幽门螺杆菌感染引起非消化系统疾病的研究进展

幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性微需氧型细菌, 可引起消化性溃疡、膜相关淋巴组织淋巴瘤和萎缩性胃炎, 是胃癌的主要诱因. 但近年来, 流行病学调查和动物实验数据提示, 该菌感染与一些非消化系统疾病, 如缺铁性贫血、特发性血小板减少性紫癜、菌血症、肺炎以及类风湿性关节炎等的发生密切相关. 本文就幽门螺杆菌感染引发非消化系统疾病的新进展进行系统剖析, 以期全面展现幽门螺杆菌感染的新领域.     

用PCR法检测小鼠胃粘膜中的幽门螺杆菌

选取合适引物,用多聚酶链式方法扩增小鼠胃粘膜DNA,经琼脂糖凝胶电泳分析,感染了幽门螺杆菌的小鼠的胃粘膜DNA扩增产物显示有一条298bp的区带。     

幽门螺杆菌临床菌株主要蛋白抗原表达及其诱导宿主产生抗体差异性的研究

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为选择幽门螺杆菌基因工程疫苗抗原提供依据．实验结果显示,rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB表达量分别约为细菌总蛋白的35％、32％、15％、230．4、56％、25％和20％．各重组抗原均能与商品化幽门螺杆菌抗血清（DAKO）产生阳性WesternBolt结果,免疫家兔能产生特异性抗体．从332例慢性胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜活检标本中,分离获得145株幽门螺杆菌,其阳性率为43．8％．所有幽门螺杆菌临床菌株均表达UreB、HpaA、FlaA和FlaB,52．4％、91．7％和93．1％菌株分别表达VacA、CagA和NapA．145例幽门螺杆菌感染的病人血清中,UreB、HpaA、VaeA、CagA、NapA、FlaA和FIaB的IgO抗体阳性率分别为100％、86．9％、42．8％、70．3％、89．7％、84．8％和79．3％．此外,不同胃疾病标本中幽门螺杆菌分离率均无显著性（P〉0．05）,但菌株VaeA和NapA表达率与疾病严重程度相关（P〈0．05）．综合分析实验结果,ureB是研制幽门螺杆菌基因工程疫苗首选抗原,其次是NapA和HpaA;各病种与幽门螺杆菌感染率无关,但与菌株毒力有关．     

幽门螺杆菌生物被膜形成及其影响因素研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是人类慢性感染最常见的病原菌之一,会引发多种消化系统和非消化系统疾病.研究表明:H.pylori能在多种表面形成生物被膜,包括宿主胃黏膜表面、腺体及非生物表面等,其耐药性、感染复发与生物被膜作用相关.本文介绍了H.pylori生物被膜形成及其结构特点,并对其影响因素进...     

LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增ltB和hpaA基因,构建ltB-hpaA融合基因及其原核表达系统,鉴定其表达产物的免疫原性、佐剂活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用.采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和ltB基因片段,构建ltB-hpaA融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.采用质粒pQE32和宿主菌E.coli M15构建ltB-hpaA融合基因表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达.采用western blot和GM1-ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐剂活性.建立HpSS1株感染BALB/c小鼠模型,检测rLTB-HpaA的免疫保护效果.采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况.与GenBank登录的相关序列比较,所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94.25%～99.71%和95.38%～99.19%.所构建的表达系统pQE32-ltB-hpaA-M15的目的重组蛋白(rLTB-HpaA)表达量高达细菌总蛋白的1/3左右.rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能产生特异性抗体.GM1-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合.rH-paA免疫小鼠的保护率仅为66.7%,rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83.3%.81.6%患者血清(102/125)HpaA抗体检测结果阳性,所有菌株均含有HpaA.本文成功地构建了itB-hpaA融合基因高效原核表达系统,所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性,并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用.     

长爪沙鼠寄生虫感染和疾病动物模型的建立

建立长爪沙鼠抗寄生虫病和其他疾病的动物模型一直是关于寄生虫病研究的焦点,文章对近年来国内外长爪沙鼠寄生虫感染和疾病模型的建立进行概述.     

长爪沙鼠日本血吸虫病动物模型的建立

探讨了用长爪沙鼠建立日本血吸虫病动物模型.实验方法为采用腹部贴片法感染血吸虫尾蚴,每只沙鼠感染（120±2）条尾蚴,于5周后解剖,做病理观察.结果表明：肝脏表面出现粟白色虫卵结节,肝脏和肠壁HE染色后观察到虫卵肉芽肿产生.因此认为采用长爪沙鼠可成功建立日本血吸虫病感染模型,为实验研究血吸虫防治奠定基础.     

抗幽门螺杆菌尿素酶B纳米抗体的制备及鉴定

制备抗幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）尿素酶B（UreB）纳米抗体。用灭活的全幽门螺杆菌免疫羊驼,以重组蛋白UreB为靶分子,从噬菌体展示文库中筛选出能与重组蛋白UreB特异性结合的纳米抗体,构建原核表达载体,IPTG诱导表达,ELISA鉴定纳米抗体特异性。获得5×107cfu的噬菌体文库,将筛选的两个OD450值较高且序列不同的纳米抗体HU2-9和HU2-36分别进行表达SDS-PAGE鉴定均为可溶性且表达量分别为92和32 mg·L-1。ELISA结果表明两个纳米抗体能特异性结合Hp菌体蛋白,并对尿素酶活性具有一定的抑制作用。成功淘选出6种独特序列的抗幽门螺杆菌UreB纳米抗体。     

丽珠胃三联根除幽门螺旋杆菌的临床观察

目的：观察丽珠胃三联对十二指肠溃疡患者幽螺杆菌的治疗作用。方法：将183例幽门螺杆菌阳性的初治活动性十二指肠溃疡患者随机分为3组,把丽珠胃三联与质子泵抑制剂＋2种抗菌药物所组成的2组三联疗法对照,疗程结束后停药4周复查胃镜观察溃疡愈合情况并进行Hp的检测,观察治疗过程中出现的不良反应和治疗费用。结果：丽珠胃三联组对幽门螺杆菌的根除率为90．5％,与对照组相仿,结论：丽珠胃三联一个Hp的根除方案,具有疗效佳,安全方便,价格低廉等特点,值得临床推广。     

螺旋藻肽对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠作用研究

为了评价螺旋藻肽的降血糖活性及对糖尿病小鼠的降糖效果, 采用腹腔注射四氧嘧啶构建2型糖尿病小鼠模型. 实验设对照组、模型组、二甲双胍阳性对照组以及低、中、高3种浓度螺旋藻肽组, 连续喂养糖尿病小鼠21d后检测体重、食物和水消耗量、葡萄糖耐量、血糖和脂代谢相关指标、血清尿素氮、肌酸酐, 观察分析糖尿病小鼠胰腺组织. 结果表明 与模型组相比 螺旋藻肽组有降小鼠血糖和体重作用, 可减少小鼠食物和水的消耗量, 显著改善小鼠葡萄糖耐量; 高剂量的螺旋藻肽组比模型组显著减少了小鼠血清中的总胆固醇、糖基化血清蛋白, 增加了血清胰岛素和肝脏肝糖原含量, 小鼠的胰腺组织明显好转. 研究表明螺旋藻肽具有降血糖活性, 其抗糖尿病作用可能与改善胰岛素分泌功能和调节糖脂代谢有关.     

幽门螺杆菌的左氧氟沙星耐药性及其基因分析

分析了宁波地区幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）对左氧氟沙星的耐药情况,探讨了Hp对左氧氟沙星的耐药机制.取患者胃黏膜组织分离培养Hp,检测Hp对左氧氟沙星的耐药率;提取左氧氟沙星耐药Hp DNA,PCR扩增并测序比较.结果表明：宁波地区Hp对左氧氟沙星的耐药率为22.5%,左氧氟沙星耐药Hp菌株gyrA基因91位密码子发生点突变.提示宁波地区Hp对左氧氟沙星已产生一定的耐药性;左氧氟沙星耐药Hp gyrA基因突变可能是本地区左氧氟沙星耐药的重要原因之一.     

ltB-ureB融合基因原核表达系统的构建及其产物免疫性和佐剂活性的鉴定

构建ltB-ureB融合基因原核表达系统并对其表达产物的免疫性和佐剂活性进行鉴定.采用PCR和T-A克隆法从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中获得了ureB和ltB全长基因扩增片段及其克隆,并构建了ltB-ureB融合基因及其原核表达系统pET32a-ltB-ureB-E.coli BL21DE3.在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,并用Hp全菌抗体的Western blot、ELISA以及GM1ELISA分别证实了目的重组蛋白(rLTB-UreB)的免疫性和佐剂活性.与报道的相关序列比较,所克隆的ureB和ltB核苷酸序列同源性分别为96.88%～97.82%和99.12%～99.71%,氨基酸序列同源性为99.65%～99.82%和97.58%～99.19%.0.1～1.0 mmol/L的IPTG均能有效地诱导目的重组蛋白rLTB-UreB的表达,该蛋白主要以包涵体形式存在,其产量约为细菌总蛋白的35%.Western blot结果证实rLTB-UreB不仅能与商品化的Hp全菌抗体结合,免疫家兔后也能产生特异性抗体,表明rLTB-UreB有良好的免疫反应性及抗原性.GM1-ELISA结果显示rLTB-UreB能与牛GM1结合,表明rLTB-UreB有佐剂活性.以兔抗rLTB-UreB为一抗,发现所检测的109株Hp临床分离菌株均表达UreB;以rLTB-UreB为包被抗原,发现所检测的125例Hp感染者血清中均存在UreB抗体;表明UreB广泛存在于不同的Hp菌株中,并有很强的抗原性,也提示rLTB-UreB确有自然表达UreB的抗原特异性.本文成功地构建了LTB-UreB融合基因原核高效表达系统,所表达的LTB-UreB融合蛋白有良好的免疫性和佐剂活性,为Hp基因工程疫苗的产业化奠定了坚实的基础.     

利用柴油车车载排放测试对IVE模型的修正及模型应用

IVE模型是国内外应用较为广泛的机动车排放模型之一,为了使该模型在计算机动车排放时更为符合当地实际情况,本文首先将13辆我国道路上典型柴油车的车载排放测试数据与IVE模型基本排放因子进行了对比研究,获得了模型基本排放因子的修正系数,然后将修正后的IVE模型应用于宁波市机动车污染物排放因子的计算,获得宁波市各类型车辆的排放因子.结果表明,模型基本排放因子与排放测试结果相接近的污染物顺序依次为CO、NOX、HC;宁波市机动车CO的启动排放因子远远高于其他污染物,相当于HC和NOX启动排放因子的20倍左右;宁波市机动车运行排放因子中,公交车污染物排放因子最大,其次是重型货车和乘用车,最后是轻型货车.     

并行Pareto多目标演化算法

提出并实现了一个并行Pareto多目标演化算法(PPMEA)，PPMEA算法是一个通过演化算法来解决基于Pareto的多目标优化问题的并行计算模型。在这个算法中，采用了并行演化算法中常用的全局并行模型和粗粒度并行岛模型。构成每个岛的子群体以不同的杂交概率和变异概率各自独立的演化，但是每隔一定的代数它们要交换外部集中的个体。标准测试函数的数值实验结果表明，所提出的算法能够使找到的解集快速收敛到Pareto非劣最优目标域，并且解集沿着Pareto非劣最优目标域有很好的扩展性。     

随机参数拉索预应力空间铰接钢结构随机内力摄动分析

同时考虑拉索刚度、钢索预拉力、边界弹性约束刚度及外荷载的随机性，得到了随机参数拉索预应力空间铰接钢结构随机内力摄动分析的一般公式及其统计特性的计算表达式。文中所建立的计算模型为进一步进行拉索式预应力空间铰接钢结构的可靠性分析奠定了一定的理论基础。最后对工程中常见的空间立体钢桁架结构进行了计算。