小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

小菜蛾颗粒体病毒的研究——病毒的分离、鉴定和田间试验

小菜蛾 Plutella xylostella L.是世界性的蔬菜害虫之一。主要危害甘兰、大白菜、小白菜、油菜等十字花科蔬菜作物达三十九种。七十年代以来,由于小菜蛾抗药性增强,漫延全国各地,尤以长江流域各省危害最为严重。在武汉自然条件下终年繁殖十三代,世代重叠,连续危害,对蔬菜生产造成相当严重的损失。如武昌洪山公社井岗山大队1976年     

病毒颗粒的存在与其对水稻纹枯病菌的影响

存在有14.0 kb dsRNA的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1 IA)Rs17菌株与存在有2.0 kb dsR-NA的Rs1M-3菌株经由菌丝融合试验结果发现,Rs1M-3菌株中2.0 kb dsRNA片段可经由菌丝融合而转移,融合试验中获得的6个融合成功的菌株与2个未融合成功的菌株在生长速度上并没有差异,但是6个带有2.0 kbdsRNA融合菌株在色素产生与菌核数目比未带有2.0 kb菌株少,初步认为2.0 kb dsRNA片段对色素产生、菌核数目多寡有影响.在Rs1M-3菌株中可以分离到球形、直径大小约20～25 nm的类似病毒颗粒(virus-like particle,VLP)其分子量大小约为60-70 kDa左右,此外经由Rs1M-3中类似病毒颗粒直接抽取病毒核酸进行电泳分析,发现其类似病毒颗粒的核酸为dsRNA,且两条分子量相近约2.0 kb dsRNA片段大小与直接由Rs1M-3菌丝中所抽取到的dsRNA是一致的.从本实验初步研究证实dsRNA可经由菌丝融合传播,2.0 kbdsRNA可能影响菌株菌核的形成且有病毒颗粒存在,对于dsRNA在水稻纹枯病菌上的作用与关系及其属于何属病毒有待未来更进一步的研究.     

蓖麻蚕核型多角体病毒包涵体蛋白的提纯及SDS—PAGE分析

对蓖麻蚕核型多角体病毒（Philosamia cynthia ricini Nuclear Polyhedrosis Viruses）的多角体蛋白polyhedrin的碱解性质以及分子量等进行了分析。结果发现：多角体加热灭活和碱解后,经等电点沉淀的polhedrin通过凝胶电泳仍存在较多的小分了量蛋白带,表明通常的70℃加热不能完全灭活碱性蛋白酶;在电泳图谱的主带polyhedrin-侧尚有一伴随的卫星带,可能提示包涵体的外膜蛋白。Sephadex-G200柱层析纯化的polyhedrin经SDS-PAGE分析,多角体蛋白有4条带,其中主带分子量约为30kd,另有一带处于61KD位置,推测为polyhedrin的二聚体,说明polyhedrin多聚体在杆状病毒包涵体中的普遍性。     

文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)多角体蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

通过对文山松毛虫质型多角体病毒的增殖 ,纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒 提纯的病毒粒子经SDS 酚抽提 ,琼脂糖凝胶电泳分离基因组dsRNA ,低熔点琼脂糖电泳法回收纯化编码多角体蛋白的第十片段S10 S10经DMSO变性 ,逆转录合成cDNA第一条链 ,PCR扩增后 ,克隆在PMD18 T载体上 ,克隆片段全长 76 3bp 起始密码AUG位于第 3～ 5位碱基 ,终止密码UGA位于第 74 7～ 74 9位碱基 推测DpwCPV多角体蛋白基因编码一段由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,分子质量为 2 84 39.4 4× 10 3 与舞毒蛾质型多角体病毒 (LdCPV)多角体蛋白基因比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 97% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 99% ;与家蚕质型多角体病毒(BmCPV)多角体蛋白基因相比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 88% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 97%     

油桐尺蠖感染核型多角体病毒后血淋巴酯酶的变化

用核型多角体病毒（nuclear polybedrosis virus）感染油桐尺蠖（Buzura suppressaria）四龄初幼虫，以染病后12，24，48，72h分别对幼虫血淋巴进行酯酶同工酶（EST）电泳分析（Native-PAGE),并用薄层扫描仪检测酶带的相对含量，染病幼虫血淋巴的一部分EST含量低于同期对照组，而另一部分却高于对照组；就谱带而言，某些样品酶带在感染后出现迁移率的变化，而有些则出现新的酶带，这二种变化均表现在某一特定的酶带上，提示该酶带在病毒感染的血淋巴病理生化方面可能具有特殊意义。     

粘虫核型多角体病毒p35基因抑制细胞凋亡的功能研究

利用去血清方法建立Ls细胞凋亡的实验体系,证明LsNPV p35基因在Ls细胞中瞬时表达可以抑制Ls细胞由于无血清造成的凋亡,构建了在哺乳动物中高效表达LsNPV p35基因的载体pRc/RSV-L p35,并导入Vero细胞瞬时表达,发现LsNPV p35基因产物也可以抑制Vero细胞由于病毒感造成的凋亡,用含LsNPVp35的质粒与vAcAnb(AcNPV p35基因缺失病毒）DNA共转浸Sf-9细胞,可以使vAcAnhDNA在St-9细胞中形成多角体,并且传代后多角体不扩增,表明LsNPV p35基因与AcNPVp35基因具有功能互补性。     

复制缺陷型人泡沫病毒载体辅助质粒P△GP的构建及转染小肠癌细胞的研究

在人泡沫病毒原病毒全长克隆pHRSVl3的基础上，缺失突变gag和pol基因，并且用SV40polyA加尾信号替代人泡沫病毒的3′LTR，构建辅助质粒p△GP．将复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI-EGFP和辅助质粒pAGP分别转染和共转染小肠癌HIC细胞系，荧光显微镜检测发现共转染pGPSNI-EGFP和p△GP的HIC细胞能够强烈表达绿色荧光蛋白，转染有复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI-EGFP的HIC细胞能够表达少量的绿色荧光蛋白，而转染有辅助载体p△GP的HIC细胞不表达绿色荧光。结果证明复制缺陷型人泡沫病毒载体的构建成功，表明人泡沫病毒env基因3′端的内部启动子IP具有弱启动子的活性，并且bel基因产生的调控蛋白能够反式激活人泡沫病毒内部启动子IP和5′LTR的启动子。     

转录因子Skn-1a激活人乳头瘤病毒18 E6基因表达的分析

用脂质体介导真核表达质粒pcDNA3-skn-1a转染Hela细胞,实时定量PCR检测HPV18 E6基因的表达量,以探讨转录因子Skn-1a对HPV18 E6基因表达的调控.结果显示Skn-1a能够显著激活HPV18 E6基因表达,为高发宫颈癌E6基因调控的分子机理探讨提供理论依据.     

黄原胶与魔芋胶协同相互作用及其凝胶化的研究

黄原胶和魔芋胶都是非凝胶多糖，但将二者按一定比例混合可以出现协同相互作用，得到凝胶．当黄原胶与魔芋胶的比例为７０／３０（ｍ／ｍ），总糖浓度为１．０％时协同效应达到最大值．混合多糖胶凝化能力不仅与混合比例有关，还与黄原胶的转变温度和体系盐离子浓度有关．     

卡拉胶与槐豆胶协同相互作用及其凝胶化

讨论了卡拉胶与槐豆胶（ＬＢＧ）形成凝胶的共混比例、最佳膨化温度和膨化熟成时间，以及制备温度和体系盐离子浓度对凝胶化的影响．     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）ｇｐ５０基因的一段较为保守区（２１６ｂｐ）．检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究，结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异性和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法