玉竹凝集素的氨基酸残基修饰与荧光光谱研究

玉竹凝集素（POL)的最大荧光发射峰位于328 nm处,比游离色氨酸(Trp)的最大荧光发射峰（348 nm）蓝移了近20 nm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境.化学修饰表明色氨酸和酪氨酸与其凝集活性无关.羧基的修饰导致活性降低60%,表明Asp/Glu是构成其凝血活性中心的必需氨基酸或是位于活性中心附近.二硫键的修饰使其活性丧失,表明二硫键是维持其活性中心的关键化学键.Lys残基的修饰凝血活性降低40%,表明该残基与其活性中心相关.组氨酸残基的专一性修饰导致凝血活性的完全丧失,表明组氨酸是构     

麦冬凝集素的氨基酸修饰和荧光光谱研究

通过对麦冬凝集素（OJL）进行特殊氨基酸的化学修饰，揭示了OJL所含的6个Trp残基只有1个位于蛋白表面，Trp、Tyr和Ser/Thr不是OJL凝集活性所必需的氨基酸，而Arg是维持其活性的必需基团.OJL在天然状态下荧光发射峰在328 nm处，Trp周围的极性较弱，处于疏水的微环境或Trp的吲哚环有特殊的构象.丙烯酰胺可以淬灭93.46%的色氨酸荧光，而CsCl和KI淬灭的程度较小，分别为41.25%和55.56%，证明Trp主要位于疏水环境.     

文昌鱼酸性磷酸酯酶色氨酸残基的修饰

从厦门文昌鱼(Branchiostonia belcheri Gary)分离纯化获得聚丙烯酰胺胶电泳单一蛋白区带的酸性磷酸酯酶(EC3.1,3.2)应用化学修饰方法,荧光以及紫外-可见光谱的变化,探讨Trp残基与酶活力的关系,被NBS修饰的Trp基团仅有一个Trp残基被氧化时,酶活力丧失90％,该Trp残基为ACPase表现活力所必需,而且优先被氧化、从光谱扫描(230～600nm)结果表明,经NBS修饰以后的酶构象发生变化,文昌鱼ACPase的Trp残基和酶分子上的铁离子等基团均为酶活力的必需基团,推测两者可能以配位结合,共同维持酶活力中心的构象。     

黄牛肝菌凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

对黄牛肝菌凝集素(Boletus fulvus lectin,BFL)进行氨基酸化学修饰,结果表明,Trp残基、Tyr残基及Ser/Thr残基的修饰都会对BFL的凝血活性产生影响,表明这些残基是BFL凝血活性所必需的,可能参与了其凝血活性中心的构成.而Arg残基修饰后,BFL的凝血活性未发生改变,表明Arg不是维持BFL凝血活性的必需基团.内源荧光光谱分析结果表明,BFL所发射的荧光是由Trp残基贡献的,且Trp残基在BFL分子中所处的微环境极性较弱,屏蔽于一定的构象当中.温度、pH值及变性剂对BFL内源荧光光谱的影响与基本理化性质的实验结果一致.氨基酸修饰对荧光光谱的影响表明,Trp残基修饰会引起BFL內源荧光光谱较大变动,而Tyr、Ser/Thr残基修饰对BFL內源荧光光谱影响不大.     

酪氨酸和色氨酸的导数荧光光谱的研究

本文研究了酪氨酸和色氨酸的二阶导数荧光光谱,拟订了酪氨酸和色氨酸同时测定的导数荧光法。酪氨酸以303.7nm为发射波长,在232nm(负峰)测定,线性范围0～4μg/mL;色氨酸以354nm为发射波长,在290nm(负峰)测定,线性范围0～2.8μg/mL。用于苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸人工混样中酪氨酸和色氨酸的测定,结果令人满意。     

荧光淬灭作用研究黄精凝集素Ⅱ微环境与构象的关系

淬灭剂CsCl、KI、丙烯酰胺对黄精凝集素Ⅱ(Polygonatum cyrtonemaHua.LectinⅡ,PCLⅡ)内源荧光淬灭研究表明它们对凝集素分子的淬灭属动态淬灭机制.综合3种淬灭剂对黄精凝集素Ⅱ的淬灭效果,黄精凝集素Ⅱ中Tyr和Trp对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度分别达到88.5%和74.07%,而对阴离子淬灭剂KI为55.5%和66.7%,对阳离子淬灭剂CsCl均只有25%.表明黄精凝集素Ⅱ发射荧光的氨基酸残基大部分是位于分子表面疏水袋中,少部分埋藏于分子内部疏水环境中,且所有发荧光氨基酸所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例大近一倍.     

玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)凝集素的荧光淬灭研究

百合科植物玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)的根状茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose柱离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤,得到经SDS-PAGE检测为14.2kD的单一蛋白条带的玉竹凝集素(Polygonatum odoratumlectin,简称POL).荧光淬灭剂丙烯酰胺、KI和CsCl对POL的内源荧光淬灭研究表明它们对凝集素分子荧光的淬灭过程属动态淬灭机制.其中玉竹凝集素中Trp残基对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度达到     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶色氨酸残基和巯基的化学修饰

用N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）和N-乙基丁二酰亚胺（NEM）分别对A．4041α-淀粉酶的主要组分α－Ⅲ的色氨酸（TrP）残基和巯基进行修饰．结果表明，50％的Trp残基被NBS修饰，可使酶活力完全丧失；Ca2+和底物可减少修饰酶的失活；加Ca2+或底物后修饰酶的荧光强度较对照修饰酶有显著提高．表明Trp是催化必需基团，并与结合底物和Ca2+有关．用过量NEM修饰巯基，酶活力改变不大，表明巯基不是酶的催化必需基因，并对酶的热稳定性基本无影响．     

荧光淬灭法研究黑豆凝集素Ⅰ微环境与构象的关系

用KI、CsCl和丙烯酰胺对黑豆（Glycine max var.）凝集素Ⅰ(GMLⅠ)进行内源荧光淬灭研究.天然黑豆凝集素Ⅰ在280 nm波长激发下显示λmax为339 nm的内源荧光发射光谱,表明凝集素荧光生色基团位于相对疏水的环境中;3种淬灭剂对GMLⅠ的荧光淬灭属于动态淬灭机制.GMLⅠ分子的生色基团Trp残基对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度为100%,而对阴离子淬灭剂KI的可接近程度为81.6%,对阳离子淬灭剂CsCl的可接近程度为52.8%,表明GMLⅠ中大部分Trp残基位于分子表面或近表面,只有小部分包埋于分子内部的疏水性环境中,并且Trp残基周围所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例高.     

一支箭凝集素构象与生物学活性的关系研究

采用荧光光谱研究了一支箭凝集素(OPA)在不同温度,pH值以及不同淬灭剂作用时,其活性和分子构象变化的关系,结果表明:OPA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,分子构象也无较大变化,但在pH 12时,其分子构象发生较大变化,活性也基本丧失.荧光淬灭剂丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA中Trp淬灭程度达100%,KI淬灭约62.5%的Trp荧光.表明OPA发射荧光的氨基酸残基大部分位于分子表面,少部分位于分子内部疏水环境中,且发荧光氨基酸所处微环境带电荷.     

黄刺蛾的防治技术研究

为了有效控制黄刺蛾(Cnidocampa flavescens Walker)的为害,用10%杀虫葳、40%氧化乐果、4.5%高效氯氰菊酯、25%灭幼脲和1.8%阿维菌素等5种药剂的不同浓度对黄刺蛾进行室内毒力测定和圃间防治试验,并对结果作方差分析。室内外试验结果表明:所选用的5种药剂和浓度对防治效果均有显著影响;林间防治以10%杀虫葳的4000倍液喷雾效果最佳,杀虫效果达90%以上。     

卤代烃对唑化合物荧光猝灭机理

测试了１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ５，５－二苯基－２，２－联唑（ＰＯＯＰ）、反－１，２－双［２－（５－苯基唑基）］乙烯（ＰＯＥＯＰ）、４，４－双［２－（５－苯基唑基）］－１，１－联苯（ＰＯＢＯＰ）在含不同浓度卤代烃的１，４－二氧六环溶液中的荧光量子产率，讨论了荧光猝灭机理，计算出ＣＨ３Ｉ、ＰｈＩ、ＰｈＢｒ对ＰＯＥＯＰ、ＰＯＯＰ、ＰＯＢＯＰ的荧光猝灭速率常数．研究发现，卤代烃分子越小，卤原子核电荷数越高，其猝灭荧光能力越强     

正常人和不育患者精子表面凝集素受体的研究

应用4种凝集素和经过FITC标记后分别与正常人或不育患者的精子相互作用,研究其凝集作用和膜上凝集素受体的分布.以铁蛋白或辣根过氧化物酶标记城口豆凝集素后再与精子反应,应用扫描电镜或透射电镜观察了正常人或不育患者精子表面膜受体的分布.     

荧光法研究氟罗沙星与牛血清白蛋白的相互作用

用荧光法研究了氟罗沙星对血清白蛋白的荧光猝灭现象,根据荧光猝灭双倒数图读物计算了氟罗沙星与牛血清白蛋白之间的结合常数,根据Foester能量传递原理计算出氟罗沙星在牛血清白蛋白上的结合位置,并根据热力学参数研究了氟罗沙星与牛血清白蛋白之间的作用力类型。     

魔芋葡甘露聚糖的化学改性及其应用性能的研究

采用醚化氧化工艺,以魔芋粉为原料合成了系列印花糊料 Ｍ_１和 Ｍ_２并且就其应用性能分别与意大利的 Ｉｎｄａｌｃａ ＰＡ－４０及海藻酸钠进行比较,其中Ｍ_１各项达到了Ｉｎｄａｌｌａ ＰＡ－４０的水平,Ｍ_２各项指标接近海藻酸钠．     

细胞多参数荧光测量中发射光谱重叠的消除

提出光谱比的概念,并从实验和理论上证明光谱比是波长的函数,利用光谱比可计算出发射光谱重叠所带来的测量误差,并加以消除．以ＴＦＰ（三氟拉嗪）和ＦＩＴＣ（异硫氰基荧光素）双标记细胞为例,具体给出了消除发射光谱重叠的测量修正式．     

阿昔洛韦与牛血清蛋白相互作用研究

目的研究了阿昔洛韦(ACV)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。方法在pH为7.4的Tris-HCl缓冲液中,发现阿昔洛韦在348 nm(λex=282 nm)对牛血清白蛋白的荧光有猝灭作用。并对阿昔洛韦对牛血清白蛋白荧光猝灭的机理进行了初步探讨。结果发现在弱酸性、中性及弱碱性条件下均表现为静态猝灭。利用荧光猝灭双倒数图计算了阿昔洛韦与牛血清白蛋白之间的表观结合常数为1.48×10~4、结合位点数为1,结合位置接近于色氨酸残基,牛血清白蛋白中色氨酸残基与阿昔洛韦分子间的距离为3.138 nm。结论根据热力学参数计算确定了阿昔洛韦与牛血清白蛋白之间的主要作用力类型为疏水作用力,同时,采用同步荧光技术考察了阿昔洛韦对牛血清白蛋白构象的影响。     

黄刺蛾的防治技术研究

为了有效控制黄刺蛾（ Cnidocampaflavescens Walker）的为害,用10％杀虫蒇、40％氧化乐果、4．5％高效氯氰菊酯、25％灭幼脲和1．8％阿维菌素等5种药剂的不同浓度对黄刺蛾进行室内毒力测定和圃间防治试验,并对结果作方差分析。室内外试验结果表明：所选用的5种药剂和浓度对防治效果均有显著影响;林问防治以10％杀虫葳的4000倍液喷雾效果最佳,杀虫效果达90％以上。     

无机离子对铁－芳烃配合物荧光强度的影响

无机阴离子使环戊二烯异丙苯铁六氟磷酸盐（Ｉｒｇａｃｕｒｅ２６１）的荧光增强，而Ｆｅ（Ⅲ），ＣＤ（Ⅱ），Ｎｉ（Ⅱ）等离子使之荧光强度减弱．讨论了ｐＨ值及温度对荧光强度的影响以及无机离子使环戊二烯异丙苯铁六氟磷酸盐荧光增强的机制。     

牛血清白蛋白对牛红细胞SOD的化学修饰

应用戊二醛交联法研究了牛血甭白蛋白对牛红细胞ＳＯＤ的化学修饰，修饰酶活力回收率为５１．２％，氨基修饰率为３３．１％，ＳＯＤ经牛血清白蛋白修饰后提高了耐热、耐酸碱稳定性，并保持良好贮藏稳定性。