油菜细胞质雄性不育相关基因的筛选

甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与tAPX基因及其表达的蛋白都具有较高同源性.它是活性氧清除的重要酶类,很可能与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.     

油菜细胞质雄性不育相关基因表达差异研究

利用半定量RT-PCR与荧光定量PCR手段分析ATP6、tAPX在甘蓝型油菜不育系与恢复系中的基因表达差异.结果表明, ATP6、tAPX在不育系花中的表达量比在恢复系花中的低. 因此,油菜花中ATP6、tAPX基因表达模式具有较强的相似性,再次证实ATP6与tAPX相关.     

春性甘蓝型油菜细胞质雄性不育系的结实性评价

在两个环境条件下,考察了4个春油菜不育系的育性、花器性状和结实性.结果表明:4个不育系的育性稳定性和结实性差异较大,105A的不育性稳定且彻底,花瓣张开角度大(83.64°),结实指数和单株产量最高;318A和025A的育性稳定性较差,花瓣张开角度小(41.18°、44°),结实指数和单株产量均较低;改良144A的上述性状介于105A和025A之间.影响不育系结实指数的主要因素是花期闭蕾率和花瓣张开角度.花瓣张开角度小会增加蜜蜂从基部进入花朵内采蜜的几率,从而降低蜜蜂对不育系的授粉效果.     

应用Bulked-DNA寻找白菜型油菜细胞质雄性不育基因的RAPD标记

采用随机扩增多态DNA(RAPD)标记方法从白菜型油菜细胞质不育系与保持系的Bulked-DNA中筛选出3个与白菜型油菜细胞质雄性不育基因连锁的RAPD标记,DNA片段大小约为1300,1000和900bp.与不育基因之间的连锁距离分别为38 cm,24 cm,4 cm,LOD值为0.5,1 9,03.     

甘蓝型油菜雄性不育三系青海春播制种技术

甘蓝型油菜雄性不育三系杂交种秦油2号的育成与应用把油菜杂种优势利用研究推向了一个新阶段。但由于目前已经或即将应用于生产的三系杂交油菜其配组的不育系多属低温敏感型不育系,在长江中下游地区及江淮之间秋播制种条件下,春季受低温影响,不育系易出现微粉,制种杂交率不理想,影响种子质量。为此,我们自1997年春季在青海省乐都县园艺场(东经102°23′,北纬36°26′,海拔2000m左右)连续进行了三年三系杂交油菜皖油九号制种试验,三年平均制种产量为1897.5kg/hm~2,制种杂交率经我所秋播鉴定在95％～98％之     

青海省新型甘蓝型油菜品系主要性状研究

对甘蓝型油菜（039、E144）与青藏高原白菜型油菜浩油11种间杂交获得的66个新型甘蓝型油菜品系的生育期、产量性状、含油量、脂肪酸组成、抗虫性和对波里马细胞质雄,陛不育的恢复性等性状进行了研究。结果表明：66个品系中出现了具有以下特征的新型甘蓝型油菜品系,即生育期极短（西宁地区100d以内）、产量性状优于甘蓝型亲本、含油量高于甘蓝型亲本、油酸含量大于70％、饱和脂肪酸含量小于5％、能够完全恢复波里马细胞质雄性不育、抗虫性（茎象甲）强于甘蓝型亲本。这些品系将为今后甘蓝型油菜育种提供优良的亲本资源。     

甘蓝型油菜抗逆性相关基因‘抗坏血酸过氧化物酶’的克隆与转基因研究

应用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H)技术,以ATP6作为诱饵蛋白筛选到的3′端含有终止密码子的一个片段,通过比对同源基因设计5′端兼并引物进行PCR扩增,获得全长基因,该基因与BO-tbAPX(登陆号：AB125634.1)具有96%的同源性,与AT-tbAPX(登录号：AK221988.1)具有90%的同源性,这两个基因均属于抗坏血酸过氧化物酶基因家族,与植物抗逆境密切相关.因此,我们获得的基因极可能与植物抗逆性紧密相关.通过构建该基因的真核表达载体pCAMBIA2301G-APX,以根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入甘蓝性油菜细胞质雄性不育恢复系84100-18无菌苗下胚轴,经过诱导愈伤和再分化,成功得到了转基因植株.     

甘蓝型油菜雄性不育材料S90—8—7的获得及细胞学研究

从甘蓝型油菜与诸葛菜属间杂种后代中获得一个芥酸含量低、亚油酸含量较高的雄性不育材料S90— 8—7.细胞学研究表明 ,S90— 8—7的染色体数为 2n =38,其花药发育受阻于四分体至单核花粉期 ,属单核败育型 .小孢子发育到单核期后 ,不再向前发育成为二核期和三核期花粉 ,而是逐渐退化以至解体 .在减数分裂后期Ⅰ /末期Ⅰ一些细胞出现落后染色体或染色体桥 .不育系绒毡层延迟退化 ,一直到单核小孢子晚期才迅速解体 .初步认为S90— 8— 7可能是一个细胞核雄性不育材料 ,其不育性至少受一对隐性基因控制 .     

油菜萝卜细胞质雄性不育系恢复材料Ad—6（F5）的细胞遗传…

对油菜萝卜细胞质雄性不育系恢复材料Ａｄ－６（Ｆ５）进行了染色体核型分析和ＰＭＣ减数分裂染色体行为观察，其核型公式为：２ｎ＝３６＝２６ｍ＝１０ｓｍ，随体染色体数目具有不稳定性，随体具有多态性和杂合性。     

甘蓝型油菜BnBRI1基因的克隆及表达分析

以拟南芥油菜素内酯受体BRI1基因序列设计同源简并引物,利用同源克隆技术,克隆了甘蓝型油菜中编码油菜素内酯受体基因全长cDNA序列,命名为BnBRI1(GenBank:JX871217),该基因开放阅读框(ORF)大小为3591bp,与拟南芥中BRI1基因(GenBank:NM_120100)相似性为94.21%,编码1196个氨基酸,与拟南芥中BRI编码的氨基酸相似性为89.23%.采用实时定量PCR分析表明,BnBRI1基因在根、茎、叶中都有表达,但表达量存在显著差异.在两叶一心期和花期的根中表达量最高,四叶一心期和抽薹期的叶中表达量最高.     

甘蓝型油菜BnbHLH92基因的克隆与表达分析

为研究甘蓝型油菜bHLH转录因子的功能,采用同源克隆技术从甘蓝型油菜中克隆了5个BnbHLH92基因全长cDNA序列,分别命名为BnbHLH92-1、BnbHLH92-2、BnbHLH92-3、BnbHLH92-4、BnbHLH92-5,其编码区长度分别为738,657,684,741,717bp.qRT-PCR实验表明,除BnbHLH92-1外,其它的BnbHLH92基因主要在抽薹期和花期的根中表达,BnbHLH92-1主要在抽薹期和花期的根以及二叶一心期的叶中表达.非生物胁迫显著影响BnbHLH92基因的表达,使其表达量升高.低温胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后4、6、6、6、6 h表达量达最高.高温胁迫下,5个BnbHLH92基因分别在胁迫后2、6、6、8、4 h表达量达最高.盐胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后6、6、24、24、24 h表达量达最高.在ABA诱导下BnbHLH92基因表达量也有不同程度的增加,分析发现BnbHLH92基因的启动子序列上存在ABA响应元件(ABRE).     

甘蓝型油菜独脚金内酯相关基因的克隆与表达分析

独脚金内酯(strigolactones,SLs)是一类新鉴定的植物激素,参与抑制茎分枝.采用同源克隆技术自甘蓝型油菜中得到了三个SLs相关基因,分别命名为BnMAX4,BnMAX1和BnD14,其CDS各长1707,1593,804bp,推测编码的蛋白质功能分别为β-类胡萝卜素加氧酶,细胞色素P450,α/β水解酶.RT-qPCR表达分析显示在野生型甘蓝型油菜二叶及四叶一心期的各组织器官中,BnMAX4主要在二叶一心期的根中表达;BnMAX1无明显表达优势组织;BnD14在二叶一心期的叶中高表达.旱胁迫及盐胁迫处理时BnMAX4的表达趋势为骤降;BnMAX1旱胁迫处理时表达量降低,盐胁迫处理时先下降后上升,9h后又下降;BnD14旱胁迫处理时在3h与12h各有两个表达高点,盐胁迫处理时在3h表达量最高.     

甘蓝型油菜BnTR1和ATP6之间相互作用的研究

为进一步研究ATP6和BnTR1之间的相互作用及具体作用位点,通过构建含不同长度的BnTR1 cDNA序列的pGADT7融合载体,利用酵母双杂交证明了BnTR1的C端92～202位氨基酸序列与ATP6的氨基酸序列具有相互作用.     

甘蓝型油菜BnDHAR基因的克隆及表达分析

在甘蓝型油菜矮化突变体与其高秆亲本构建的消减杂交文库中,得到一长约230bp与编码脱氢抗坏血酸还原酶的DHAR基因核苷酸序列相似的DNA片段.采用同源克隆技术,在甘蓝型油菜中获得该基因的全长cDNA序列,命名为BnDHAR.BnDHAR与已公布的甘蓝型油菜基因组中的该基因核苷酸序列完全一致.对BnDHAR基因不同发育时期组织的表达分析的结果显示,BnDHAR基因在高秆油菜苗期的叶中表达量最高,是矮化突变体的5倍,在根、茎中表达极低,具有组织特异性.非生物胁迫显著影响BnDHAR表达,高温胁迫使其表达升高,盐胁迫处理9h时达最高,而干旱胁迫时表达量在处理12h时才达最高.     

利用酵母双杂交系统筛选甘蓝型油菜ATP6的相互作用蛋白质

通过酵母双杂交系统,以ATP6作为诱饵蛋白筛选与ATP6有相互作用的蛋白质.通过筛选和鉴定,获得了5个与ATP6有相互作用的蛋白质.其中一个与拟南芥中内质网膜上的蛋白转运复合体中的α亚基（Sec61α）有很高的相似性.通过TAIL PCR和设计简并引物扩增初步得到了甘蓝型油菜Sec61α全长基因组序列和cDNA序列.并利用生物信息学分析手段对甘蓝型油菜Sec61α进行了比对和分析,推测该蛋白质可能参与了花粉的发育过程.     

光周期敏感细胞质雄性不育小麦的初步研究

选用属Ｄ＾２型细胞质粗厚山羊草（Ａｅｇｉｌｏｐｓｃｒａｓｓａ）、牡山羊草（Ａｅ．ｊｕｖｅｎａｌｉｓ）和瓦维洛夫山羊草（Ａｅ．ｖａｖｉｌｏｖｉｉ）分别与普通小麦（Ｔｒ．ａｅｓｔｉｖｕｍ）品种鄂恩１号、ＮＰＦＰ和白皮２２４连续回交进行核转换组配的９个异质系（即核质杂种）和核供体品种鄂恩１号、ＮＰＦＰ和白皮２２４，于分蘖始期（叶原基期）和拔节始期（小花分化期）分别置于１５．５－１６ｈ和２４ｈ长光照下，以     

甘蓝型油菜细胞核雄性不育系“79.7”的遗传及应用研究

对雄性核不育油菜“79.7”作了遗传和应用研究。结果表明,“79.7”雄性不育油菜的不育特性是由两对隐性重叠基因控制的,甘兰型油菜可作它的恢复源。将“79.7”核不育油菜转育成新的低芥、双低及双低黄籽两用系.用低芥两用系组配筛选育成的优质杂交种“蜀杂1号”已在生产上大面积推广使用。     

水稻红莲型细胞质雄性不育性及其恢复性的遗传

以花粉可育率和自然结实率为指标择红莲型细胞质雄性不育系丛系４１Ａ与其恢复系配制的Ｆ１,Ｆ２,ＢＣ１和ＢＣ２等世代的育性表现进行了调查,结果表明,红莲型细胞质雄性不纱丛广４１Ａ属配子体不育,其不育性受一对隐性核主基因和不育细胞质共同控制,其核不育基因与珍汕９７Ａ不等位。     

甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析

通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8（Fatty Acid Desaturase 8）保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RTPCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22 ℃和8 ℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现