阴离子交换分离－脉冲安培检测分析糖类化合物的进展

简述了糖的主要生物学作用及测定糖的主要方法，重点讨论了近年来建立起来的高效阴离子交换色谱－脉冲安培检测（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）技术。对此技术的基本理论、应用现状及优缺点进行了较为详细的叙述。     

阴离子交换分离－脉冲安培检测分析糖类化合物的进展

 简述了糖的主要生物学作用及测定糖的主要方法，重点讨论了近年来建立起来的高效阴离子交换色谱－脉冲安培检测（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）技术。对此技术的基本理论、应用现状及优缺点进行了较为详细的叙述。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定牛乳及制品中的唾液酸

建立了高效阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法检测常见唾液酸N-乙酰神经氨酸(Neu5AC)和N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)的方法,对影响分离和检测的条件进行了优化。以NaOH和NaAc为淋洗液,在CarboPac PA20阴离子交换柱上梯度分离,在30℃柱温,0.5 mL/min的流速下,20 min内可完成两种唾液酸的分析。使用脉冲安培检测法测定Neu5AC和Neu5Gc的线性范围为5~500μg/L;检出限为3.0和1.8μg/L(25.0μL进样,以3倍信噪比计算检出限)。将该方法用于15个牛乳及制品中Neu5AC和Neu5Gc的测定,两种唾液酸的标准加入回收率为88%~115%。方法具有灵敏、简便和环境友好的特点,样品前处理方法简单,方法适用性好。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法定量测定低聚木糖样品中的低聚木糖

建立了低聚木糖样品中的木二糖至木六糖等低聚木糖的高效阴离子交换色谱定量测定方法,并根据低聚木糖的聚合度与色谱保留时间的线性关系,对木七糖和木八糖的保留时间进行预测。采用CarboPacTM PA200阴离子交换柱(3 mm×250 mm),以醋酸钠和氢氧化钠为淋洗液进行二元梯度洗脱,脉冲安培法进行检测。结果表明,木二糖至木六糖在0.804～8.607 mg/L质量浓度范围内的线性关系良好,检出限为0.064～0.111 mg/L,定量限为0.214～0.371 mg/L。将该方法用于低聚木糖产品的检测,3个添加水平的加标回收率为84.29%～118.19%,相对标准偏差(n=3)为0.44%～14.87%。结果表明该方法适用于低聚木糖产品中有效成分的快速、高效分离和定量测定。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定乳粉中的低聚果糖

建立了测定乳粉中低聚果糖的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)方法。样品经50%(v/v)乙醇水溶液提取,On Guard RP柱除脂,CarboPac PA200阴离子交换色谱柱(250 mm×3 mm)分离。采用水、0.2 mol/L NaOH溶液和0.4 mol/L NaAc溶液三元梯度淋洗,流速为0.4 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为25 μL,脉冲安培检测器检测。蔗果三糖、四糖、五糖在0.05~10 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r²)> 0.9993;定量限分别为0.02、0.005和0.02 mg/L。在0.5、1.0、5.0 mg/L添加水平下,蔗果三糖、四糖、五糖的平均回收率为86.0%~114.0%。该方法处理简单、结果准确、灵敏度高,适用于乳粉中低聚果糖的测定。     

阴离子交换色谱-积分脉冲安培法测定鱼粉和玉米粉水解液中氨基酸

将高效阴离子交换色谱．积分脉冲安培直接检测法应用于鱼粉和玉米粉水解液中的氨基酸的分析测定。该方法使用Dionex AminoPac PA10阴离子交换柱为分析柱，控制柱温为35℃，以NaOH和NaAc的强碱性溶液为淋洗液，在合适的梯度条件下，可以实现对17种常见氨基酸的高效分离。在强碱性条件下，获得良好分离的各个氨基酸可在配有金工作电极的电化学检测器上以积分脉冲安培法获得高灵敏度的检测。在优化的测定条件下，该方法对这17种氨基酸的检出限在0．21—3．38pmol之间；峰面积校正曲线的线性范围为2—3个数量级；5次平行测定的峰面积的相对标准偏差RSD在0．32％—4．7％之间。该方法应用于玉米粉和鱼粉水解液中氨基酸含量的测定，结果良好。对玉米粉和鱼粉水解液标准加入的回收率分别在81．9％—108．0％和90．0％～108．0％之间。     

高效阴离子交换-脉冲安培检测同时分析单糖和糖醛酸

建立了高效阴离子交换-脉冲安培检测(HPAE-PAD)同时分离测定8种单糖和2种糖醛酸的分析方法。以CarboPacPA20阴离子交换柱为分离柱,以2mmol/LNaOH溶液将8种单糖从分离柱上洗脱,而后用NaAc(50~200mmol/L)梯度淋洗2种糖醛酸,淋洗液流速为0.5mL/min,总分析时间为30min。在优化的分离测定条件下,8种单糖和2种糖醛酸的检出限为2.5~14.4μg/L(进样体积25μL,峰面积定量)。5mg/L的10种化合物的混合标准溶液连续7次进样,峰面积的相对标准偏差为0.3%~1.5%。用所建立的方法测定了多糖水解液和木材半纤维素水解液中的单糖和糖醛酸含量。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法分析啤酒和麦汁中的糖

建立了高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)同时测定单糖、二糖和多种低聚糖的方法。采用水、0.25 mmol/L NaOH溶液和1 mol/L NaAc溶液三元梯度淋洗,在CarboPac PA-100色谱柱上,11种糖在40 min内达到良好分离;采用积分脉冲安培检测方法,无需对样品进行复杂的前处理或衍生反应便可直接检测。11种糖的检出限(S/N=3)在13～88 pg范围内。将该方法用于啤酒和麦汁样品中单糖、二糖及低聚糖的分析取得了很好的结果,样品中的加标回收率为81%～107%。     

糖的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法分析

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法是新近发展的一种分析糖的有效方法。本文讨论了糖的高效阴离子交换色谱分离和脉冲安培法检测的原理,色谱条件的选择,包括分离糖的固定相、流动相以及检测糖的脉冲电位波形,并对方法的应用进行了较为详细的叙述。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测小鼠尿液中的甘露醇、单糖和乳果糖

采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)建立了小鼠尿液中甘露醇、单糖(包括半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖)和乳果糖的分析方法。样品经离心沉淀除去蛋白并过分子膜,以CarboPacTM PA1阴离子交换柱为分离柱,采用NaOH梯度淋洗,脉冲安培四电位检测。结果表明,甘露醇、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、果糖和乳果糖在0.1～5.0 mg/L内线性良好,线性相关系数r2为0.988～0.999,样品加标回收率为95.5%～104.2%,检出限为0.0013～0.0048 mg/L。此法准确、快速、简便,能同时对6种糖类化合物进行分析,可以跟踪检测整个糖类代谢过程中甘露醇、单糖和乳果糖之间的代谢关系。     

离子色谱-积分脉冲安培法测定肉类产品中鹅肌肽、高肌肽及肌肽

建立了一种离子色谱-积分脉冲安培（IC-IPAD）同时测定肉类样品中鹅肌肽、高肌肽及肌肽的分析方法。方法采用高效阴离子交换色谱柱AminoPac PA10（250 mm×2 mm）分离,以100 mmol/L NaOH为淋洗液,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃。结果表明,3种目标化合物在15 min内可实现完全分离,且17种氨基酸对3种目标化合物不存在干扰。在最佳色谱条件下,鹅肌肽、高肌肽及肌肽在0.05~5.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,线性相关系数（r）>0.99。3种目标化合物的检出限和定量限分别为8.9~22.1 μg/L和29.6~73.6 μg/L。对鸭胸及鹅胸样品进行分析,加标回收率为92.4%~104.5%。该方法简单方便,无需衍生化,灵敏度高,可用于肉类产品中相关营养成分的测定。     

Determination of zidovudine using anion exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection

A rapid and practical method for direct detection of zidovudine in high performance anion exchange chromatography(HPAEC) has been developed with integrated pulsed amperometric detection(IPAD).Dionex AS 18(250 mm×2 mm) and AG 18 (50 mm x 2 mm) columns and 11 mmol/L NaOH solution were used for separation.Multi-step potential waveform parameters were optimized to maximize the signal-to-noise ratio(S/N).Utilizing an optimized waveform,the repeatability(intra-day) precision and intermediate(inter-day) precision are obtained with relative standard deviation(RSD) of 1.88,2.27,respectively.The limit of quantification(LOQ) and limit of detection(LOD) were found to be 9.70,3.0 ng/mL,respectively,with correlation coefficients of 0.9992 over concentration range 0.01-10μg/mL.The present method was successfully applied to the determination of zidovudine in human plasma.The recoveries of plasma sample spiked by 0.7μg/mL,2.7μg/mL obtained were 95.3-101.5%, with relative standard deviation(RSD) of 2.54%,2.21%,respectively.     

Determination of neomycin in water samples by high performance anion chromatography with pulsed amperometric detection

A simple, fast and reliable method, using high performance anion chromatography with pulsed amperometric detection, had been developed for the analysis of neomycin in water samples. The elution and separation were carried out with an isocratic mobile phase, containing 10 mmol/L NaOH. The influence of the concentration and pH of the mobile phase on the separation and detection was investigated. A quadruple-potential waveform used for the detection was optimized. The detection limit of neomycin was down to 0.027μg/mL. The linearity of neomycin calibration curve ranged from 0.050 to 0.505μg/mL with correlation coefficient of 0.9997. R.S.D. (n = 11) was 4.0%.     

Determination of glycuronic acids by high-performance anion chromatography with pulsed amperometric detection

Summary Acid hydrolysis (0.25M H₂SO₄) coupled with enzyme catalysis (pectolyase and β-D-glucuronidase) were employed to extract galacturonic and glucuronic acids from microbial polysaccharides, plant residues, animal wastes, sewage sludge and soil. The glycuronic acids were separated by high-performance anion chromatography (HPAC) on a strong anion-exchange column using 0.1M sodium hydroxide with 0.25M sodium acetate as the mobile phase and determined by pulsed amperometric detection (PAD). HPAC-PAD was found to be superior to high-performance liquid chromatography with ultra-violet (UV) detection in terms of resolution and sensitivity of glycuronic acids. HPAC-PAD was not subject to interferences present with low UV detection (210 nm) and was highly selective for glycuronic acids. Enzymatic hydrolysis after treatment with mild acid (0.25M H₂SO₄) released galacturonic acids from orange peel and pectin, while glucuronic acid was released from Acacia powder. Large amounts of glycuronic acids were also extracted from plant materials. Low levels of uronic acids were detected in poultry manure, sewage sludge and organic-amended soils.     

离子色谱-脉冲安培法测定芦荟多糖中7种单糖的含量

采用水提醇沉法提取芦荟鲜叶中的多糖，经三氟乙酸水解，利用Dionex CarboPac PA10高效阴离子色谱柱分离，氢氧化钠梯度淋洗，积分脉冲安培检测，建立了芦荟多糖中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖7种常见单糖的测定方法。结果表明：7种单糖在线性范围内的相关系数（R²）均高于0.997，检出限为0.007~0.024 mg/L，加标回收率为97.5%~102.5%，相对标准偏差（RSD）为0.1%~4.8%。该法简单、快速、灵敏、准确，可用于芦荟多糖中单糖含量的测定和多糖组成的研究。     

高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法同时测定黄酒中的单糖和低聚糖及其指纹图谱的构建

建立了黄酒中葡萄糖、果糖、异麦芽糖、异麦芽三糖、麦芽糖、潘糖、麦芽三糖共7种糖类的高效阴离子交换色谱分离-积分脉冲安培检测的方法。以氢氧化钠和醋酸钠为淋洗液进行梯度洗脱,CarboPac^TM10阴离子交换柱进行分离。该方法可在26 min内实现黄酒中7种糖类的定量分析,在0.5~50 mg/L浓度范围内线性关系良好,样品定量限为0.1 g/L,加标回收率为76.5%~108.4%,精密度(RSD)为3.02%~8.23%。将该法用于不同厂家不同批次的绍兴加饭酒中各种糖类含量的检测,基于所得的检测结果,利用中位数法构建了标准指纹图谱,并采用夹角余弦法评价了各个样品与标准指纹图谱之间的相似度。结果初步显示,不同厂家加饭酒之间的相似度差别较大,该法可作为区别不同厂家酒的依据之一。     

梯度洗脱优化-离子色谱-脉冲安培法分析婴幼儿配方乳粉中的糖和糖醇

建立了梯度洗脱优化-离子色谱-脉冲安培检测技术分析婴幼儿配方乳粉中麦芽糖醇、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖6种与代谢疾病紧密相关的糖和糖醇的方法。该方法对样品的前处理、色谱柱的选择、淋洗液的梯度等色谱条件进行了优化,重点研究了淋洗液梯度对各组分分离效果的影响。将梯度洗脱程序分解为弱保留组分分离、乳糖分离、基质消除、系统平衡4个子程序,并分别对其进行了条件优化,实现了6种组分的完全分离,并有效解决了弱保留组分色谱峰易重叠、乳糖色谱峰易拖尾等现象。6种组分的线性范围为0.5~100 mg/L,相关系数（r）>0.99,方法的检出限（S/N=3）为0.06~0.40 mg/L。该方法具有分离度好、灵敏度高等优点,可满足例行分析的要求,同时也为淋洗液的梯度优化提供了可借鉴的方法。     

固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法检测人体尿液中的异黄蝶呤

建立了固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法(SPE-HPAEC-IPAD)测定人体尿液中异黄蝶呤的分析方法。尿液经ENVI-18与732型阳离子交换柱串联萃取后,除去了大量干扰物质。采用IonPac AS21分析柱(250 mm×2 mm),以0.025 mol/L NaOH溶液为淋洗液,流速为0.40 mL/min,在优化的安培检测波形条件下,异黄蝶呤的质量浓度在0.005～0.200 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.998 4,检出限为0.003 mg/L。健康人及癌症病人尿液在2 mg/L和5 mg/L两个添加水平的平均回收率在95.4%～96.8%之间,相对标准偏差小于5%。此方法环保、快速、准确,可用于健康人与癌症病人尿液中异黄蝶呤的测定。