6-APA合成反应中固定化青霉素酰化酶载体及固定化研究进展

青霉素酰化酶 ( penicillin amidase E.C.3.5 .1 .1 1 ,简称 PA)能催化水解青霉素产生 6-氨基青霉烷酸 ( 6- aminopenicillanic acid,简称 6- APA)、水解扩环酸产生 7-氨基 - 3-脱乙酰氧基头孢烷酸 ( 7-aminodesacetoxycephalosporanic acid,简称 7- AD-CA) .该酶还能以 6- APA或 7- ADCA为母核 ,催化合成各种不同的半合成青霉素 (如氨基苄青霉素、羟氨苄青霉素等 )或头孢菌素 .由于半合成青霉素在效力与临床价值上优于青霉素 ,而青霉素又很容易通过发酵而大量生产 ,因此近几十年来 ,有关青霉素 G水解生产 6- APA的研究一直是一个…     

苯甲酰化展青霉素和青霉酸的高效液相色谱紫外吸收测定法

建立了一种快速、灵敏检测痕量展青霉素（ｐａｔｕｌｉｎ）和青霉酸（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｃａｃｉｄ）的新方法。对酞内酰胺苯甲酰氯（４（２－ｐｈｔｈａｌｉｎｕｄｙｌ）ｂｅｎｚｏｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ,简称ＰＩＢ－Ｃｌ］为柱前衍生试剂同展青霉素和青霉酸衍生反应,衍生物用ＯＤＳ柱分离,乙腈－水（４７：５３,Ｖ／Ｖ）作流动相,紫外检测器检测（λ＝３００ｎｍ）。以２倍信噪比计算最低检出限,展青霉素２．０ｐｍｏｌ,青霉酸１０ｐｍｏｌ。     

高效毛细管电泳法检测牛奶中的青霉素中间体以及3种青霉素类药物

建立了高效毛细管电泳(HPCE)同时检测牛奶中青霉素类抗生素中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)以及3种青霉素类药物青霉素钾(PEN)、氨苄青霉素(AMP)和阿莫西林(AMO)的方法。利用正交实验设计,对HPCE中的缓冲液离子浓度和pH值、分离电压、分离温度等分离条件进行了优化。结果表明: 在采用40 mmol/L磷酸二氢钾-20 mmol/L硼砂缓冲体系(pH 7.8)、分离电压为28 kV、分离温度为30 ℃的电泳条件下,4.5 min内可以实现上述4种青霉素类药物的快速分离检测。各组分在1.56～100 mg/L范围内有良好的线性,相关系数(r2)为0.9979～0.9998,加标回收率为84.91%～96.72%,相对标准偏差(RSDs)为1.11%～9.11% (n=6)。该方法简便、快速,可以应用于市售牛奶中4种青霉素类药物的快速检测。     

液相色谱-质谱联用法测定牛奶中14种青霉素及相应青霉噻唑酸残留量

利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定牛奶中的7种青霉素类抗生素以及7种相应的青霉噻唑酸。样品经乙腈沉淀蛋白,上清液N2吹干后,用水溶解,加入正己烷萃取除去脂肪;提取液经ACQUITY UPLCBEH C18柱分离,乙腈-乙酸铵+甲酸水溶液洗脱。14种物质峰分离良好,定量限范围在5～20μg/kg。在10～50ng/mL质量浓度范围内线性良好,相关系数均大于等于0.999,牛奶中的加标回收率在90%～98%。     

恒电流库仑分析法测定青霉素G钠盐含量

将青霉素G钠盐在pH4．6条件下水解成青霉氨基酸;以银电极为阳极,电解产生滴定剂Ag^＋,以Ag^＋滴定青霉氨基酸,采用电位法确定库仑滴定终点,由电解定律计算青霉素G钠盐含量。此法取代了汞量法,消除了汞污染,相对误差为0．184%,RSD（n=11）为0．030％。     

青霉噻唑酸表面分子印迹聚合物的制备及其吸附性能的考察

针对青霉素药物及乳制品中致敏杂质青霉噻唑酸(PEOA)的特异性分离分析,采用表面印迹聚合法,以青霉噻唑酸为模板分子,制备青霉噻唑酸分子印迹聚合物(PEOA-MIPs)。通过静态吸附、吸附动力学及选择性实验考察其吸附性能,结果显示PEOA-MIPs对青霉噻唑酸有特异的识别能力和快速的传质速率,饱和吸附量为122.78 mg/g,静态吸附和吸附速率分别符合Langmuir模型和准二级动力学方程,表明MIPs的吸附是以化学吸附为主的单分子层吸附。利用扫描电镜(SEM)、红外光谱(FT-IR)和热重分析(TGA)对聚合物进行表征,结果显示聚合物成功接枝在硅胶表面,并具有良好的热稳定性。PEOA-MIPs对PEOA具有特异的识别能力,可用作萃取介质,为建立快速分离分析致敏杂质青霉噻唑酸的方法提供基础。     

聚丙烯酸载体用于青霉素酰化酶的固定

以反应性单体丙烯酸和交联剂二乙烯基苯,以石油醚为致孔剂,通过悬浮聚合制备固定化酶的载体,并用于对青霉素酰化酶的固定。研究了丙烯酸与二乙烯基苯以不同摩尔比对青霉素酰化酶固定活性的影响,以及悬浮聚合时水油相比例的不同所合成的载体对固定化酶性能的影响。当丙烯酸和二乙烯基苯摩尔比为84.2:4时合成的载体固定青霉素酰化酶的酶活为2784U/g,而水油相比为2.75:1（丙烯酸和二乙烯基苯摩洋比为84.2:5）时固定青霉素酰化酶活达到2183U/g。固定青霉素酰化酶可使青霉素转化,得到半合成青霉素的中间体6-氨基青霉烷酸,由此可制成高效、广谱、服用方便的新青霉素。     

6-氨基青霉烷酸生产废水厌氧和深度处理实验研究

针对6-氨基青霉烷酸生产废水高污染物浓度,高硫酸根,难降解物质多的特点对废水经过硫酸根预处理,稀释3倍和6倍后,废水对厌氧污泥没有急毒性,厌氧污泥可以逐步适应废水环境。经过厌氧处理以及后续的Fenton深度处理,高浓度的6-氨基青霉烷酸生产废水COD_cr可由45450 mg/L 降到255 mg/L。出水COD_cr可达到污水三级排放标准。     

6-氨基青霉烷酸在弱碱性阴离子树脂IRA67上的吸附研究

用静态法研究了6-氨基青霉烷酸在弱碱性阴离子交换树脂IRA67上的吸附行为．在溶液pH为8．0，6-APA起始浓度介子3.00mg／m1-20．00mg／ml条件下，测定了25℃时IRA67树脂的静态交换动力学曲线、吸附等温线，并求得了IRA67树脂的平衡速率常数及吸附等温线方程．分别用Langmuir型和Frendlich型方程对IRA67树脂吸附等温线进行线性回归拟合，结果表明，6-APA在IRA67树脂上的吸附更符合Langmuir型吸附．     

青霉烷酸酯亚砜的2β-甲基选择性氯代--芳磺酰氯法

报道了芳磺酰氯对2α，2β-二甲基青霉烷酸酯的2β-甲基的高选择性氯代作用，讨论了它的应用和机理。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶和奶粉中的青霉素类药物及其主要酶解代谢产物

建立了液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶和奶粉中4种青霉素(青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林)及其4种 β-内酰胺酶酶解产物(青霉素G脱羧噻唑酸、青霉素V脱羧噻唑酸、阿莫西林脱羧噻唑酸、氨苄西林脱羧噻唑酸)残留的方法。样品采用乙腈-水提取,浓缩后经HLB柱净化,用液相色谱-串联质谱检测,外标法定量。结果表明,青霉素原药在4~200 μg/L,酶解产物在10~500 μg/L范围呈良好线性,线性相关系数均大于0.99;样品检出限为5~50 μg/kg(S/N≥3),定量限为8~100 μg/kg(S/N≥10);对牛奶和奶粉样品分别进行3个水平的加标回收实验(n=6),牛奶中青霉素及其酶解产物的平均回收率为83.48%~96.97%,相对标准偏差为3.86%~10.87%;奶粉中青霉素及其酶解产物的平均回收率为82.70%~95.14%,相对标准偏差为3.02%~9.81%。该方法稳定、可靠,适用于牛奶和奶粉中青霉素类药物及其酶解代谢产物的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定全血中青霉素G及其主要代谢产物

建立了同时检测全血中青霉素G及其2种主要代谢产物青霉噻唑酸和脱羧青霉噻唑酸的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析方法。血样经简单的蛋白沉淀提取后,目标化合物经BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm),以含0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱分离后,选用正离子电喷雾多反应监测(MRM)模式检测。方法检出限(信噪比(S/N)为3计)为0.1～2.0 ng/mL,定量限(S/N=10)为0.5～5.0 ng/mL。各被测物的线性相关系数均大于0.9974,准确度为92.3%～105.5%,日内精密度小于10%。考察了不同储存温度(18、4、-18、-80 ℃)下全血中青霉素G及其代谢物的稳定性,结果表明随着储存温度升高和时间的延长,青霉素G的质量浓度下降明显。应用建立的方法检测了给予20 mg/kg青霉素G后的大鼠血液样本,血液中青霉素G原形药物在给药后0.5 h即消除完全(低于检出限),而其代谢物的体内消除时限可延长至36 h。所建方法对司法鉴定的适用性得到了进一步扩大,同时对食品残留检测也具有一定的参考价值。     

高效液相色谱法测定皮炎宁酊中间苯二酚和水杨酸的含量

采用高效液相色谱法测定了皮炎宁酊中间苯二酚和水杨酸的含量。色谱柱为ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ柱,流动相为Ｖ（甲醇）∶Ｖ（水）∶Ｖ（乙酸）＝５０∶５０∶０．９。检测波长为２８５ｎｍ。在此条件下,间苯二酚和水杨酸可与其降解产物及杂质完全分开。     

高效液相色谱法测定杜仲叶中的绿原酸

 采用高效液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸的含量。所用色谱柱为Shim-packCLC-ODS柱,以巯嘌呤为内标,以甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比为25∶75;pH3.9)为流动相,UV检测波长为328nm。在上述色谱条件下,当绿原酸质量浓度为25～300mg/L时,以绿原酸对照品溶液与内标液的峰面积比为纵坐标(Y),绿原酸的质量浓度为横坐标(X),二者呈良好的线性关系,线性方程为Y=8.0368X+1.275×10-3,r=0.9999;平均回收率为99.89%,RSD=1.45%(n=6)。     

反相高效液相色谱法测定川芎饮片、实验大鼠血清和脑匀浆中的阿魏酸

 用反相高效液相色谱法测定了川芎饮片、实验大鼠血清和脑匀浆中的阿魏酸。分离柱为Nova Pak C18(3 9mmi.d .× 15 0mm) ,流动相为甲醇 水 乙酸 (体积比为 35∶6 5∶0 5 ) ,在 32 0nm波长下检测 ,用外标法定量。阿魏酸在 0 85mg/L～ 4 0 0mg/L范围内有良好的线性关系 ,线性相关系数为0 9990 4。阿魏酸的加标回收率为 95 %～ 10 2 %。     

软骨素酶ABC酶解高效液相法测定鱼翅中的透明质酸

 建立了一种测定鲨鱼翅中透明质酸的酶解 高效液相方法。在37℃,0 2mol/LTris HCl缓冲溶液中,鱼翅中的透明质酸被硫酸软骨素酶ABC酶解成透明质酸二糖。条件为:ZORBAX糖分析柱(4 6mmi d ×250mm,5μm)柱;紫外检测波长226nm;流动相为乙腈 0 5%磷酸(体积比为2∶98),流速1mL/min;进样量10μL。透明质酸二糖的线性范围为25g/L～600g/L。将此法应用到鱼翅的实际样品检测中,取得了良好的结果,透明质酸在鱼翅样品中的质量分数为0 86%～1 96%。     

5-氨基水杨酸锌及相关物质的高效液相色谱分析研究

对５－氨基水杨酸锌及相关物质５－氨基水杨酸、水杨酸、对氨基苯酚和５－苯偶氮基水杨酸的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）的分离条件进行了优化研究,结果表明,采用ＣＬＣ－ＯＤＳ（１５０ｍｍ×６．０ｍｍｉ．ｄ．,１０μｍ）作为分离柱,１％（Ｖ／Ｖ）ＨＡｃ－ＭｅＯＨ（４∶６）作为流动相,在流速为１ｍＬ／ｍｉｎ的情况下,上述５种物质在１０ｍｉｎ内可以达到基线分离,保留时间的日内和日间的变异系数分别小于２％和５％,在一定浓度范围内,浓度与峰面积的线性关系良好。     

Synthesis and characterization of some penicillins modified with germanium‐containing moieties

Penicillin derivatives, penicillin G ( 1 ), penicillin V ( 2 ) and ampicillin ( 3 ), were modified with germanium‐containing moieties and their structures were confirmed based on NMR spectroscopy and MALDI‐TOF. Their antibacterial ability was tested. None of these exhibited activity stronger than the parent penicillins. Copyright © 2004 John Wiley & Sons, Ltd.     

Routine Hptlc in Industrial Analysis: Process Control of Fermentations

Abstract

Quantitative HPTLC is a cost saving and reliable chromatographic routine method for the control of many fermentation processes, as for example the fermentation of penicillin V. The following substances are analyzed: lactose or sucrose, soya oil (against foaming), phenoxyacetic acid (precursor), penicillin V and p-hydroxypenicillin V, as final products. The derivatization after chromatography is performed with an automated spraying device, the measurement—perpendicularly to the direction of chromatography—and evaluation are computerized. The time requirements per sample range from 6 to 15 minutes, the pure analysis time per sample from 5 to 12 minutes. The break-down time of the complete HPTLC apparatus system is about 0,6% of the working time, all substances to be determined can be measured with one scanner, in every interval and sequence desired. The accuracy, expressed by the coefficients of variation (N = 8 – 9, on one plate), ranges from 1,6 to 3,0 %, for very low concentrations up to 6, 6%.