平颏海蛇毒腺cDNA表达文库的构建

以直接表达载体质粒pc DNA3为载体,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库,这是国内首个海蛇cDNA文库,通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析,发现了38个海蛇新基因序列,其中包括神经毒素基因,磷酸脂酶A2基因和半胱氨酸丰富毒蛋白基因共10个编码海蛇毒素蛋白的新基因。     

天山雪莲药材与雪莲注射液指纹图谱相关性研究

采用HPLC法,色谱柱,Ultimate XB-C18(4.6×250 mm,5μm),流动相,0.06%醋酸水-0.14%醋酸甲醇,梯度洗脱,柱温25℃,检测波长260 nm,建立天山雪莲与雪莲注射液的指纹图谱,并研究两者的指纹图谱相关性.结果显示:天山雪莲标示共有峰12个,10批样品相似度大于0.85;雪莲注射液标示共有峰17个,11批样品相似度大于0.9.雪莲注射液与天山雪莲有良好的相关性.建立的指纹图谱方法准确、重复性好,可作为雪莲注射液工艺与质量的控制标准之一.     

四倍体天山雪莲组培苗倍性分析比较

采用形态学,气孔,染色体分析方法,并与二倍体相比较,对四倍体天山雪莲组培苗倍性进行分析。有利于探索其在形态学,细胞水平,以及染色体等方面的变化,为其进一步开发利用奠定基础。     

人肝癌细胞移植瘤cDNA表达文库的构建及鉴定(简报)

0 引言 肝癌是一种发病隐蔽,病情恶化快的恶性肿瘤,严重危害人类的生命健康.全世界每年约有25万人死于肝癌,我国原发性肝癌发病率与死亡率均居世界首位,每年死亡人数达到10万人以上.     

天山雪莲叶绿体基因组密码子偏好性分析

分析天山雪莲叶绿体(cp)基因组密码子使用偏倚的一般模式和影响因素,为提高转基因植物外源基因的表达效率以及了解药用植物雪莲的基因功能研究提供了理论基础。利用生物信息学方法从雪莲叶绿体基因组中筛选出50条长度大于300 bp且以ATG为起始的蛋白编码基因为对象,找出导致密码子偏倚的影响因素。结果表明：第三位的GC平均含量为27.70%,有效密码子数(ENC)变化范围35.59～57.43之间;同义密码子相对使用度(RSCU)>1的密码子有30个,其中29个以A/U结尾;中性绘图显示GC₃和GC₁₂的相关系数为0.062,相关性不显著,回归曲线斜率为0.094 6;ENC-plot分析显示ENC比值位于-0.1～0.1区间的基因有37个,大部分基因沿抛物线轨迹分布,但也有几个低ENC的基因分布于曲线下方;奇偶偏好图(PR2-plot)分析显示,第3个碱基的密码子使用不平衡;对应分析结果表明,第1轴贡献率为17.61%,第2、3、4轴贡献率分别为11.59%、7.97%和5.8%,且第1轴与密码子适应指数(CAI)、密码子偏爱指数(CBI)呈...     

天山雪莲PsbO基因的克隆、原核表达及其烟草中的遗传转化

从已建立的天山雪莲抗寒cDNA文库中筛选克隆了雪莲的PsbO基因,发现该基因全长1145bp,编码329个氨基酸。通过构建原核表达载体在大肠杆菌中成功获得表达,同时构建了植物表达载体,转化烟草,并获得了部分转基因植株。     

中华卵索线虫cDNA文库的构建

中华卵索线虫(Ovomermis sinensis)是一种宝贵的昆虫天敌,宿主广泛,其寄生率即等于宿主的死亡率,生防潜力极大.鉴于cDNA文库在保存稀有物种基因资源与目的基因筛选及其功能研究等方面的优势,实验以中华卵索线虫为材料,采用SMART技术构建其cDNA文库.实验结果表明：滴度为1.16×109 cfu·mL－1,包含6.0×106个克隆.从原始文库中随机挑16个单菌落过夜培养,提取质粒,经XhoⅠ和 PstⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳结果表明插入片段大小主要集中在0.5～2.0 kb之间,文库重组率接近100%.文库的各项指标均达要求,可用于全长cDNA的筛选,为新基因的获得及其结构功能研究提供了可靠材料,也为今后的生物防治等研究奠定了基础.     

棉铃虫雌性成虫脂肪体cDNA文库的构建

用异硫氰酸胍 酚 氯仿 步法从棉铃虫雌性成虫脂肪体中提取总RNA ,经过Oligo(dT)纤维柱分离出mRNA .以mRNA为模板 ,Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶催化下合成单链cDNA(sscDNA) .然后在E .coliDNA聚合酶Ⅰ与RNaseH共同作用下 ,进一步合成双链cDNA(dscDNA) .平末端dscDNA与EcoRI/NotI接头连接 ,插入λgt11表达载体 ,经体外包装后转染Y10 90 r 宿主菌 ,构建成棉铃虫脂肪体cDNA文库 .该文库的滴度为 3.5× 10 5pfu/mL ,重组率为 10 0 % ,该文库适合于筛选低丰度mRNA的cDNA克隆 .     

海鲈头肾cDNA文库的构建

本文以海鲈头肾组织为材料,分离出mRNA,合成cDNA双链后,收集500-4000bpcDNA片段,构建了λZAP表达型cDNA文库。初级文库的滴度为7×105pfu,随机挑选噬菌斑的插入片断在500~2000bp之间,证明建立的文库中所包含的重组cDNA分子种类具有一定的完整性,可作为海鲈头肾基因的重要资源。     

新疆雪莲的组织培养及植株再生

本文通过研究培养基的种类、植物生长调节物质对新疆雪莲愈伤组织诱导、再生苗形成的影响,结果表明:在新疆雪莲愈伤组织诱导过程中,NAA和6-BA组合使用比NAA、6-BA、2,4-D单独使用更有利于愈伤组织的形成,MS培养基对新疆雪莲愈伤组织诱导和生长均最为有利;6,7-V培养基有利于诱导不定芽的形成;生长在1/2MS NAA0.5培养基上90%以上的不定芽可在28天内形成不定根.     

雪莲的抗疲劳抗缺氧效应以及对血红蛋白含量的影响

经动物实验证明，雪莲具有显著的抗疲劳（Ｐ＜０．０１）和抗缺氧效应（Ｐ＜Ｏ．０１），并能提高机体血红蛋白的含量（Ｐ＜Ｏ．０１）。     

全缘叶蓝刺头化学成分研究

研究了全缘叶蓝刺头(Echinops integrifolius Kar.et Kir.)根的化学成分.采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、半制备HPLC、制备薄层色谱及重结晶等技术手段进行分离纯化,通过理化性质、核磁共振波谱及质谱数据鉴定结构.结果从全缘叶蓝刺头根乙醇提取物的石油醚萃取部位及乙酸乙酯萃取部位分离得到7个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(1)、(+)-11α,13-二氢去氢木香内酯(2)、豆甾醇(3)、7-羟基香豆素(4)、东莨菪素(5)、对羟基苯甲酸(6)和茵芋苷(7),其中化合物6是首次从该植物中分离得到,化合物1、2、5和7是首次从蓝刺头属中分离得到.     

异翅独尾草蒽醌类成分的提取工艺

研究了超声波技术对异翅独尾草蒽醌类成分提取率的影响,并与传统方法作比较。结果表明,以70%乙醇为溶剂,采用超声波强化提取10min对总蒽醌的提取率与乙醇回流3次（每次30min）效果相当。乙醇浓度、提取温度对总蒽醌的提取有显著影响。最佳提取工艺为异翅独尾草用16倍量、90%乙醇在60℃下提取15min。     

全缘叶蓝刺头根部化学成分提取及抗氧化活性研究

用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、重结晶、高效液相色谱等分离手段分离全缘叶蓝刺头(Echinops integrifolius Kar.et Kir.)根的化学成分,根据理化性质和波谱数据鉴定其化学结构,采用DPPH自由基清除法测定化合物抗氧化活性.从全缘叶蓝刺头的根中分离15个化合物,鉴定了胡萝卜苷(1)、原儿茶酸(2)、原儿茶醛(3)、咖啡酸(4)、东莨菪苷(5)、breynioside A(6)、龙胆酸(7)、5,7,4'-三羟基-3,6-二甲氧基黄酮(8)、矢车菊黄素(9)等9个化合物.对其中部分化合物的DPPH自由基清除实验结果表明,化合物2、3、4、7表现出优于阳性对照Vc的自由基清除作用,IC_(50)值为2.177、0.844、0.800、1.434 mg/L,阳性对照Vc的IC_(50)值为3.629 mg/L.化合物3～7均为首次从该属中分离,化合物2、3、4、7具有良好的抗氧化活性.     

新疆天山雪莲根际冻土微生物富集培养的初步研究

利用纤维素、豆粕、魔芋粉、木聚糖等为底物对新疆天山雪莲根际冻土微生物进行了低温富集培养与分离。通过16S rDNA序列扩增初步鉴定了分离所得微生物,并构建系统发育树。结合选择性培养基进行了产纤维素酶、α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶等微生物的筛选。结果表明,新疆天山雪莲根际冻土中蕴含着丰富的产酶微生物,其中以假单孢菌属、黄杆菌属、根瘤菌属和不动杆菌属等属的微生物为优势菌群。分离得到的41株细菌中大部分都能产水解酶类。