利用非手性-手性色谱-预测多反应监测法分析中药前胡化学成分

前胡等中药不仅化学成分组成复杂,而且常含有大量对映异构体,且对映异构体之间的含量常存在差异。本研究以中药前胡为例,建立了非手性-手性色谱-预测多反应监测法(Achiral-chiral LC-predictive MRM),实现了化学成分的化学选择性和立体选择性分析。非手性-手性色谱直接耦联系统结合了RP-C₁₈色谱柱的高效分离能力以及手性色谱柱的立体选择性分离优势,有效避免了中心切割非手性-手性二维液相构造复杂、精密度差等缺陷。采用小内径核壳型RP-C₁₈色谱柱作为前端化学分离柱,实现了结构类似香豆素的高效化学选择性分离;通过在手性柱前引入稀释泵,优化适用于手性选择性分离的洗脱程序;采用反相大内径AD-RH手性色谱柱,实现了对映异构体的手性拆分。采用预测多反应监测模式实现化学成分的高灵敏度检出,并利用增强子离子扫描模式采集各色谱峰的二级质谱,进行结构确证。从前胡中鉴定出61种化学成分,其中包括11对对映异构体。Achiral-chiral LC-predictive MRM为含有对映异构体的中药及其它复杂样品的深入定性和定量分析提供了可靠的...     

非衍生纤维素高效液相色谱手性固定相的研究

手性是自然界的一种普遍现象,构成生物体的基本物质如氨基酸、糖类、核酸等全都是手性分子.在生物的手性环境中,手性分子手性的不同往往表现出不同的生理、药理、毒理作用[1,2].因此,对手性化合物的拆分是非常重要的.目前,高效液相色谱(HPLC)手性分离分析方法是完成这项任务的重要手段,其中手性固定相法是最常用的方法[3].     

有机磷化合物高效液相色谱保留和手性识别机理的研究

在正相条件下,对一系列手性磷有机化合物进行了高效液相色谱拆分,探索运用定量结构-对映异构体选择性保留关系的方法,将对映异构体的色谱保留和溶质分子描述参数相关性联系建立定量方程,研究了色谱保留和手性识别机理,结果表明:在Sumichiral OA4700手性固定相上,对硫代磷酰胺酯类化合物色谱保留贡献最大的是其LUMO参数,即相应的氢键和(或)π-π相互作用;手性识别与logP和LUMO相应的作用力相关.     

β-氨基酸对映体在涂敷型手性配体交换色谱固定相上的分离

分别将N-十六烷基-L-羟脯氨酸(C16-L-Hyp)、N-十六烷基-L-脯氨酸(C16-L-Pro)、N-十六烷基-L-丙氨酸(C16-L-A la)涂敷到反相键合硅胶表面,制成涂敷型手性配体交换色谱固定相,应用于5种β-氨基酸的手性分离。考察了固定相中的手性配体的类型和涂敷量、流动相中金属离子浓度、pH及甲醇含量等因素对手性分离的影响。结果表明:在以涂敷0.25μmol/m2C16-L-Hyp的C18硅胶为固定相,以5 mmol/L CuSO4水溶液的(pH 4.6)为流动相的色谱条件下,5种β-氨基酸对映体的分离效果最好,分离因子高达2.46。     

联萘类对映体的手性薄层色谱拆分

以β－环糊精／硅胶键合相作薄层色谱的手性固定相,石油醚／乙酸乙酯／甲醇和石油醚／乙酸乙酯／乙腈溶剂系统为流动相,分离联萘类化合物对映体,在紫外光下或碘蒸汽中观察样品斑眯的位置。１２对联萘类化合物得到良好的分离,相对比移植为１．１６－１．６５。     

反相-亲水作用色谱-定制多反应监测法同步测定肉苁蓉多成分含量

建立了反相色谱-亲水作用色谱-定制多反应监测(RPLC-HILIC-tailored MRM)方法,对肉苁蓉中极性跨度大、含量差异大的27个化学成分的含量进行同步测定。利用RPLC与HILIC的在线直接偶联实现大、中、小极性化学成分的同步色谱保留和分离。Acquity UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)用于RPLC,Xbridge Amide色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3.5μm)用于HILIC,色谱柱间通过混合器引入稀释泵来解决色谱机制不一致的问题。泵A(0.1%甲酸-水)和泵B(乙腈)输送流动相至RPLC柱进行梯度洗脱,流速为0.15 mL/min;泵C(0.1%甲酸-水)和泵D(乙腈)以1.0 mL/min的流速输送流动相至混合器,改变RPLC柱洗脱液的组成,促进极性大的化学成分在HILIC柱中的保留。通过灵活调节在线碰撞能,提高微量成分的质谱响应,抑制常量成分的质谱响应,形成定制多反应监测模式。最终同步测定36批肉苁蓉中27个化学成分,包括氨基酸类、有机酸类、糖类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类等类型。方法检出限为0.0032～1...     

手性高效液相色谱拆分3-取代异吲哚-1-酮的研究

从伏牛花类植物中提取的生物碱Lennoxam ine^[1]、Nuevam ine和Chilenine,新研发的抗焦虑药Paz-inaclone^[2]和Pagoclone^[3]以及利尿、抗高血压药Chlortalidone^[4]等均含有光活性3-取代异吲哚-1-酮(2,3-二氢-1H -异吲哚-1-酮).这类化合物还是一类新型的不对称合成手性辅助基^[5].因此,光学纯的3-取代异吲哚-1-酮化合物在药物研发和不对称合成等领域具有应用前景.但有关它们的色谱拆分少见报道^[6,7].本文对15个外消旋3-取代异吲哚-1-酮样品进行高效液相色谱拆分研究,通过建立的手性色谱方法,不仅准确测定了相关产物的光学纯度,而且确认了N -取代邻苯二甲酰亚胺上手性辅助基在不对称合成过程^[8]中未发生消旋化.同时探讨了样品中3-位取代基对手性拆分的影响.     

色谱分离条件对己唑醇对映体手性拆分的影响

在自制的直链淀粉-三(苯基氨基甲酸酯)手性固定相上,成功地拆分了己唑醇对映异构体,系统研究了色谱分离条件对手性拆分的影响．结果发现,流动相中醇的结构及浓度对己唑醇对映异构体的手性拆分均有影响．在所研究温度范围15～40℃内,己唑醇对映体的In α与1／T关系呈非线性关系,分离温度在15～30℃内,其手性拆分过程受熵控制;分离温度在30～40℃内,其手性拆分过程受焓控制．     

氟比洛芬对映异构体的手性衍生化反相高效液相色谱拆分及质谱鉴定

以二氯亚砜和R-（＋）-1．（1-萘基）乙胺为手性衍生化试剂,建立了一种柱前衍生化反相高效液相色谱法分析氟比洛芬对映异构体的方法。选用C18柱,以乙腈-50mmol／L磷酸二氢钾溶液（体积比75：25）为流动相,在254nm检测,非对映异构体色谱峰的保留时间分别为5．6和6．2min,分离度为2．0,检出限为12μg／L（S／N=3）。并经液相色谱-电喷雾离子阱质谱实现了衍生物的分离与鉴定。其衍生化产物稳定,方法灵敏度高,重复性好,可用于氟比洛芬及其对映异构体的药理学立体选择性研究和药品质量控制。     

用毛细管色谱分离非对映体化合物的研究

不对称合成反应的迅速发展使各种对映异构体和非对映异构体的分离及纯度测定显得越来越重要。由于这些化合物只是个别原子空间排列不同,分子式和原子连接方式均相同,所以分离较困难。虽然高分辨核磁共振仪可以分析非对映异构体,但它有要求1mg以上纯品才能测定的缺点。而用毛细管色谱测定分子量较低的非对映异构体时,只需要微量的粗品就能快速、直观地看出异构体的相对含量。因此我们在用毛细管色谱分离几何异构体的基础     

Deciphering chemical interactions between Glycyrrhizae Radix and Coptidis Rhizoma by liquid chromatography with transformed multiple reaction monitoring mass spectrometry

In this study, we propose an integrated strategy for the efficient identification and quantification of herbal constituents using liquid chromatography with mass spectrometry. First, liquid chromatography with quadrupole time‐of‐flight mass spectrometry was employed for the chemical profiling of herbs, where a targeted following nontargeted approach was developed to detect trace constituents by using structural correlations and extracted ion chromatograms. Next, ion pairs and parameters of MS² of quadrupole time‐of‐flight mass spectrometry were selected to design multiple reaction monitoring transitions for the identified compounds on liquid chromatography with triple quadrupole mass spectrometry. The relative concentration of each constituent was then calculated using a semiquantitative calibration curve. The proposed strategy was applied in a study of chemical interactions between Glycyrrhizae Radix and Coptidis Rhizoma. A total of 140 compounds were identified or tentatively characterized from the herbs, 132 of which were relatively quantified. The visualized quantitative results clearly showed codecoction produced significant constituent concentration variations especially for those with a low polarity. The case study also indicated that the present methodology could provide a reliable, accurate, and labor‐saving solution for chemical studies of herbal medicines.     

利用液相色谱-质谱多反应监测方法测定食物中主要的牛奶过敏原α-酪蛋白

采用液相色谱-质谱串联的多反应监测技术检测食物中的牛奶过敏原成分α-酪蛋白,检出限达到了0.5 mg/L,与目前已报道的检出限水平相当。该过敏原成分在0.5~250 mg/L范围内线性关系良好,说明本方法对于食品中牛奶过敏原成分的检测具有极好的实际应用价值。     

酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响

蛋白质的还原-烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤,常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(IAA),但是IAA除了和半胱氨酸发生反应,也可能和其他多种氨基酸发生副反应。我们模拟常规的酶切条件,系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况。结果表明,多种氨基酸可以发生烷基化,其趋势为:半胱氨酸>肽段N端氨基酸>天冬氨酸>谷氨酸>组氨酸>天冬酰胺>赖氨酸>酪氨酸,同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性。根据定性结果,采用质谱多反应监测(MRM)技术对多个肽段进行了定量分析,评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响。该研究结果表明,过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响。在蛋白质组学研究的样本处理流程中,应避免样本的过烷基化。     

Fast and selective determination of triterpenic compounds in olive leaves by liquid chromatography-tandem mass spectrometry with multiple reaction monitoring after microwave-assisted extraction

A method for fast and selective determination of the main triterpenic compounds present in olive leaves — oleanolic, ursolic and maslinic acids as triterpenic acids and, uvaol and erythrodiol as triterpenic dialcohols — is reported here. Quantitative isolation of the analytes has been accomplished in 5 min by microwave assistance using ethanol as extractant. Due to the medium polarity of triterpenic acids and dialcohols, different ethanol-water ratios were tested in order to select the optimum extractant composition for their solubilisation. Microwave assistance provided a significant shortening of the leaching time as compared to conventional procedures by maceration, which usually requires at least 5 h. After extraction, determination was carried out by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS-MS) with a triple quadrupole (qQq) mass detector without any clean-up step prior to chromatographic analysis. Highly selective identification of triterpenes was confirmed by multiple reaction monitoring (MRM) using the most representative transitions from the precursor ion to the different product ions, while the most sensitive transitions were used for MS-MS quantitation. Total analysis performed in 25 min enables the characterization of a fraction with particular interest in the pharmacological area.     

手性高效液相色谱法测定板蓝根中表告依春和告依春含量

采用Chiralpak IC手性柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),建立了正相高效液相色谱测定板蓝根中表告依春(R-告依春)和告依春(S-告依春)含量的方法。考察了流动相组成、流速和柱温对分离度的影响。经优化后的实验条件: 以正己烷-异丙醇(体积比为90:10)为流动相,流速为0.8 mL/min;检测波长为245 nm,柱温为20 ℃。在此优化条件下,表告依春和告依春分离度为3.4,检出限为2.0 mg/L,在0.02～2.0 g/L范围内有良好的线性关系,平均回收率为101%,相对标准偏差(RSD)小于3.0%(n=6)。本方法可将具有抗病毒活性的表告依春与其对映体告依春基线分离并测定,专属性强,能有效控制板蓝根的质量。     

Rapid quantification of iridoid glycosides analogues in the formulated Chinese medicine Longdan Xiegan Decoction using high-performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry [corrected

Longdan Xiegan Decoction (LXD) is a formulated preparation composed of 10 ingredient herbs, with iridoids as the main bioactive components. In this study, a rapid, simple and reliable method of simultaneous determination of four iridoid glycosides in LXD using high-performance liquid chromatography (HPLC) coupled with electrospray ionization mass spectrometry (MS) was first developed and validated. The four iridoid glycosides references were isolated from LXD extract and purified using a preparative HPLC chromatography. The sample preparation for quantification comprised of a simple ultrasonic extraction and the satisfactory chromatographic separation of the four structurally similar iridoid glycosides was effected in less than three minutes on a CAPCELL PAK C(18) MGII column (3 microm, 100 mm x 2.0 mm), using an elution system of 10% methanol and their concentrations in different batches of LXD and ingredient herbs were simultaneously determined by HPLC-MS/MS using a multiple reaction monitoring (MRM) mode. The method was validated with respect to the overall intra- and inter-day variation (RSD less than 8%) and the limits of quantification for the four iridoid glycosides were 35, 20, 37 and 33 ng/mL, respectively.     

依赖色谱保留时间的智能化选择反应监测质谱方法的建立及其初步应用

建立了依赖色谱保留时间的智能化选择反应监测质谱方法,并与非依赖色谱保留时间的智能化选择反应监测质谱分析方法对不同体系(牛血清白蛋白酶切物、6种标准蛋白质混合物酶切物、腾冲嗜热菌蛋白提取液酶切物)的分析结果进行了系统比较。结果表明,引入色谱保留时间后的智能化选择反应监测质谱方法能够显著提高肽段及蛋白质的鉴定量,并且在复杂体系（如腾冲嗜热菌蛋白提取液酶切物）中效果尤为明显,鉴定到的肽段及蛋白质的覆盖率可分别达到目标肽段和蛋白质数量的89.62%和92.41%,并且灵敏度高、重复性好,能够实现对质荷比相同但保留时间有差异的肽段的准确鉴定。该方法将在复杂生物样本目标蛋白质组高通量、高灵敏度的鉴定、验证和确认中发挥独特作用。     

液相色谱-电喷雾电离-离子迁移谱联用法测定中药口服液中7种指标性成分

采用液相色谱-电喷雾电离-离子迁移谱联用技术，研究建立了中药口服液中丹参素、甘草酸、天麻素、绿原酸、葛根素、黄芩苷、芦丁等7种指标性成分的二维分离分析方法。样品溶液首先经ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（50 mm×1 mm，1.7 μm）分离后，导入可调节式分流器（分流比50 ∶ 1），柱后流出液分别进入离子迁移谱和三重四极杆质谱检测。分别详细优化了液相色谱、喷雾电压、迁移管和气体预加热温度、漂移气流速等实验条件，同时建立了指标性成分的液相色谱-三重四极杆质谱确证方法。7种中药指标性成分的检出限为2~10 μg/mL，定量限为5~25 μg/mL。采用本方法对中药口服液实际样品进行了检测分析。通过将液相色谱和离子迁移谱进行偶联，可实现目标化合物同时基于疏水性和离子迁移率差异的二维分离，获得更为丰富的测试信息。     

基于双定性原则的高效液相色谱-二极管阵列检测法分析中药组分

双定性是根据样品的保留时间和吸收光谱的特征峰进行复合定性的一种新方法。该文基于自行设计及组装的二极管阵列检测器,构建了一套液相色谱-二极管阵列检测系统。采用该色谱系统分别对6种中药饮片中的非法添加物金胺O和枣仁天麻胶囊中的有效成分五味子醇甲进行了分离及定性研究。结果显示,在蒲黄饮片和枣仁天麻胶囊样品色谱图中均存在与目标检测物保留时间接近的色谱峰,进一步通过吸收光谱的特征峰比对,均排除了目标物存在的可能。应用结果证明,基于保留时间/吸收光谱的双定性原则,可以有效排除样品中杂质的干扰,避免假阳性结果,为中药组分研究提供了参考方法。