限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度．测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１．用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３一丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基团均与该酶活性有关．     

猪肾胆绿素还原酶活性基团的修饰

报道采用专一性试剂ＤＴＮＢ、ＮＥＭ、磷酸吡哆醛以及２，３－丁二酮对胆绿素还原酶活性进行修饰．当这几种试剂分别与该酶反应后，酶活性大幅度降低；而当预先加入ＮＡＤＰＨ或胆绿素，酶活性明显受到保护．这些结果表明，半胱氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与该酶同ＮＡＤＰＨ和胆绿素结合、以及胆绿素还原成胆红素的反应有关，是该酶活性必需的基团     

东湖紫外光敏感磷与可酶解磷的分布及其相互关系

初步讨论了武汉东湖不同工作站中紫外光敏感磷(UVSP)与可酶解磷(PHP)的季节变化以及间隙水中二者和碱性磷酸酶活性(APA)的存在及其相互关系．间隙水中PHP与UVSP的存在，说明湖泊沉积物亦为间接有效的磷库．紫外光照射可显著提高间隙水中o-P的浓度，却明显抑制溶解态碱性磷酸酶(APase)的活性，这一结果未能支持UVSP释放o—P的过程仍遵从酶促机制的假说．     

酶促反应抑制动力学的微量热法研究——硫氰酸根漆酶催化氧化邻苯二胺的抑制

提出了一个适合米氏酶促反应各类可逆性抑制的热动力学方程：Ω０＝Ａ［Ｓ０］－１＋Ｂ根据方程中Ａ／Ｂ，Ｂ与Ｋｍ，Ωｍ的关系，给出了可逆竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制的热动力学判据以及表观米氏常数Ｋｍ，ａｐｐ、抑制常数Ｋｉ等酶促反应生化参数计算的热动力学公式，并实际应用于ＮａＳＣＮ对漆树漆酶催化氧化邻苯二胺抑制热动力学的微量热法测定，实验结果表明，此反应为非竞争性抑制，Ｋｍ，ａｐｐ为０．０９９１９±０．００７８２ｍｏｌ·Ｌ－１，Ｋｉ为０．０５２±０．００８ｍｏｌ·Ｌ－１．     

漆树漆酶的催化氧化作用 Ⅶ．稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用

以５，６－溴－２，３－二氰基氢醌为底物，在ｐＨ４．０～６．０条件下，用分光光度法考察了稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用，探讨了抑制特征、抑制位点和作用方式．结果证明，稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制属竞争性抑制过程．稀土金属离子的抑制作用是通过它与漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子的配位相互作用实现的；在这种作用下，ω－羧基阴离子对废物酚羟基的氢键或碱催化作用被削弱，使田羟基中的氢以Ｈ＋方式离去的速度受到阻碍．在ｐＨ４．５条件下，Ｌａ３＋离子与ω－羧基阴离子配合反应的解离常数（Ｋｉ）经测定为２．４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１．研究表明，漆酶分子中的酸性氨基酸残基对于酶－底物复合物的形成及进一步反应，尤其是酚羟基中氢的离去起着十分重要的作用．     

甲基营养细菌No1甲胺脱氢酶的纯化和性质研究

甲基营养细菌Ｎｏ１甲胺脱氢酶是以色氨酸－色氨酰醌为辅基的一种特殊氧化还原酶．粗酶液经纯化后，其比活力和收得率分别为５．１ｎｍｏｌ·ｇ－１和２８％．该酶的分子量为６７０００，等电点为８．３和８．５，组成它的大、小两个亚基的分子量分别为３７０００和１５０００．甲胺脱氢酶有较好的耐热性，它能催化包括一级甲胺和二胺在内的底物反应，与甲胺反应的Ｋｍ值为２６．６μｍｏｌ·Ｌ－１，最适ｐＨ为８．０．其酶催化反应可被Ｃｕ２＋抑制．该酶的吸收光谱是，在３２８ｎｍ和４２６ｎｍ呈现两个特征峰     

离子色谱法测定甘油磷酸钠注射液的成分及杂质

采用AS19离子色谱分析柱和KOH梯度淋洗,用抑制电导检测器对甘油磷酸钠注射液中主要成分以及氟离子、氯离子、磷酸根等杂质阴离子同时进行检测,被测物质甘油磷酸根的保留时间和峰面积的相对标准差分别小于0．339％和2．617％;被测物质的线性相关系数为0．9997～1．0000;加标回收率为90．5％～103％．采用该方法对实际样品的检测,结果令人满意．     

一株H5N1亚型禽流感毒的分离鉴定与基因组序列分析

对一株于2005年从浙江省分离获得的禽流感病毒株（A／Chicken／zhejiang／24／2005）进行了鉴定、全基因组序列测定、分析和致病性研究．经血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验证实，此分离病毒株为H5NI亚型．对该毒株的全基因组序列测定和分析显示，HA蛋白在HA1和HA2连接处，含有连续多碱性氨基酸模体（-RRKKR-）．进化分析结果表明，A／Chicken／zhejiang／24／2005（H5N1）7个基因来源于2004～2005年湖南地区流行株，但PB1基因来源于未知野禽毒株．动物实验结果显示，Ck／ZJ／24／05对鸡和鸭均具有高致病性，对小鼠无致病性，与HA的序列特征相符合．     

嗜碱细菌NTT33碱性β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究

报道了嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３产生的碱性β－甘露聚糖酶经纯化后，在ＰＡＧＥ电泳上呈现一条蛋白带，分子量为３．８９×１０７，等电点为３．０～４．０，酶反应最适ｐＨ为９．０～１０．０，最适作用温度为８０℃，稳定ｐＨ为６．０～９．０，稳定温度为６０℃以下．金属离子Ｃｕ２＋，Ｂａ２＋，Ｍｇ２＋，Ａｌ３＋，Ｃｏ２＋对该酶有一定的激活作用，而Ａｇ＋，Ｈｇ２＋，Ｍｎ２＋对该酶有明显抑制作用，经薄层层析鉴定，该酶水解槐豆胶后产生葡萄糖、甘露糖以及低聚糖．     

旱生植物梭梭苹果酸脱氢酶的纯化及其性质的研究

本文采用差速离心法、硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ纤维素和半琼脂糖柱层析方法，从旱生植物梭梭体内分离出纯化１０４倍的ＮＡＤ－——ＭＤＨ．该酶等电点为５．７，最适ｐＨ７．１，它对草酰乙酸和ＮＡＤＨ的表观Ｋｍ值分别为８０μＭ和９０μＭ，凝胶过滤法得分子量为６７０００Ｄ．ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳法得分子量为３３０００Ｄ，说明该酶是由两个相同亚基组成的二聚体蛋白．该酶的热稳定曲线表明，在５５℃以下时酶活性较稳定．     

不同起始密度对等鞭金藻和三角褐指藻种间生长的影响

通过共培养方法,研究了不同起始密度对等鞭金藻和三角褐指藻种间生长作用的影响．结果显示：不同起始密度对等鞭金藻和三角褐指藻种间生长竞争具有明显的影响．3种不同的接种比例下,三角褐指藻在与等鞭金藻的竞争中始终占优势,而且随着接种密度的增加,三角褐指藻在种间生长竞争中的优势更加明显．在接种比例为I：Q=4：1时,等鞭金藻对三角褐指藻的生长也会产生一定的抑制作用．     

黑曲霉脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

根据黑曲霉F044脂肪酶N-端氨基酸序列，运用生物信息学方法，找到与黑曲霉脂肪酶基因同源的候选基因A84689．根据该基因序列，设计引物直接经RT—PCR扩增得到黑曲霉脂肪酶全长基因anl．anl全长1044bp，含3个内含子，编码297个氨基酸（含信号肽27个氨基酸），与其他脂肪酶基因没有明显的同源性．将成熟脂肪酶基因连接到pPIC9K载体上得到重组表达质粒，转化P．pastoris GSll5．脂肪酶基因在P．pastoris GSll5中实现了分泌性表达．     

mtPDI外源基因表达体系的构建及耐热性

二硫键异构酶(PDI)是1种重要的蛋白折叠酶,它催化蛋白二硫键的形成和错误配对二硫键的重排,并有抑制错误折叠蛋白聚集的分子伴侣活性。为了研究嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(mtPDI)的功能,克隆了mtP-DI基因的ORF区,构建了融合基因原核表达载体pET-28a(+)-mtPDI。将质粒pET-28a     

桑叶提取物中槲皮素和山萘酚的含量测定

建立HPLC法测定桑叶提取物中水解槲皮素和山萘酚的含量．先用甲醇-盐酸混合液（甲醇终浓度50％,盐酸终浓度2．0mol·L^-1）水解桑叶提取物中的黄酮类成分成槲皮素和山萘酚,以HPLC法测定槲皮素和山萘酚含量．色谱柱为Diamonsil钻石C18柱,流动相为甲醇-0．2％磷酸（63：37,体积分数）,流速为1．0mL·min^-1,检测波长为370nm．结果表明槲皮素在0．84～26．8μg·mL^-1之间,山萘酚在0．44～14．2μg·mL^-1之间呈良好的线性关系,平均回收率分别为101．3％和99．5％．该测定方法准确、重复性好,可用于桑叶提取物中槲皮素和山萘酚的含量测定．     

离子交换固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量

建立了一种强阳离子固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量的分析方法。样品经乙腈提取和Oasis MCX 固相萃取柱净化后,以乙腈-0.05 %甲酸5 mmoL·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,经Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱梯度洗脱分离,在电喷雾正离子多反应监测模式下,用内标法分析泰妙菌素,用外标法分析沃尼妙林。结果显示,泰妙菌素和沃尼妙林在0.1～10.0 ng·mL^-1内具有良好的线性关系,相关系数r均大于0.999 9,检出限和定量限分别为0.03 和0.1 μg·kg^-1。在0.1,1.0,5.0和10.0 μg·kg^-1 4种添加水平下,加标回收率在87 %～114 %,相对标准偏差在0.87 %～6.50 %。对50条鲫鱼进行实际样品验证,发现在鲫鱼的各个组织中均有泰妙菌素和沃尼妙林残留,其中肾脏残留总量最高,为453.81 μg·kg^-1,肝脏次之,为236.97 μg·kg^-1。结果表明,所建方法能够满足对水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量的分析要求。     

离子交换固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量

建立了一种强阳离子固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量的分析方法。样品经乙腈提取和Oasis MCX 固相萃取柱净化后,以乙腈-0.05 %甲酸5 mmoL·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,经Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱梯度洗脱分离,在电喷雾正离子多反应监测模式下,用内标法分析泰妙菌素,用外标法分析沃尼妙林。结果显示,泰妙菌素和沃尼妙林在0.1～10.0 ng·mL^-1内具有良好的线性关系,相关系数r均大于0.999 9,检出限和定量限分别为0.03 和0.1 μg·kg^-1。在0.1,1.0,5.0和10.0 μg·kg^-1 4种添加水平下,加标回收率在87 %～114 %,相对标准偏差在0.87 %～6.50 %。对50条鲫鱼进行实际样品验证,发现在鲫鱼的各个组织中均有泰妙菌素和沃尼妙林残留,其中肾脏残留总量最高,为453.81 μg·kg^-1,肝脏次之,为236.97 μg·kg^-1。结果表明,所建方法能够满足对水产品中泰妙菌素和沃尼妙林残留量的分析要求。     

一种新的烟草钙调素结合蛋白的分离鉴定

用^35S标记的钙调素(^35S-CaM)作探针，从烟草cDNA文库中筛选到一个cDNA克隆pTCB40．DNA测序表明，分离的cDNA片段具有的开放阅读框编码233个氨基酸的多肽链．所编码钙调素结合蛋白TCB40(CaM—binding protein，CaMBP)与离子通道蛋白的同源性高达81％．凝胶覆盖实验结果证明其表达的蛋白具有依赖Ca^2 的钙调素结合活性。缺失分析表明钙调素结合位点于其蛋白的C端。Northern blot分析发现，TCB40在烟草茎，叶和花中均表达，但在叶中的表达量明显高于其他器官。     

膨化食品中三聚氰胺及其类似物的UPLC-Q-TOF-MS分析

建立了膨化食品中三聚氰胺及其类似物的超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用检测法.向样品中加入内标,用2.5%的甲酸提取,乙腈去除蛋白后直接上机分析.TOF采用V飞行模式,正离子模式下检测三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺,负离子模式下检测三聚氰酸.研究结果表明:4种化合物在HILIC色谱柱上分离良好,其中三聚氰胺、三聚氰酸在5~200 ng.mL-1质量浓度范围内线性良好;三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺在5~500 ng.mL-1质量浓度范围内呈良好的线性,方法绝对回收率达80.23%~96.52%,相对标准偏差小于6%,4种化合物的检测限均小于2ng.mL-1.该方法无需复杂的前处理过程,适合于食品中三聚氰胺及其类似化合物超标样品的快速筛查和低含量定量分析.     

呼吸道合胞病毒感染SPC-A1相关新基因zlg10con的电子克隆及分析和验证

通过mRNA差异显示法获得了与呼吸道合胞病毒感染SPC-A1细胞相关的52个表达序列标签(EST)片段，其中的一个EST片段g10-1在RSV感染后的细胞中高表达．采用生物信息学原理和方法对g10-1进行了鉴定后预测这是一个新基因片段，经电子克隆获得了761bp的延伸产物，并且通过了实验验证．该基因片段含有一个典型的54个氨基酸的ORF，命名为zlg10con，并对该序列进行了蛋白结构和功能的分析．     

硫醚萃取金(Ⅲ)及其反应热效应的研究

本文通过七种硫醚从盐酸介质中萃取金的行为及其影响因素，讨论了硫醚结构与萃取过程热力学函数的关系，用多种实验方法确定了被萃配合物的化学组成为AuC1,R,SR=(其中R1，与R2为相同或不同的烃基).萃取过程属配体取代反应.还考察了贵金属离子钯(Ⅱ)、铂(Ⅴ)对董取金(Ⅲ)的影响，表明本文所选用的试剂具有较高的选择性.