磁性高分子微球固定化中性蛋白酶的研究

以表面带羟基的磁性高分子微球为载体，对位苯醌活化后，通过共价结合修饰中性蛋白酶，得到比活性为１０００Ｕ／ｇ的磁性固定化酶。偶联蛋白量２０～３０ｍｇ／ｇ载体，固定化酶活性保持达４０％，自由酶和固定化酶相比，最适温度从５０℃变到５０～６０℃，最适ｐＨ从７．５变到６．５，Ｋｍ从０．０５４％变到０．０８８％酪蛋白溶液，ｐＨ稳定性、热稳定性、贮存稳定性都有较大提高．     

磁性壳聚糖微球用于酶的固定化研究：Ⅲ磁性壳聚糖微球的活化及其对脲酶的固化研究

以环氧氯丙烷活化的磁性壳聚糖微球作为载体、对脲酶进行固定化研究,结果表明,在25℃时,活化磁性壳聚糖微球对脲酶的固定化在2h时就达到了最大值,固定化酶和自由酶的最适温度都在65℃左右,自由酶和固定化酶的米氏常数Km值分别为0．042mol/L和0．008mol/L,固定化酶的Km降低了5倍。     

高分子对酶,抗体DNA的修饰,固定化及其生物医学应用

为发展适于生物医用的生物功能高分子材料，本实验室近年来研究了可溶性高分子对Ｌ－天冬酰胺酶的修饰，纳米磁性高分子微粒对酶或抗体的固定化，亚微米高分子微球固定化碱性磷酸酶及其在ＤＮＡ检测中的应用，高分子微球固定化酶的合成与性能，酶在导电高分子膜上的固定化及生物传感器制备等，本文对此进行简要总结。     

一种吸附荧光素的生物素化聚苯乙烯微球的制备

合成的聚苯乙烯乳胶微球经氯甲基化和胺化后，在碱性条件下用生物素－ε－氨基己酸－Ｎ－羟基琥珀酰亚胺酯生物素化，制备了生物素化微球。制备的微球对荧光素钠具有良好的吸附能力。     

微球载体固定化碱性磷酸酶的底物／产物吸附现象

微球载体固定化碱性磷酸酶的底物／产物吸附现象史国利，马建标，何炳林（南开大学高分子化学研究所，天津，３０００７１）关键词碱性磷酸酶，固定化，底物，产物，吸附在酶固定化研究中载体对底物和产物的吸附会造成载体内部和载体周围底物和产物的浓度不均一［１］，从...     

磁性壳聚糖微球用于酶的固定化研究Ⅱ磁性壳聚糖微球对脲酶的吸附及其酶学性质的研究

本文用磁性壳聚糖作为载体用吸附法对脲酶进行固定化研究。结果表明,磁性壳聚糖对脲酶的固载量与磁性壳聚糖微球的粒径、交联度及酶溶液的离子强度成反比;固定化脲酶和自由酶的最适温度分别为80℃和70℃,固定化脲的最适合pH值变化不大,固定化脲酶和自由酶的米氏常数km分别为0.00546mol/L和0.19mol/L。     

α,ω—二羧基聚乙二醇磁性毫微粒固定化碱性蛋白酶的研究

本文用共沉淀法制备了平均直径为３８４纳米的α，ω－二羧基聚乙二醇磁性毫微粒，碱性蛋白酶通过吸附交联法被固定于磁性毫微粒，研究了制备研究中的吸附时间，给酶量，戊二醛浓度，ｐＨ和离子强度对磁性固定化酶活力及酶固定化率的影响。比较了碱性蛋白酶磁性固定化酶与自由酶的酶学性质，磁性固定化酶的最适温度没有改变，但热稳定性显著使高；磁性固定化酶的最适ｐＨ向酸性方向移动了１．０个ｐＨ单位。     

高分子对酶、抗体、DNA的修饰、固定化及其生物医学应用

为发展适于生物医用的生物功能高分子材料,本实验室近年来研究了可溶性高分子对L-天冬酰胺酶的修饰、纳米磁性高分子微粒对酶或抗体的固定化、亚微米高分子微球固定化碱性磷酸酶及其在DNA检测中的应用、高分子微球固定化酶的合成与性能、酶在导电高分子膜上的固定化及生物传感器制备等. 本文对此进行简要总结.     

自组装磁性聚苯乙烯微球固定化木瓜蛋白酶

通过逐层自组装（Layer-By-Layer self-assembly）的方式在自制的经过磺化的聚苯乙烯微球上连接高分子电解质和磁性物质制备了磁性微球,并用此磁性微球固定化木瓜蛋白酶。研究了固定化酶的最优工艺条件（固定化率最高）为：0.5g液态分散磁球(固含量为7.9%),温度30℃,给酶量15mg,pH值为6.0,固定化时间1.0h,此时可达非常高的固定化率93.0%。并且研究了固定化酶的性质：最佳使用温度为50℃,最佳使用pH值8.0,使用3次或80℃保存1.5~2.0h活性大约降为一半。     

聚苯乙烯阴离子交换树脂固定α—淀粉酶的研究（Ⅱ）

用聚苯乙烯阴离子交换树脂作载体，采用吸附法将ａ一淀粉酶固定化，研究了固定化条件和固定化酶的性能。固定化条件为：酶浓度１０ｍｇ／ｍｌ，固定化ｐＨ６．８，吸附时间１６ｈ，吸附温度６℃。固定化酶的ｐＨ稳定性、热稳定性、贮存稳定性都有一定的提高。最适作用温度及ＰＨ较自由酶为高，Ｋｍ值为自由酶的１．６倍。同时也进行了固定化酶的操作稳定性研究。     

葡萄糖异构酶的固定化及其性质研究

用分子沉积法，在多孔三甲胺基聚苯乙烯载体上成功地固定化了双层葡萄糖异构酶。结果表明，这种新固定化酶方法能使单位重量的因素化酶活力及蛋白载量成倍增加，活力达到１２００ＩＵ／ｇ湿胶，与吸附法相比，酶活力提高１倍，其半衰期与吸附法相比则基本相同，为４５ｄ，还确定了最佳固体化条件并测定了固定化酶的性质，固定化酶的最适反应温度比液相酶提高１５℃，而最适ｐＨ值则没有改变，Ｋｍ值与液相酶的相比有一定程度的增加，     

α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒固定化碱性蛋白酶的研究

本文用共沉淀法制备了平均直径为３８４纳米的α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒．碱性蛋白酶通过吸附交联法被固定于磁性毫微粒．研究了制备过程中的吸附时间、给酶量、戊二醛浓度、ｐＨ和离子强度对磁性固定化酶活力及酶固定化率的影响．比较了磁性蛋白酶磁性固定化酶与自由酶的酶学性质，磁性固定化酶的最适温度有改变，但热稳定性显著提高；磁性固定化酶的最适ｐＨ向酸性方向移动了１．０个ＰＨ单位。     

磁性壳聚糖微球用于酶的固定化研究*Ⅲ磁性壳聚糖微球的活化及其对脲酶的固定化研究

以环氧氯丙烷活化的磁性壳聚糖微球作为载体,对脲酶进行固定化研究。结果表明, 在25℃时, 活化磁性壳聚糖微球对脲酶的固定化在2h时就达到了最大值,固定化酶和自由酶的最适温度都在65℃左右,自由酶和固定化酶的米氏常数Km值分别为0.042mol/L和0.008mol/L,固定化酶的Km降低了5倍。     

含氨基和环氧基双功能基的聚合物刷磁性微球的制备及对青霉素G酰化酶的固定化

在内部分散超顺磁性Fe3O4纳米粒子的二乙烯苯交联聚丙烯酸微球表面引入原子转移自由基聚合(ATRP)引发剂,引发聚合向微球表面分别引入P(GMMA-r-DMAEMA-r-GMA)、P(GMMA-r-DMAEMA)和P(GMMA-r-GMA)无规共聚物刷(GMMA为甲基丙烯酸甘油单酯,DMAEMA为甲基丙烯酸-N,N-二甲氨基乙酯,GMA为甲基丙烯酸缩水甘油酯),聚合物刷中GMMA链节的作用是使聚合物刷具有亲水性,DMAEMA引入氨基,GMA引入环氧基.研究了青霉素G酰化酶在这些载体上的固定化和其酶活性.结果表明,同时引入环氧基和氨基的P(GMMA-r-DMAEMA-r-GMA)刷磁性微球固定化青霉素G酰化酶的活性和活性收率都最高,其固定化动力学比只含环氧基P(GMMA-r-GMA)刷磁性微球的好.固定化酶比自由酶更耐热,固定化酶的最佳pH值比自由酶的略高,固定化酶重复使用10次后其活性保留70%.     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

α—胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL—苯丙氨酸的光学拆分

以氨丙基多孔球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α－胰凝乳蛋白酶。其含酶量为３．６ｍｇ／ｇ，米氏常数Ｋｍ＝１．２×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ，最适宜温度为３５℃，ｐＨ值为７．０，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ｃａ＾２＋激活效应明显。用该固定化酶连续拆分ＤＬ－苯丙氨酸制备Ｌ－苯丙氨酸时，拆分产率高于９０％，产品纯度超过９６％；连续使用２个月后仍能保持较高酶活力。     

京尼平交联磁性壳聚糖微球的制备及其脂肪酶的固定化

采用反相悬浮法与溶胶凝胶法结合制备磁性壳聚糖微球,并以此为载体,京尼平为交联剂,脂肪酶为模型酶进行固定化,研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质。结果表明,在京尼平浓度为0.6 g/L、交联温度为55 ℃、交联时间8 h,固定化酶的比活力最大,为4.31 U/g。固定化酶在25~35 ℃,pH值在8.0有最大活性,其米氏常数Km为0.26 mol/L。同时,固定化酶具有良好的热稳定性及pH稳定性,可重复利用,且能进行磁分离。     

磁性壳聚糖的制备及在脂肪酶固定的应用

采用共沉淀法制备磁性壳聚糖微球,戊二醛做交联剂把脂肪酶固定在磁性壳聚糖载体上,分别使用扫描电子显微镜、傅立叶红外光谱仪、X射线衍射仪、振动样品磁强计、热重分析仪等对磁性壳聚糖微球进行表征分析,并检测了固定化酶的特性.结果表明,制备的磁性壳聚糖性能良好,与游离酶相比,固定化酶的最适p H,最适温度均有提高,固定化酶的热稳定性,对变性剂的耐受力,重复使用性都有较大幅度提高.     

微胶囊固定化过氧化氢酶

以乙基纤维素为膜材，用液中干燥法将过氧化氢酶微胶囊化，研究了温度和ｐＨ值对酶活性的影响及过氧化氢和尿素对固定化酶的抑制作用，由于乙基纤维素膜的保护，明胶对ｐＨ值的缓冲作用及明胶与尿素的反应，明显地扩大了酶对温度和ｐＨ值的适应性，降低了酶活性抑制剂的影响。     

接枝聚合物PAA—g—PIPA微球的制备及其温控释药研究

采用自由基溶液聚合法合成出Ｎ－异丙基丙烯酰胺齐聚物（Ｐｏｌｙ—Ｎ—Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｄｅ，ＰＩＰＡ）．通过缩合将ＰＩＰＡ接枝在聚烯丙胺盐酸盐（Ｐｏｌｙａ－ｌｌｙａｍｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＰＡＡ）上得到接枝聚合物ＰＡＡ—ｇ—ＰＩＰＡ．用化学交联法将ＰＡＡ－ｇ－ＰＩＰＡ制备成１０μｍ左右的微球．所得微球通过物理法吸附阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤ）后，采用动力学透析法测定其体外释药性能．实验数据拟合数学模型得到表征药物微球的释药特性的药物扩散系数Ｋｍ．Ｋｍ在３０℃—４５℃范围内随温度的升高而增大，反映了载药ＰＡＡ—ｇ—ＰＩＰＡ微球具有温控释药性．