人表皮生长因子原核表达及活性鉴定

人表皮生长因子(hEGF)是由53氨基酸组成的小分子多肽,它通过与膜受体的相互作用调节多种类型的细胞增殖。为获得具有生物活性的基因工程产品hEGF,设计在hEGF基因5’-端插入功能序列与基因融合,经合成基因、双酶切连接,构建了重组原核表达载体pBV-F-hEGF,并导入大肠杆菌HB101菌株。工程菌在37℃LB培养基中培养至对数生长期,并在42℃温度条件下诱导表达蛋白F-hEGF。以5 000 r/min离心收集细胞,利用超声波破碎细胞,以10 000 r/min离心20 min收集包涵体沉淀。含有F-hEGF的包涵体溶解后,采用Ni-NTA柱纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE鉴定目的蛋白。利用免疫组化反应和MTT方法分析F-hEGF与其膜受体EGFR的特异性结合活性和细胞增殖活性。结果显示,融合蛋白F-hEGF得到高效表达,表达量在35%左右,纯化的蛋白浓度为3.1 mg/mL,F-hEGF与膜受体能发生特异性结合,具有明显的促细胞增殖活性。本研究构建了表达生物活性F-hEGF的工程菌,为hEGF进一步的临床和开发应用提供依据。     

孕妇尿液表皮生长因子的分离,纯化及活性检测

孕发尿液蛋白丙酮粉粗提液经Ｂｉｏ－ｇｅｌＰ－１０凝胶层析获得五个组分，经免疫点印渍分析后，证明其中组分Ⅲ的活性最高，该组分再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５凝胶层析，又得到Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ四个组，ｈＥＧＦ活性主要分布在组分Ａ中。本文建立了免疫点印渍方法并应用于ｈＥＦＧ的活性检测。     

表皮生长因子效应评价细胞模型的建立

为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。     

抗氧化活性肽的研究进展

研究表明,不少疾病的起因与自由基有关,而抗氧化活性肽可有效清除体内过剩的活性氧自由基,保护细胞和线粒体的正常结构和功能,在预防治疗自由基诱发的疾病和抗衰老方面有着广阔的应用前景。食品工业通过添加具有抗氧化活性的物质可以增加食品体系的稳定性。本文综述抗氧化活性肽的不同来源、活性检测方法、作用机理、应用前景及面临的一些问题,以期为后续的相关研究提供参考。     

肝再生中表皮生长因子（EGF）及其受体的作用

肝细胞在正常情况下很少分裂,但在肝损伤后会表现出强大的再生能力。肝细胞的生长和增殖受到众多因子的影响,其中表皮生长因子（Epidermal Growth Factor,EGF）是一种强有丝分裂原,它与受体EGFR结合后能诱导组织细胞的增殖、分化、成熟,是目前已知的能够促进肝脏再生的一个主生长因子。现就表皮生长因子对肝再生的作用做一综述。     

人表皮生长因子融合蛋白在大肠杆菌表达的研究

在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF)。根据大肠杆菌对密码的偏爱性,构建高效表达EGF融合蛋白的菌株,经离子交换层析和凝胶过滤层析两个步骤使产物得到纯化。融合蛋白表达产量为27%,EGF融合蛋白纯化产物纯度为95%以上,促3T3细胞增殖的活性测定为ED50为4.2ng/mL。在pET 3c:BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高,纯化路线简单,产量较高,适合产业化生产。     

花生肽的体外抗氧化活性研究

本文对花生肽的体外抗氧化活性进行了初步研究。在对DPPH自由基的清除能力测定中,随着浓度的增加,花生肽显示出越来越强的清除能力,并呈现良好的量效关系。在还原能力的实验中,花生肽的还原能力明显不如维生素C,但随着浓度的增加呈现一定的还原能力。抗脂质过氧化能力的测定研究表明,花生肽在0.2~6.4 mg/mL浓度范围内呈现较好的剂量依赖关系,对卵黄脂蛋白脂质过氧化具有较好的抑制作用。     

表皮生长因子对糖尿病大鼠角膜上皮损伤修复影响的研究

目的:探讨表皮生长因子对糖尿病大鼠角膜上皮损伤修复的影响。方法:将SD雄性大鼠28只随机分为正常未治疗组(6只)、正常治疗组(6只)、糖尿病未治疗组(8只)、糖尿病治疗组(8只)。采用链脲佐菌素(STZ)65mg/kg左下腹腔一次性注射制作糖尿病大鼠模型。4周后,将大鼠全麻后制作右眼角膜上皮损伤模型,损伤后0h,12h,18h,24h分别行角膜荧光素染色显示损伤的区域,眼前节分析系统照相并分析损伤区域的面积。结果:角膜上皮损伤修复速度糖尿病组比正常组慢,组间差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组的角膜上皮损伤修复速度比未治疗组快,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:糖尿病可使大鼠角膜上皮损伤修复延迟,但因角膜上皮修复较快,表皮生长因子促进糖尿病大鼠角膜上皮损伤修复的影响不明显。     

基因工程人表皮生长因子（rhEGF）单克隆抗体的制备与初步鉴定

以基因工程人表皮生长因子(rhEGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,将免疫的小鼠脾细胞与小鼠Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行融合,经多次筛选和再克隆化,获得3株能稳定分泌抗rhEGF单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株.对该3株杂交瘤细胞小鼠腹水进行了抗体效价测定,结果显示在1×10-6～2×10-7之间.对上述3种杂交瘤单抗(分别命名为:AE-2A4,AE-2G5和AE-3E11)进行了特异性、抗原决定簇及相对亲和力测定.结果表明,它们都具有抗rhEGF高特异性;并分别抗两个不同抗原决定簇;相对亲和力大小次序为:AE-3E11>AE-2A4>AE-2G5.Ig亚类鉴定结果显示:AE-2A4,AE-3E11同为IgG1亚类,而AE-2G5为IgG2b亚类.确定AE-2A4单克隆抗体可用于制备高纯rhEGF.     

表皮生长因子对猕猴胚胎角膜上皮组织增殖效应的研究

离体培养试验表明，小鼠颌下腺表此生长因子对离体培养猕猴胚胎眼角膜上皮组织具有显著促进细胞增殖和分化的效应。培养４ｄ的实验组角膜上皮的厚度，上皮细胞增殖层烽以及上皮组织中基底层细胞核与表层细胞核两者的比率均较正常猴胚角膜增长３倍。与此同时培养４ｄ的实验组角膜上皮厚度和上皮细胞的层数，都达到成年猴正常角膜上皮的结构水平。     

新生牛肝脏中肝细胞生长因子（cHGF）的分离纯化及性质研究

从新生牛肝脏分离纯化到一种具有刺激肝源性ＳＭＭＣ—７７２１人肝癌细胞和原代培养的人胎肝细胞ＤＮＡ合成的单一组分，命名为小牛肝细胞生长因子（ｃａｌｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｃＨＧＦ），测得分子量为３９．８ｋｄ，蒽酮法测得糖含量极少，部分纯化的ｃＨＧＦ在与胰岛素和表皮生长因子混合使用时活性有一定增加，对ＣＣｌ４处理的肝坏死大鼠有明显的促肝再生功能。     

具有补偿器的商功率因数感应电动机调速系统

本文论述了具有串联电容补偿器的感应电动机调压调速控制系统的结构原理,推导了串联电容补偿器的参数估算公式,给出了试验电动机和系统的开环,闭环特性曲线、功率因数曲线、效率曲线和实测波形.实验表明,本系统能大大改善感应电动机的运行性能和提高感应电动机的功率因数和效率,在整个功率输出范围内,功率因数高达0.94,效率高达0.92.具有串联电容补偿器的调压调速系统与未加补偿器系统相比较,其系统总效率约提高3%.     

高分子添加剂射流结构特性

针对实际钻井过程中洗井液内大都加入了高分子添加剂的特点,探索了高分子聚合物对射流结构特性的影响规律。用试验方法对淹没状态下高分子添加剂射流轴向动压力分布进行了研究。结果表明,在合适的浓度范围内,高分子添加剂可以降低流体在管路中和喷嘴处的能量损耗,提高射流在喷嘴出口处的速度和动压力,并使圆射流的等速核增长。高分子添加剂射流的动压力分布具有自模性,但在淹没条件下,添加剂射流的衰减速度比清水射流快,并存在一个最优添加剂浓度。破岩试验的结果表明,高分子添加剂能够提高射流的破岩能力     

高分子量尿激酶的放射免疫测定

本文介绍了高分子量尿激酶放射免疫分析方法的具体程序以及人尿中高分子量尿激酶的测量结果。标记采用Hunter等改进的氯胺T氧化法。碘化前,高分子量尿激酶用二异丙基氟磷酸失活,以避免生物机体中干扰物质带来的不良影响。失活的高分子量尿激酶与lmci~(125)Ⅰ反应2分钟,反应液全部上Sephadex G—50柱层析,经鉴定,标记率为35—40％。高分子量尿激酶放射免疫测量程序为:反应管中加入一定体积的缓冲液,30μl~(125)Ⅰ标记的高分子量尿激酶(约2×10~4cpm),标准品或待测样品,反应抗体。总体积0.3ml,摇匀,4℃保温24小时,然后力口入20μlSPA菌体试剂,混匀后于37℃保温0.5小时,3500rpm离心10分钟,测量沉淀放射性。用本法测定5例正常成人尿中高分子量尿激酶值为14.6±6.1iu/ml,灵敏度为0.8iu/ml尿。     

低分子糖的高效液相色谱分析

报道高效液相色谱分析低分子糖的方法 .选择HRC -NH2 柱 ( 150mm× 4 .6mm ) ,流动相为乙腈 :水 ( 75∶2 5,体积比 ) ,流速为 0 .8mL/min ,柱温为室温等条件 .应用该法分析了 50多个样品 ,结果满意     

非常态分子CH4在稀土La薄膜不同表面温度下的激活化学吸附

本用分子束改变平动能的方法，研究了非常态分子ＣＨ４在处于不同表面温度下的稀土Ｌａ薄膜上的激活化学吸附。实验结果表明，当非常态分子的平动能在１０．１－６４．０ｋＪ／ｍｏｌ之间变化时，只有能量大于５２．３ｋＪ／ｍｏｌ的分子才发生化学吸附，此值称为阈值。当非常态分子的平动能超过阈值时，初始粘着几率Ｓ０随平动能的增大而线性增加。当样品表面温度由５００Ｋ升至７００Ｋ时，虽然样品表面温度升高，但ＣＨ４的阈值     

肿瘤坏死因子(TNF)的分子结构和生物学活性

TNF最初被发现是因为它显示了抗癌活性,现已判定它是免疫细胞接受某些特定的刺激因子所产生的多功能细胞因子,它参与了炎症和免疫反应以及细胞生长或抑制的各种蛋白质因子中的一族,本文讨论了TNF的分子结构和生物学活性及两者之间的关系。