自琼脂培养基上对Cm(原始浓度125g/1)的抗性水平(Tab.1)。     

人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析

OPG成熟肽N端D1～D4结构域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA作为模板,PCR分别扩增骨保护素基因外显子2和外显子3,再以2种PCR产物的混合物作为模板,采用重组PCR法得到N端D1～D4域编码序列,使该序列与载体pET42a部分序列相连,然后克隆人载体pET42a进行表达,SDS-PAGE表明产物主要以包涵体形式存在,可被抗OPG多克隆抗体识别.Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化融合蛋白GST-hOPG(D1-4),Xa切割祛除担体蛋白及进一步分离纯化.采用破骨细胞样细胞诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性,证实该重组蛋白可以抑制OLC的生成.     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子菌种稳定性研究

 为了解含重组质粒的大肠杆菌菌种连续传代及发酵罐培养中质粒的遗传稳定性,将GM-CSF菌种在含氨苄青霉素的琼脂平皿上连续划线传代培养,以及在不含安苄青霉素的培养基中进行发酵罐培养和42℃诱导表达.结果显示pBV220GM-CSF工程菌在氨苄青霉素选择压力下连续传代10,25,50和100次后质粒稳定、不丢失,而在不含氨苄青霉素的培养基中进行发酵罐大规模培养42℃诱导表达时,质粒稳定性下降,质粒易丢失,其表达量随诱导时间而变化.     

灭活大肠杆菌吸附铅离子的实验研究

研究了反应条件对灭活大肠杆菌吸附铅离子的影响，实验结果表明，在起始浓度ρ(Pb^2 )为10～100mg／L范围内，吸附量为1．832～21．248mg／g(干生物体)，反应在10分钟内达到吸附平衡，最佳反应温度和pH值分别为30℃和6，离子浓度与吸附量之间的关系符合Freundlich等温吸附方程，K值为2．3281，n值为1．7668。     

纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

纳豆激酶是一种良好的天然蛋白酶类溶栓物质。国内外许多学者对该酶进行了基因工程研究,但在克隆表达过程中出现了许多长短不同的基因片段。本研究通过原产日本的优质纳豆中分离鉴定出高产纳豆杆菌N07并提取该菌株的全基因组;通过PCR手段扩增出能编码纳豆激酶信号肽,前导肽和成熟肽的前纳豆激酶酶原基因NK1,以及能编码纳豆激酶成熟肽的纳豆激酶基因NK2,构建了纳豆激酶基因的表达载体pET30a-NK1和pET30a-NK2,转化E.coli BL21后在大肠杆菌中表达,并进行了活性分析。结果发现,纳豆激酶酶原基因片段NK1能成功表达出有活性的分泌型纳豆激酶;而纳豆激酶基因片段NK2的表达产物为无活性的包涵体。在对NK1和NK2的比较研究后可知,纳豆激酶酶原基因片段NK1能在大肠杆菌中很好的分泌表达,这将为纳豆激酶基因工程的深入研究奠定基础。