基于纳米金在线扫集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷

提出了纳米金在线富集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的方法。试验选择了以下的分析条件:①运行电压-20kV;②背景电解质为pH 8.2的20mmol.L-1硼砂(含粒径10nm纳米金溶液200μL和0.1mmol.L-1 CTMAB);③检测波长254nm。试验证明背景电解质中的纳米金粒子与CTMAB形成胶束,提高了对8-OHdG的扫集能力,8-OHdG与dG在10min内可实现基线分离。8-OHdG浓度在0.50～50.0μmol.L-1范围内呈线性,检出限(3S/N)为39nmol.L-1。方法用于尿样中8-OHdG含量的测定,所得加标回收率在90.0%～104.6%之间。     

2-甲基-4-羟基-6-苯基嘧啶和2-甲基-4-羟基-5-溴-6-苯基嘧啶的高效液相色谱法分离测定

采用ODS-C18色谱柱和紫外检测器,对2-甲基-4-羟基-6-苯基嘧啶和2-甲基-4-羟基-5-溴-6-苯基嘧啶的含量进行HPLC分离测定.以甲醇水=4555为流动相,紫外检测波长为237 nm,样品线性范围为0.001～0.1 mg/mL.2-甲基-4-羟基-6-苯基嘧啶的RSD为0.5%;2-甲基-4-羟基-5-溴-6-苯基嘧啶的RSD为1.0%.     

固相萃取-气相色谱-质谱法检测染毒尿样中芥子气-谷胱甘肽加合物的β-裂解产物

合成并纯化了芥子气-谷胱甘肽的β-裂解产物1,1′-磺酰基二(2-甲巯基)乙烷(SBMTE),纯度为98.9%.建立了固相萃取-气相色谱质谱法检测染毒尿样中SBMTE的方法,对尿样中SBMTE的提取富集、 Oasis HLB固相萃取柱净化条件等因素进行了优化.实验中采用DB-5MS毛细管柱进行分离,以化学电离源(CI)质谱选择离子模式(SIM)进行检测,并通过内标法定量.SBMTE的线性范围为1～100 ng/mL,r=0.9991,回收率为89.0%～92.6%,检出限为0.5 ng/mL.方法满足芥子气中毒人群尿中SBMTE的检测要求.     

高效液相色谱-串联质谱法测定兔尿中溴氰菊酯及其毒性生物标志物

建立了一种应用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定兔尿中与溴氰菊酯毒性相关的多种生物标志物的检测方法。分析物包括溴氰菊酯及其代谢产物1R,3R-二溴菊酸、3-苯氧基苯甲酸,以及5种生物标志物5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸、3-硝基丙酸、8-羟基脱氧鸟苷和6-甲氧基鸟嘌呤。样品经硅藻土基质固相分散萃取、三氯乙酸沉淀蛋白质和HLB固相萃取小柱净化,使用电喷雾离子源,在多反应监测模式下正负切换采集测定,其中溴氰菊酯、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸、8-羟基脱氧鸟苷和6-甲氧基鸟嘌呤采用正离子模式,1R,3R-二溴菊酸、3-苯氧基苯甲酸和3-硝基丙酸采用负离子模式。基质校准曲线外标法定量。结果表明,7种生物标志物在各自的浓度范围内线性关系良好（R²不小于0.9914）,5-羟基吲哚乙酸的检出限和定量限分别为20 μg/L和50 μg/L,其余化合物的检出限和定量限分别为0.2~5.0 μg/L和0.5~10 μg/L;在兔尿中3个不同添加水平的平均回收率为74.2%~98.7%,相对标准偏差（RSD）不大于12%,方法简单、快速、准确、灵敏,可作为溴氰菊酯暴露评估的检测方法。     

离子液体-分散液液微萃取-高效液相色谱法测定尿样中3-羟基苯并[a]芘

建立了离子液体-分散液液微萃取/高效液相色谱-荧光检测法测定吸烟人群尿样中3-羟基苯并[a]芘的分析方法。尿样经酶解、滤膜过滤后,采用1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C_8M IM][PF_6])为萃取剂进行分散液液微萃取富集,移取沉积相进行液相色谱分析。含量在1.5~150 ng/L范围内具备良好的线性关系(r~2≥0.996),富集倍数约为180。检出限(LOD,S/N=3)和测定下限(LOQ,S/N=10)分别为0.45和1.5 ng/L。在1.8~5 ng/L加标水平下,回收率为85.6~94.6%,相对标准偏差(RSD)为3.4%~5.2%。方法适用于吸烟人群尿样中痕量3-羟基苯并[a]芘含量的测定。     

人尿中8-羟基脱氧鸟苷的气相色谱分析方法

报道了人尿中脱氧核糖核酸（DNA）氧化损伤产物8-羟基脱氧鸟苷的气相色谱分析方法。采用固相萃取和衍生前处理步骤,用色谱保留值及气相色谱/质谱进行定性鉴定,在给定的色谱条件下,尿中的8-羟基脱氧鸟苷能与其他杂质很好地分离,内标法定量。方法的线性范围为0.2-100μg,FID的检测限为4.56pg/s。分析尿样的相对标准偏差小于8.0%。     

5,3'''',5''''-三磺酸基-2,3,4,4''''-四羟基脱氧安息香三钠盐的合成、晶体结构及性质研究

合成了水溶性很好的5,3',5'-三磺酸基-2,3,4,4'-四羟基脱氧安息香三钠盐(TTDB), 采用IR、 UV、 1H NMR和元素分析对其结构进行了表征, 并利用X射线单晶衍射仪测定了该化合物的晶体结构. 使用荧光光谱法检测了化合物对羟基自由基的清除作用. 用循环伏安法探讨了化合物的电化学性质. 实验结果表明, 5,3',5'-三磺酸基-2,3,4,4'-四羟基脱氧安息香三钠盐[C14H17Na3O18S3]属于单斜晶系, 空间群C2/c, a=1.422 3(4) nm, b=2.432 7(8) nm, c=1.359 6(4) nm, α=90°, β=113.044(5)°, γ=90°, Z=8, V=4.329(2) nm3, Dc=1.925 Mg/m3, F(000)=2 568, Mr=627.43, R1=0.095 0, wR2=0.264 8. TTDB的抗羟基自由基的氧化作用优于其相应的脱氧安息香THDB, 前者清除羟基自由基的半数有效浓度(EC50)为47.3 μmol/L, 而后者的EC50则为53.1 μmol/L. 电化学研究结果表明, THDB和TTDB的氧化还原过程有所差异, 前者负扫时在-1.016和-1.228 V处出现两个还原峰, 正扫时在0.219 V处出现一个氧化峰, 但后者负扫时仅在-0.999 V出现一个还原峰, 正扫时在0.193 V出现一个氧化峰.     

5,3′,5′-三磺酸基-2,3,4,4′-四羟基脱氧安息香三钠盐的合成、晶体结构及性质研究

合成了水溶性很好的5,3′,5′-三磺酸基-2,3,4,4′-四羟基脱氧安息香三钠盐(TTDB),采用IR、UV、1HNMR和元素分析对其结构进行了表征,并利用X射线单晶衍射仪测定了该化合物的晶体结构.使用荧光光谱法检测了化合物对羟基自由基的清除作用.用循环伏安法探讨了化合物的电化学性质.实验结果表明,5,3′,5′-三磺酸基-2,3,4,4′-四羟基脱氧安息香三钠盐[C14H17Na3O18S3]属于单斜晶系,空间群C2/c,a=1·4223(4)nm,b=2·4327(8)nm,c=1·3596(4)nm,α=90°,β=113·044(5)°,γ=90°,Z=8,V=4·329(2)nm3,Dc=1·925Mg/m3,F(000)=2568,Mr=627·43,R1=0·0950,wR2=0·2648.TTDB的抗羟基自由基的氧化作用优于其相应的脱氧安息香THDB,前者清除羟基自由基的半数有效浓度(EC50)为47·3μmol/L,而后者的EC50则为53·1μmol/L.电化学研究结果表明,THDB和TTDB的氧化还原过程有所差异,前者负扫时在-1·016和-1·228V处出现两个还原峰,正扫时在0·219V处出现一个氧化峰,但后者负扫时仅在-0·999V出现一个还原峰,正扫时在0·193V出现一个氧化峰.     

人工尿样中芥子气-谷胱甘肽加合物的气相色谱-质谱法检测

该文以气相色谱-质谱法测定人工尿样中的芥子气-谷胱甘肽加合物的β-裂解产物1,1′-磺酰基二(2-甲巯基)乙烷(SBMTE)。采用固相萃取(SPE)及固相支持液-液萃取(SLE)两种方法对尿样中的SBMTE进行富集净化,并对两种方法的影响因素进行了优化。采用中等极性毛细管色谱柱(DB-17MS)分离,以电子轰击源(EI)质谱选择离子模式(SIM)检测,内标法定量。结果表明,以SPE/GC-MS方法检测,SBMTE在1~100μg/L范围内线性关系良好,相关系数r为0.998 4,检出限(LOD)为0.1μg/L,回收率大于90%;以SLE/GC-MS方法检测,SBMTE在2~150μg/L范围内线性关系良好,相关系数r为0.998 8,检出限为0.5μg/L,回收率大于90%。SPE方法适用于直接检测空白尿样中添加SBMTE或芥子气染毒真实尿样还原后样品的进一步净化处理,SLE方法可应用于芥子气染毒后真实尿样的确证检测和溯源性检测。     

8-羟基鸟嘌呤自由基的开环反应机理

使用经实验校准的B3LYP/DZP++方法研究了8-羟基鸟嘌呤自由基的开环反应机理. 计算结果表明, 该反应先后历经C8—N9键的断裂、羟基H原子向N7原子转移两个步骤完成, 转移中的H原子具有阳离子的特征. 当没有水存在时, 羟基H原子的转移反应需经历一个四元环的过渡态, 具有较高的活化能, 反应较困难. 但如果有水分子存在, 羟基H原子的转移步骤将经历一个低活化能的六元环过渡态, 使整个8-羟基鸟嘌呤自由基的开环反应可以在较温和的条件下顺利完成. 在无水催化时, 羟基H转移是反应的速率控制步骤; 而有水催化时, 反应的速率由C8—N9键的断裂步骤控制.     

自制混合型小柱净化-高效液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中有机磷酸酯代谢物和8-羟基-2'-脱氧鸟苷

建立了基于自制混合型小柱的样品净化-高效液相色谱-串联质谱同时测定7种有机磷酸酯（OPEs）主要代谢产物及生物标志物8-羟基-2'-脱氧鸟苷（8-OHdG）的分析方法。样品经乙腈提取后用自制小柱富集净化,以乙腈-0.2%（v/v）氨水溶液作为流动相进行梯度洗脱,在多反应监测模式下进行定性和定量分析。结果显示,8种目标物在0.1~200 μg/L范围内呈良好的线性关系,7种OPEs代谢物的回收率为52.36%~114.56%,8-OHdG回收率为88.63%~97.72%。将该方法应用于人体尿液实际样品中,7种OPEs代谢物和8-OHdG的检出范围分别为6.24~46.07 μg/L和5.90~16.71 μg/L,8-OHdG与7种OPEs代谢物总含量之间存在显著相关性。该方法操作简单、灵敏度高、准确性好、重现性强,可为更全面地评价人体内OPEs暴露水平及机体损伤提供可靠的技术支持。     

高效液相色谱-离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠

建立了中毒应急检测样品生物体液内痕量敌鼠和氯敌鼠的高效液相色谱-离子阱质谱定性定量检测方法。全血样品由甲醇/乙腈(50/50, v/v)沉淀蛋白后再经Oasis HLB固相萃取小柱净化富集,尿液样品直接经同类小柱净化富集。采用Extend C18柱分离,以乙酸铵-乙酸(0.02 mol/L, pH 5.5)缓冲溶液和甲醇(15/85, v/v)溶液为流动相,使用电喷雾电离负离子多反应监测模式检测敌鼠和氯敌鼠。对全血样品,敌鼠和氯敌鼠分别在1.0～200.0 μg/L和0.5～100.0 μg/L范围内呈良好的线性关系,回收率分别在90.1%～92.2%和87.6%～93.4%范围内,日内相对标准偏差(RSD)分别小于6.8%和7.1%,日间RSD分别小于9.9%和10.9%,定量限分别为1.0 μg/L和0.5 μg/L。对尿液样品,敌鼠和氯敌鼠分别在0.2～ 40.0 μg/L和0.1～20.0 μg/L范围内呈良好的线性关系,回收率分别在90.1%～94.5%和90.0%～ 98.0%范围内,日内RSD分别小于6.1%和7.3%,日间RSD分别小于8.9%和11.2%,定量限分别为0.2 μg/L和0.1 μg/L。本方法简便、灵敏,能满足敌鼠和氯敌鼠中毒病人的临床快速诊断要求。     

Quantitative determination of 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine as a biomarker of oxidative stress in thalassemic patients using HPLC with an electrochemical detector

A simple and robust HPLC method with electrochemical detection was developed for the quantitative determination of 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine (8-OHdG), a DNA damage product excreted in urine. Sample cleanup was carried out using solid-phase extraction (SPE) prior to chromatographic separation. 8-OHdG was well separated on an Eclipse XDB®-C18 column (150 × 4.6 mm i.d., 5 μm) with an Eclipse XDB®-C18 guard column (12 × 4.6 mm i.d., 5 μm). Two mobile phases containing methanol and 10 mM sodium formate (pH 4.5) at a ratio of 10: 90 and 50: 50 v/v, respectively, were used. The retention time of 8-OHdG was 9.8 ± 0.5 min. The recovery of 8-OHdG was found to be 97.2 ± 3.3% (n = 6). Intraday and interday precisions of the method were 4.0 ± 2.9% (n = 6) and 6.6 ± 1.7% (n = 6), respectively. The detection limit was 5 ng/mL. Preliminary investigation showed that the mean value of 8-OHdG, normalized with the amount of creatinine in the sample, from the thalassemic group was significantly higher than that from healthy subjects (211 ± 214 ng/mg creatinine vs. 31.4 ± 32.2 ng/mg creatinine, respectively), indicating oxidative stress.     

超高效液相色谱串联质谱法测定婴儿奶粉中的维生素B_(12)

建立了超高效液相色谱串联质谱法测定婴儿奶粉中维生素B12的方法。采用三氯乙酸沉淀蛋白质,HLB固相小柱吸附净化提取液中的维生素B12,以50%的甲醇洗脱,吹去甲醇后定容测定,色谱柱为ACQUTITY UPLC BEH C18柱,以甲醇–10 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱,MRM模式,定量离子为m/z 678.3/147.2。在优化条件下,线性范围为0.5~200μg/L,相关系数(r)为0.999 3,检出限为0.3μg/kg,回收率为88.3%~92.9%,测定结果的相对标准偏差小于5%(n=6)。方法具有样品处理简单、灵敏度高、重现性好、分析时间短等优点,可以作为实验室常规测定婴幼儿奶粉中维生素B12的方法。     

凝胶渗透色谱/液相色谱串联质谱法测定畜禽及水产品组织中头孢喹肟的残留量

建立了牛肉、猪肉、鸡肉、鱼肉、泥鳅肉等动物组织中头孢喹肟残留的高效液相色谱串联质谱检测方法。样品经乙腈-水(体积比4∶1)提取、Sephadex LH-20凝胶柱(16 mm i.d.×320 mm)净化;采用CAP-CELL PAK MG C18(100 mm×2.0 mm,3μm)色谱柱,以0.1%甲酸-甲醇为流动相,0.2 mL/min梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离,选择反应监测(SRM)模式测定。检测离子对为m/z 529.1/134.2、529.1/396.1、529.1/125.1,其中m/z 529.1/134.2为定量离子对。在优化实验条件下,头孢喹肟在5.0～200μg/L范围内线性良好,相关系数(r)为0.999 1,检出限(LOD)为1.0μg/kg,定量下限(LOQ)为3.0μg/kg;在3.0、10、50、100μg/kg 4个加标水平下的平均回收率为75%～105%,相对标准偏差(RSD)为2.4%～11.9%。该方法净化效果理想、重复性好、灵敏度高,可满足动物组织中头孢喹肟药物残留的检测要求。     

电喷雾萃取电离质谱法检测1-羟基芘

采用电喷雾萃取电离质谱(EESI-MS)分析致癌性环境有机污染物多环芳烃(PAHs)生物标志物1-羟基芘(1-OHP),探究1-OHP在EESI源中电离的可行性,考察ESI溶剂和样品溶液组成对方法灵敏度的影响,初步建立I-OHP的EESI MS半定量分析方法.结果表明,溶液中1-OHP能够在EES1源中有效电离,生成准分子离子[M-H]- (m/z 217),并得到其二级质谱特征碎片离子[M- H- CO]- (m/z 189);水、甲醇、乙醇、正丙醇和正丁醇5种ESI溶剂中,使用甲醇时,离子峰m/z 217信噪比最大.样品溶液中甲醇含量越高,离子峰m/z 217强度越强.离子峰m/z 217强度与1-OHP浓度在10～200 μg/L内的线性相关性相对最好;相关系数(R)0.982;相对标准偏差(RSD)为3.4％～14.0％(n=5);定量下限约为10 μg/L(S/N=10);单次检测时间小于0.5 min.     

分子印迹固相萃取-气相色谱-质谱法测定猪尿中4种β-受体激动剂

建立了分子印迹固相萃取结合气相色谱-质谱测定猪尿中β-受体激动剂氯丙那林、马步特罗、克伦特罗、莱克多巴胺的方法.应用分子印迹柱富集并净化猪尿液中4种β-受体激动剂,比较了分子印迹固相萃取与常规固相萃取的净化效果.通过BSTFA-1％ TMS硅烷化衍生,氘代克伦特罗和氘代莱克多巴胺为校正内标,气相色谱-质谱测定.在优化条...     

顶空进样GC-SIM-MS测定硝唑尼特中溶剂残留甲醇含量

利用气相色谱-选择离子监测质谱联用仪(GC-SIM-MS)测定硝唑尼特样品中溶剂残留甲醇的含量,顶空进样,温度为70℃,时间为20 min.SIM定量离子m/z 32,参考离子m/z 31,30和29.甲醇质量浓度在0.5~100μg/m L内呈良好的线性(R~2=0.999 92).方法相对标准偏差为2.49%~4.85%,样品加标回收在94.5%~102.8%之间,检测限为0.5μg/m L,符合定量分析的要求.     

人体尿液中双酚A与壬基酚的同位素稀释的LC-MS/MS分析

采用固相萃取、高效液相色谱-质谱/质谱仪同位素稀释技术,建立了尿中双酚A(BPA)和壬基酚(NP)的检测方法.液相色谱分离用C18柱,流动相为甲醇和水,负离子电喷雾模式电离,多反应离子监测方式检测,BPA和NP的定量离子对分别为m/z 226.9/132.9、219.3/118.8, 13C和氘代同位素化合物分别做回收率控制和内标定量.BPA和NP的基质加标回收率分别为86% ～106%、90% ～114%,定量下限分别为0.97、2.3 μg/L.实际尿样的测定验证了该方法的可行性.     

气相色谱–串联质谱法快速测定茶叶中的蒽醌

建立气相色谱–串联质谱法(GC–MS–MS)快速测定茶叶中蒽醌的方法。样品中的蒽醌用色谱纯乙腈提取,经过涡旋1 min,超声20 min,离心、浓缩后用固相萃取柱(SPE)净化,以DB–5MS毛细管柱分离,以m/z 207.9,152为定性离子对、m/z 207.9,180为定量离子对,多反应检测模式下测定,外标法定量。蒽醌的质量浓度在1~500μg/L范围内与定量离子的峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 98,方法的检出限为1μg/kg。在10,20,50μg/kg加标水平下,样品加标回收率为92.85%~98.10%,测定结果的相对标准偏差为8.50%~11.05%(n=5)。该方法简单、快速,检出限低,准确度和精密度高,可用于茶叶中蒽醌的检测。