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参数Z对疏水色谱中胍变蛋白质分子构象变化的表征 总被引:1,自引:0,他引:1
用计量置换参数Z对疏水色谱流动相中存在盐酸胍时蛋白质分子构象变化进行了表征。除溶菌酶外,其余4种蛋白质的Z值随盐酸胍浓度的增大先增大,而后减小。将盐酸胍和脲对蛋白质Z值的影响进行了比较后发现,在疏水色谱中Z值作为蛋白质分子构象变化表征的一个重要的结论是随变性剂浓度的增大,埋藏在蛋白质分子内部的疏水性氨基酸残基暴露到分子表面的程度逐渐增大,造成了Z值随蛋白质分子构象变化程度的增大而减小。蛋白质的Z值随盐酸胍及脲浓度变化的不同特点,反映了两者对蛋白质变性机理的不同。 相似文献
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参数Z对疏水色谱中胍变蛋白质分子构象亦化的表征 总被引:1,自引:0,他引:1
用计量置换参数Z对疏水色谱流动相中存在盐酸胍时蛋白质分子构象变化进行了表征。除溶菌酶外,其余4种蛋白质的Z值随盐酸胍浓度的增大先增大,而后减小。蛋白质的Z值随盐酸及脲浓度的增大,埋藏在蛋白质分子内 相似文献
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新型高效疏水相互作用色谱填料的合成及性能的研究 总被引:4,自引:1,他引:3
]本文介绍了在硅胶基质上键合聚乙二醇、聚丙二醇、聚四氢呋喃和改性聚乙二醇等多类疏水色谱填料的合成及其分离蛋白质的色谱特性。其中改性聚乙二醇、聚1,2-丙二醇、聚四氢呋喃型配基的疏水填料为首次合成。文中探讨了硅胶孔径、聚乙二醇链长、改性聚乙二醇配基的端基和不同的聚醚链对蛋白质的保留值、活性回收率、分离度、填料稳定性和键合密度的影响,发现了在聚醚链单元上引入支链改变生物大分子与填料疏水区的接触面积可以改变蛋白质的保留时间和选择性。此外,还介绍了在硅胶上包裹有机胺类化合物再与环氧交联的疏水色谱填料的制备。 相似文献
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盐酸胍对疏水色谱中蛋白质保留行为的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
研究了变性剂酸胍对几种蛋白质在高效疏水色谱中保留行为的影响,用液相色谱中溶质的计量置换保留模型和测流动相表面张力及蛋白质紫外吸收光谱方法研究的结果表明:在低浓度范围内,盐酸胍主要以疏水作用影响蛋白质的保留;而在高浓度区域内,盐酸胍的存在则显著影响蛋白质分子的构象,使其保留行为发生变化。 相似文献
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Z及logI对离子交换色谱中脲变溶菌酶分子构象变化的表征 总被引:3,自引:0,他引:3
以溶菌酶(Lys)为目标蛋白,用计量置换保留理论(SDT-R)中的参数Z和logI对弱阳离子交换色谱(WCX)中“准天然态”和脲变还原与非还原的两种变性状态的Lys的分子构象变化进行了表征。发现在流动相中含有脲时,蛋白的保留仍服从SDT理论,可以准确测定在特定脲浓度条件下Lys的Z及logI值。结果表明,3种分子构象状态的Lys的Z值均随脲浓度改变呈现不连续变化;“准天然态”Lys在同一脲浓度条件下的Z值比变性状态的大,logI比变性状态的小,而非还原变性态和“准天然态”Lys的Z和logI值比较接近。还 相似文献
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疏水相互作用色谱中Z值的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
对在疏水相互作用色谱中报道的3种测定蛋白质Z值的方法进行了讨论和比较,从线性参数,各种Z值的物理意义,Z值的准确性等结果看,计量置换保模型中的计量参数Z是一个在HIC中好的和通用的描述蛋白保留特征的表征参数。 相似文献
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将蛋白质与疏水作用色谱(HIC)固定相相互作用分为直接非键/构象作用和蛋白质表面疏水效应两个热力学过程, 从而定量给出了处于浓盐析盐水溶液中HIC保留时间与配基/蛋白质结合自由能之间的二元线性关系. 通过ICM柔性分子对接策略及遗传算法(GA)对27个已知晶体结构的蛋白质与疏水配基的可能结合方式进行模拟和分析, 所得结果与实验观测情况吻合良好. 研究表明, 蛋白质局部疏水效应以及配基与蛋白质的非键/构象作用皆对HIC色谱保留行为影响显著, 且作用区域多集中于蛋白质表面突出部位. 相似文献
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反相液相色谱中温度对蛋白分子构象变化的新表征 总被引:7,自引:0,他引:7
液相色谱中溶质计量置换保留模型的Z值可用来对反相高效液相色谱中热变蛋白的分子构象进行表片。发现在异丙醇-甲酸44%(V/V)-水体系为流动相对完全变性蛋白的Z值随温度升高而降低。且Z值与绝对温度例数(1/T)成正比,因此蛋白分子构象变化可用Z对1/T作图所得两条直线的斜率差值来表征,差值愈大,蛋白分子构象变化愈甚。该两直线的交点即为蛋白分子构象的突变温度。与通常采用的1gK'对1/T的作图相比,用 相似文献
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疏水色谱法的进展及其在生化研究中的应用 总被引:10,自引:0,他引:10
着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展,并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用,包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍,全文包括62篇文献和一张表格。 相似文献
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选取了四种常用的弱阳离子交换(WCX)商品柱以研究标准蛋白在其上的色谱保留行为。发现在疏水色谱(HIC)模式下,蛋白在这四种WCX商品柱上也有不同程度的保留特征,且洗脱曲线呈现出保留值随盐浓度变化的"U"型。从分子力学角度定性解释了因疏水相互作用力的存在影响了蛋白在WCX色谱柱上洗脱顺序的改变。运用计量置换理论(SDT)中的两组线性方程进一步证实了WCX和HIC中蛋白与固定相间相互作用力的性质,在HIC中为非选择性作用力,而在离子交换色谱(IEC)中为选择性作用力。这四种色谱柱中的两种事实上可在WCX和HIC两种模式下,对标准蛋白进行分离且有较好的分离效果,有可能作为二维色谱柱来使用。 相似文献
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Yan YAN Rui Xian LIU Yin Mao WEI Ye Hua SHEN Xin Du GENG Institute of Modern Separation Science Northwest University Xi’an Contemporary Educational Technology Center Northwest University Xi’an 《中国化学快报》2006,17(1):105-108
Hydrophobic interaction chromatography (HIC) is widely used for the separation and purification of biopolymers in their native state, and now also becomes a new method to refold the denatured proteins1. The effect of salt or water concentration2 on the pr… 相似文献
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高效疏水作用色谱填料的合成及其在重组人干扰素纯化中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
高效疏水作用色谱(HPHIC)是利用不同蛋白质表面疏水区域与填料之间具有不同疏水作用进行分离的.由于HPHIC采用盐水体系作为流动相,配体采用极性的有机基团,使蛋白质可以在十分温和的条件下进行分离,且保持其生物活性基本不变[1,2].自80年代中期以来,HPHIC在蛋白质的分离纯化上得到了广泛的应用.在90年代初期,随着基因工程技术的发展,HPHIC同时也被应用到基因工程的下游纯化技术上[3,4].本文中我们合成了一OCH2CH3为端基的填料,检验了该填料的分离效果,并利用该填料对酵母菌表达的人αA-干扰素、大肠杆菌(E.col… 相似文献