氯化艳密度梯度离心法纯化叶绿体DNA

方法用蔗糖密度梯度离心分离烟草及油菜纯化的叶绿体,然后用氯化饱密度梯度超速离心纯化叶绿体 D N A.不加 D N ase处理,但从限制性核酸内切酶作用,经琼脂糖凝胶电泳得到的比较清晰的限制图谱,产物可用于制作物理图谱和 D N A 重组合     

含蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿体核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法,提取、分离和纯化了pVFB33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解,构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱,同时,对实验结果进行了分析讨论.     

含水稻rbcL重组质粒限制图谱的构建

从水稻叶绿体羞因文库中挑选含rbcL荃因的3号克隆，采用大t煮沸法，分离纯化了质粒DNA.利用限制性核酸内切醉BamH I ,Sma I ,Xho I和Cla I进行单酶或双酶切，在BamH I限制图谱的羞础上构建了几种限制醉的限制图谱.     

油菜叶绿体DNA在大肠杆菌中的克隆

用普通差速离心分离了甘蓝型油菜(Brassica napus)九二13系的叶绿体,并以苯酚、氯仿及RNase处理,纯化了叶绿体DNA.经BamHⅠ,EcoRⅠ,HindⅢ,SalⅠ与SmaⅠ五种限制酶酶解,电泳分析,估算出该环状叶绿体DNA分子周长约为140.5千碱基对(kbp),即分子量约92.7×10~6道尔顿(daltion).以质粒pBR325为载体,将叶绿体DNA的BamHⅠ酶解片段,引入大肠杆菌中克隆,得到了三个重组体.     

水稻叶绿体DNA的分离纯化及其限制酶切分析

通过在匀浆缓冲液中添加抗坏血酸并结合蔗糖密度梯度离心和差速离心法等分离纯化了水稻叶绿体DNA ( ctDN A )，得率高达100}g八OOB叶，其纯度足以用于限制酶分析和分子生物学研究.环状水稻ctDNA总长度为129.5Kbp, Pvu I , Sal j , Pst f ,Hiad I , EcoRI和BamHI在ctDNA上的切点分别为11, 12, 17, 37, 67和`6.     

猪肝线粒体DNA的纯化及其限制酶切分析

本文报道了一种纯化猪肝线粒体DNA } mtDNA)的简便方法.用差速离心制备线粒体，然后用1 `oSarkosyl提取粗制的mt DNA,氯仿一异戍醇脱蛋白，最后用Sepharose4B凝胶柱层析纯化mt DNA.对纯化的mt DNA用化学分析、紫外吸收光谱、凝胶电泳和限制酶切等方法进行了鉴定.猪肝mt DNA经限制酶Hindi, Hael, Hinc.y,BamH I和Eco R I酶切分别切割成.4r .6,.r,5, 5和3个片断，经估算猪肝。tDNA的分子鼻约为15.85千碱基对或10. A6 x 10‘道尔顿.     

含蚕豆核酮糖1，5一二磷羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿沐核酮糖M J一二磷酸趁化酶/un氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法，提取、分离和纯化了pVFD33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解，构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱.同时，对实脸结果进行了分析讨论.     

纯化水稻叶绿体DNA的新方法

绿色植物叶绿体基因组结构和功能的探讨,是当前植物分子遗传学研究中的一个热点。七十年代中期以来,人们已对近四十种植物的叶绿体DNA(ctDNA)进行了深入的研究并逐渐形成了一套较为成熟的方法。然而,有关主要粮食作物水稻叶绿体基因组的研究,报道很少,其主要原因之一是水稻ctDNA的分离纯化较为困难。最近,我们将新鲜水稻嫩叶在缓冲液中直接匀浆,并调节细胞器悬浮液pH,改变细胞器表面带电状况的新方法,结合蔗糖梯度离心,成功地分离到纯净的水稻叶绿体,获得纯度较     

rbcL基因在水稻叶绿体DNA基因库克隆中的定位

由水稻品系珍汕９７不育系为材料制得的叶绿体ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）基因库中，筛选到屯含核酮糖１，５－二磷酸羧化酶／加氧酶大亚基基因（ｒｂｃＬ）的重组质粒，对该重组质粒用ＰｖｕⅡ，Ｐｓｔ１ｔ和ＳａｌＩ限制性内切酶进行了分析并制得了限制图谱，ｒｂｃＬ基因在该图谱上进行了定位。     

沼泽绿牛蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与活性检测

以沼泽绿牛蛙皮肤分泌液为样品,采用C18反相柱液相色谱,使用线性梯度洗脱方法,参照获得的RP-HPLC图谱,对图谱结果分析,按每峰一管收集洗脱液,得到分离纯化的活性多肽.用纸片法测定每管的抗菌活性,对抗菌活性最强的洗脱液进行氨基酸序列测定,查询数据库并进行序列比对,发现与牛蛙抗菌肽RANATUERIN2 、RANATUERIN3有序列相似性,推断其可能是沼泽绿牛蛙皮肤分泌液中的抗菌肽.     

一株鸭细小病毒的分离鉴定与ns基因序列分析

采用余姚某鸭场濒死鸭肝组织悬液，接种鸭胚尿囊腔增殖病毒，蔗糖梯度离心法纯化病毒，电镜观察见直径约20nm的球形病毒粒子，免疫琼脂扩散实验结果显示与鸭细小病毒（duck parvovirus，DPV）抗血清有明显沉淀线；SDS-PAGE电泳可见3条结构蛋白带，与DPV毒株一敛；参照GenBank DPVns基因序列979～1566bp设计引物，PCR扩增反应获得其目的片段．克隆到载体pMD18-T后测序，该序列与GenBank中的番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）以及巴比里鸭细小病毒（Barbarie duck parvovirus，BDPV）的ns基因序列同源性为98％．病鸭肝组织匀浆液雏鸭感染试验显示雏鸭发病症状及剖解病理变化明显，死亡率为75％．利用血清学实验与鸭肝炎Ⅰ型、禽流感和新城疫病毒感染举别．由此确定引起本次鸭场疫病的病原为DPV，命名为04NY株．     

水稻液泡膜H~＋－ATPase的分离纯化及生化性质研究

用差速离心和密度梯度离心的方法，分离水稻液泡膜微囊，测定膜微囊ＡＴＰａｓｅ活性．用５％的ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶膜后的上清液，经ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱层析纯化，得到ＡＴＰａｓｅ复合物．生化性质研究结果表明，纯化前后基本相似．酶活性需要Ｍｇ２＋，受Ｃｌ－激活，对叠氮化钠、钒酸盐和寡霉素不敏感，受硝酸盐、ＤＣＣＤ（质子通道抑制剂）抑制，泵质子产生的膜电位△可被质子通道的离子载体ＣＣＣＰ破坏．     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。     

超低频脉冲梯度磁场治疗肿瘤及其机理的探讨

报道了用超低频脉冲梯度磁场治疗肿瘤的实验研究以及对其机理的探讨 .将峰值强度为 0 .6～ 2 .0T,磁场梯度 10～ 10 0 T/ m,脉冲宽度 2 0～ 2 0 0 m s,重复频率 0 .16～ 1.34Hz的磁场作用于鼠 S- 180肉瘤 ,观察到磁场对肿瘤生长的抑制及促使肿瘤细胞的凋亡 .研究表明 ,磁场治癌的机理不是单一的 ,而是从多方面共同作用的结果 ,其中包括磁场减少对肿瘤的营养供应、破坏其代谢功能并影响癌细胞核 DNA复制等方面 ,而且磁场的作用具有选择性 ,因此用磁场治疗癌症是一种可行的方法     

湖北光敏感核不育水稻发育过程中叶绿体超微结构的变化

研究了不同光周期处理下湖北光敏感核不育水稻农垦５８Ｓ个体发育过程中，叶绿体超微结构的变化，结果表明：长日照处理前，农垦５８Ｓ与农垦５８品种的叶绿体结构无明显差异；叶绿体结构变化发生在长日照处理之后，此时，水稻发育处于第二次枝梗原基形成期，变化了的叶绿体有以下几种类型：①基质片层与基粒片层结构均存在，但排列分布紊乱，基粒的大小、数目有异，②缺乏基质片层，③完全缺乏类囊体膜结构，在叶绿体类囊体膜结构退化时，往往伴随着嗜锇颗粒数目的剧增；当叶绿体结构不完善时，线粒体也发生退化，如外形变化较大，外膜模糊，嗜锇颗粒的数目减少，细胞器基本物质电子密度降低．     

应用高浓度介质进行预处理试验时值得注意的问题

测定了多种高浓度介质在高压灭菌前后的渗透值,pH值变化状况及其时程。分析了不同介质预处理后多核糖体状况、可溶性蛋白凝胶电泳谱和花粉雄核发育状况的变化。结果表明:多核糖体状况的变化与介质在高压灭菌后的pH差异相关;可溶性蛋白电泳谱的变化与介质渗透值关系较密切,且可能与离子胁迫相关;而雄核发育则与pH值、高渗均有关而以pH值关系更为密切。从试验结果看,可认为:1.高渗介质预处理的起始影响,按照介质种类,可能包括渗进胁迫、pH胁迫、和离子胁迫。2.不同影响的作用位置可能各不相同,时程也可能有异。3.在高渗介质预处理试验设计中应注意介质种类和影响特点的选择,注意对照的设置;即使采用过滤灭菌也应事先做好基础测试工作。     

渐降低温胁迫对黄瓜幼苗叶绿体膜相关指标的影响

为了进一步说明模拟自然界温度渐降低温胁迫的冷害作用的机理,以黄瓜品种“津优1号”为试材,以直降低温胁迫（昼温/夜温=（10±0.5）℃/（5±0.5）℃）为对照CK,常温（昼温/夜温=（25±0.5）℃/（18±0.5）℃）为对照CK₁,研究渐降低温胁迫（即以1 ℃·h^-1的平均降温速度进行降温处理）对黄瓜幼苗叶绿体膜相关指标的影响.结果表明：（1）Ca²⁺ATPase和Mg²⁺ ATPase活性在低温胁迫过程中呈先上升后下降趋势,随着低温胁迫的进程,渐降低温胁迫下2种酶活性下降的幅度明显低于直降低温胁迫.（2）经过低温胁迫,冷害指数、叶绿体膜蛋白质量浓度和叶绿素质量浓度显著下降.（3）处理T的冷害指数、膜蛋白和叶绿素质量浓度、Ca²⁺ ATPase和Mg²⁺ ATPase活性均显著高于CK.总之,渐降低温胁迫可以减少叶绿体膜的损伤,增强抵御低温逆境胁迫的能力.     

千岛湖被子植物枝叶性状分化及其与种多度的关系

种间生态位分化是物种共存的重要原因,了解种间生态位分化特征对于推测物种多样性维持机制具有重要意义.植物的种间功能性状分化在一定程度上能够反映其生态位分化,进而导致植物在群落内的适合度差异.据此,本研究针对千岛湖地区75种常见木本被子植物,分析了8个与水分输导、资源获取和利用策略相关的功能性状分化,及其与物种多度的关系.主成分分析表明,种间功能性状的分化主要发生在比叶面积、叶绿素含量以及叶气孔密度上.8个性状中有5个,即叶绿素含量、叶片厚度、叶面积、比叶面积和最大树高具有一定程度的系统发育保守性(即Blombergs K的p0.05).功能性状间的相关性广泛存在,且在使用系统发育独立对比方法(phylogenetic independent contrast,PIC)控制系统发育的影响后,相关性大多仍然显著.单个性状以及所有性状的主成分1和主成分2与物种多度间均没有显著相关性.结果表明:千岛湖地区片段化次生马尾松林内木本被子植物的功能性状分化受系统发育和进化历史共同影响;且性状分化发生在主要的环境资源梯度(即光照和水分)上;但性状对处于演替过程中的片段化森林群落内的物种多度不一定会产生重要影响.     

重金属铜、锌、铅、镉对小形月牙藻生长及亚显微结构的影响

本文研究了重金属铜、锌、铅、镉对小形月牙藻(Selenastrum minutum )生长的影响, 以及小形月牙藻对重金属的吸收富集情况, 并着重研究了四种重金属对小形月牙藻的亚显微结构的影响.从电镜观察可见, 四种重金属对小形月牙藻的毒性症状首先表现在叶绿体, 其呈平行排列的、片状的类囊体受毒害后,变成指纹状排列、条索状排列、甚至不规则的波纹状;四种重金属对液泡的影响也很明显, 随着重金属浓度的增加, 原来的多数小液泡变成一个或几个大液泡;细胞壁变得结构松散, 重金属浓度高时, 外层呈剥落状.根据本实验结果, 四种重金属对小形月牙藻的毒性顺序是:Cd >Cu>Pb>Zn .本实验结果还表明, 小形月牙藻对重金属铜、锌、铅、镉都有一定的吸收富集能力, 尤其对铅和锌有更大的耐受力, 能够大量吸收水体中的铅和锌.