具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的催化抗体的研究：Ⅰ.谷胱甘肽特征全抗…

用２，４－二硝基氯苯保护谷胱甘肽的巯基制出半抗原，再通过戊二醛共价反应使其与牛血清白蛋白表面的氨基结合，经超胶ＡｃＡ５４凝胶层析纯化，制备出有较强免疫原性的谷胱甘肽全抗原，用元素分析、红外光谱及核磁共振表征了半抗原的结构，电泳分析得全抗原分子量平均为８７０００道尔顿，光谱分析及圆二色谱研究表明其有较强的可强，紫外及荥光特征吸收，且抗原结构的紧密性增强。     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备

以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原, 从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv). 经3轮筛选后, 用ELISA方法检测出5个(2, 11, 16, 24, 32 )可以和GSH结合的克隆. PCR产物的电泳和测序结果表明, 只有3个克隆(11, 16, 24)具有完整的scFv编码基因. 选取和GSH结合力高的克隆11的scFv 编码基因组装到表达载体pPELB上, 在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达, 用Ni2+螯合亲和层析纯化scFv-11, 免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合. 通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后, 获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11), 其活力为351 U/μmol.     

模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的合成及表征

用Ｂ，Ｂ－二氟硼杂唑烷酮保护谷氨酸的α－氨基和α－羧基，通过液相合成法制得谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸三肽。结合苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）与硒化氢（Ｈ２Ｓｅ）的突变，再经纯化制得具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的三肽模拟物，即γ－谷氨酰－硒代半腕氨酰－甘氨酸。元素分析、氨基酸分析均证明了两种三肽的结构。电子能谱技术分析测得硒的价态及含量。     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的合成及其催化机理研究

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px。ECl。11。1。9)是一种含硒蛋白质,由4个相同的亚基构成,它以还原型谷胱甘肽为底物,催化还原H_2O_2和ROOH。 GSH-Px催化还原氢过氧化物的机理为乒乓机理,催化过程包括两个循环,其中B循环慢于A循环。Reich和Jasperse提出的关于有机硒模拟物的催化机理与天然酶的催化反应不同,反应过程中有氮原子的参与,本文合成的有机硒化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ为季铵盐型,氮原子无法参与催化反应过程中的成键及断键。因此,必须寻求新的反应机理。     

2-位碲桥联环糊精的制备、表征及其谷胱甘肽过氧化物酶活性的研究

该文以三种母体环糊精(CD),即α-、β-和γ-CD为修饰模板,将功能性基团有机碲引入到环糊精次面的2位羟基上,制备得到了三种具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的GPX模拟物。采用元素分析、红外光谱、核磁共振等手段对三种环糊精衍生物的结构进行了表征。运用GPX经典双酶体系法测定了三种环糊精衍生物的GPX活性,实验结果表明三者均具有很高的催化活性,其中2-位碲桥联γ-环糊精(2-Te-γ-CD)具有最高的GPX活性,其催化谷胱甘肽(GSH)还原过氧化氢(H2O2),叔丁基过氧化氢(t-BuOOH)和枯烯过氧化氢(CuOOH)的活力分别是传统"小分子硒酶"Ebselen的80.5,333.3和118.3倍。     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物碲化透明质酸的合成及催化动力学研究

 以透明质酸(HA)作为谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的酶模型,将碲(Te)引入HA中,合成了一种新型的高活力的GPX模拟物碲化透明质酸(TeHA). 用红外光谱和核磁共振技术对TeHA的结构进行了研究,证明Te的修饰位点位于HA的N-乙酰氨基葡萄糖的羟甲基(-CH2OH)上. 采用Wilson辅酶偶联法测定得到TeHA催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPX活力为163.6 U/μmol, 高于文献报道的其它模拟酶. TeHA还能够催化GSH还原异丙苯基过氧化物(CuOOH)和叔丁基过氧化物(t-BuOOH)的反应,并且CuOOH为该模拟酶的最适底物. 通过研究TeHA催化GSH还原三种不同过氧化物的反应动力学发现, TeHA的催化遵循乒乓机制.     

硒代β-环糊精模拟谷胱甘肽过氧化物酶的研究——6-位硒桥联β-环糊精的合成、性质及表征

谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ，Ｅｃ１．１１．１．９）属抗氧化应激酶系，它以还原型谷胱甘肽为底物，催化还原氢过氧化物［１］．它能消除体内自由基，防止脂质过氧化，对治疗和预防克山病、心血管病、炎症及癌症等有明显效果．随着对ＧＰＸ催化机制及活性部位结构的深入...     

过氧化物酶催化酚聚合的研究

研究过氧化物酶在非水介质中催化酚类化合物的聚合。探讨了有机溶剂的浓度，溶剂极性，体系ＰＨ值、酶浓度等因素对聚酚分子量的影响；分析了聚酚的链结构。结果表明，酚分子之间通过酚羟基的邻位或对位相互连结。形成了分子链上带有酚羟基的聚酚树脂；通过调节聚合参数，可以改变聚酚的分子量。     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒三肽

合成了由硒代半胱氨酸(U)、谷氨酰胺(Q)和色氨酸(W)组成的QUW,QWU,WQU,WUQ,UWQ和UQW 6个具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒三肽;采用双酶偶联法进行了GPx活力测定和稳态动力学分析;通过噻唑蓝(MTT)比色法、划痕愈合实验和Western blot技术表征了含硒三肽对肝癌Hep G2细胞生长和迁移能力的影响.结果表明,当U位于氨基端时,含硒三肽的GPx活力高于U位于中间位置或者羧基端时.UWQ催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的活力最高,其催化机制为乒乓机制.UWQ可使Hep G2细胞运动能力减弱,降低肝癌细胞的浸润转移能力.     

光学活性环氧化物的酶催化合成

光学活性环氧化物的酶催化合成①夏仕文尉迟力沈润南李树本②（中国科学院兰州化学物理研究所羰基合成与选择氧化国家重点实验室，兰州７３００００）关键词光学活性环氧化物酶催化不对称合成动力学拆分１前言光学活性环氧化物含有两个手性碳，通过选择性开环和官能团转换...     

辣根过氧化物酶催化水溶性聚对苯二胺-对氨基苯磺酸的合成及表征

以辣根过氧化物酶(HRP)为催化剂,H2O2为氧化剂,催化对苯二胺与对氨基苯磺酸共聚,合成了聚对苯二胺-对氨基苯磺酸(PAn-I)。利用紫外光谱、红外光谱、XPS、GPC、循环伏安、热重分析等方法对合成的PAn-I进行了结构表征与分析,测定了其电导率、电活性和热稳定性等。结果显示,合成的PAn-I不仅具有一定的电活性和热稳定性,且在水溶液中具有良好的溶解性。合成过程中采用去离子水作为反应介质,避免了使用有机溶剂,反应条件温和,酶的用量也较少。     

GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物6A,6A’-二苯胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-AnSeCD). 采用双酶偶联法测定GPX的活力结果显示, 6A,6A’-二环己胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-CySeCD)催化谷胱甘肽还原H2O2和枯烯H2O2的活力均比6-AnSeCD的高. 为了进一步考察6-CySeCD和6-AnSeCD与GSH之间的相互作用, 进行了分子动力学(MD)模拟和分子对接研究. 结果表明, 与GSH的结合使GPX模拟物的构象发生变化, 这种改变可能是影响桥连GPX模拟物催化活性的关键因素.     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含碲环糊精衍生物

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)模拟物6A,6A’-二苯胺-6B,6B’-二碲桥联-β-环糊精(6-AnTeCD),采用双酶偶联法进行GPx活力测定和酶反应动力学分析,通过噻唑蓝(MTT)比色法评价了6-AnTeCD对H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用.结果表明,6-AnTeCD催化谷胱甘肽(GSH)还原过氧化氢(H2O2)的活力高于6-AnSeCD、6,6’-二碲桥联-β-环糊精(6-TeCD)和Ebselen等GPx模拟物.稳态动力学分析显示,6-AnTeCD的催化机制为乒乓机制.6-AnTeCD分子兼具引入底物结合部位和改造催化部位的双重优点,具有分子量小、毒性低及可有效保护心肌细胞免受氧化损伤的优点.     

以透明质酸为骨架的新型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟酶的制备及性质研究

用修饰法合成以透明质酸为骨架的两种新型GPX模拟酶: 硒化透明质酸SeHA及碲化透明质酸TeHA. 用红外光谱和核磁共振波谱对模拟酶的结构进行研究, 证明其修饰位点位于透明质酸的N-乙酰氨基葡萄糖的—CH2OH. 用二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)法测定模拟酶的硒含量为1.2%. 通过模拟酶对3种不同底物过氧化氢(H2O2)、过氧化氢正丁烷(t-BuOOH)和过氧化氢异丙苯(CuOOH)的催化活性的研究结果表明CuOOH为该反应的最佳底物. 研究模拟酶催化谷胱甘肽(GSH)还原3种过氧化物的动力学发现, 反应速率与底物浓度的双倒数曲线均为平行的直线, 说明模拟酶反应的动力学机制与天然GPX相同, 为乒乓机制. 用2,4-二叔丁基甲基苯酚(BHT)法证明了该催化反应为非自由基机理, 且模拟酶不易被碘乙酸抑制.     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-位碲桥联环糊精的合成及催化作用

 以β－环糊精（CD）为酶模型，将Te引入β－环糊精中，成功地合成出一种新的水溶性好、活力高的谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）小分子模拟物2－TeCD，并对其结构进行了表征．采用Wilson辅酶偶联法，间接测定了2－TeCD催化还原型谷胱甘肽（GSH）还原H2O2的GPX活力为46．7U／μmol，与文献报道的数据相比，2－TeCD的GPX活力最高．通过考察2－TeCD催化GSH还原H2O2反应的动力学，发现反应初速度对底物浓度的双倒数曲线为一组平行线，表明2－TeCD所遵循的催化机制可能为三转移乒乓机制．通过考察自由基捕获剂2，4－二叔丁基甲基苯酚对酶促和自发反应速率的影响，发现2－TeCD催化的酶促反应为非自由基机理．通过考察酶不可逆抑制剂碘乙酸对酶促反应速率的影响，发现2－TeCD催化反应过程中不生成碲醇中间体．由此推测出2－TeCD的催化循环经历碲硫化合物、次碲酸硫酯和次碲酸中间体．该催化循环与含硒GPX小分子模拟物所经历的催化循环不同，以及环糊精对底物具有识别与结合的能力，可能是2－TeCD具有高GPX活力的主要原因．     

具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒四肽(SecRGD)

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为基础, 在N-端引入硒代半胱氨酸(Sec)设计了SecRGD序列模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx), 利用Fmoc固相合成法合成了SecRGD. 采用ESI-MS质谱和氢化物原子荧光光谱法对硒肽进行表征, 采用酶偶联法进行GPx活力测定和酶动力学分析, 用噻唑蓝(MTT)比色法评价了硒肽的抗氧化效果. 结果表明, 该硒肽的存在形式为SecRGD的二聚体. 该硒肽具有GPx活力, 其催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPx活力为5.54 U/μmol, 高于经典的GPx模拟物Ebselen. 稳态动力学分析结果表明, 该硒肽的催化机制为乒乓机制. 该硒肽具有分子量小, 易溶于水, 毒性低及可有效保护Vero细胞免受氧化损伤的优点, 具有作为抗氧化药物的应用前景.     

基于γ-环糊精的谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的构建及催化作用

基于对天然谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)结构与功能的理解,我们利用超分子化学的方法和原理,选择γ-环糊精为骨架,通过引入催化基团硒或碲,设计并合成了7种基于γ-环糊精的新型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物,并采用元素分析、红外光谱、核磁共振等手段对其结构进行了详细的表征和确认。运用GPX经典双酶体系法测定了它们的GPX活性,实验结果表明:6,6’双碲桥联γ-环糊精(6-diTe-γ-CD)表现出了最高的GPX活性,其催化GSH还原过氧化氢(H2O2)、叔丁基过氧化氢(t-BuOOH)和枯烯过氧化氢(CuOOH)的活力分别是传统小分子硒酶Ebselen的147.3、1897.9和663.9倍,该结果是目前报道的环糊精GPX模拟物中酶活力最高的。     

活力高于天然谷胱甘肽过氧化物酶的含硒抗体酶

还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb)制备技术,制备出阳性McAb(IgG)-4G3;4G3对GSH和半抗原Hp2的解离常数(K_D)表明,单克隆抗体4G3对GSH具有较强的亲和力.对4G3进行两步化学诱变(Chemical Mutation),诱变后即为具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒抗体酶(m4G3),m4G3的GPX活力为9337U/μmol,是兔肝GPX(RL-GPX,5780U/μmol)的 1.6倍,曾报道的含硒抗体酶m4A4(1239 U/μmol)的7.5倍,制备出活性高于天然酶的抗体酶,证实了半抗原设计思想.将m4G3拆分成Fab和Fc片段,发现m4G3的活性中心位于Fab片段上,m4G3的硒代半胱氨酸(Se-Cys)含量为1.9 mol/mol.     

铁掺杂碳点作为过氧化物模拟酶用于谷胱甘肽检测研究

以芦丁、尿素和三氯化铁为原料,水热法合成了铁掺杂碳点(Fe-CDs),并对制备的Fe-CDs进行了透射电子显微镜、X-射线光电子能谱和傅里叶红外光谱的表征。Fe-CDs表面富含-COOH、-OH和-NH₂等含氧官能团,粒径主要分布在0.5～5 nm。Fe-CDs可催化H₂O₂氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺,并在652 nm处出现较强的吸收峰。而谷胱甘肽(GSH)能还原ox-TMB使体系吸收峰强度降低。基于上述原理,建立了以Fe-CDs为过氧化物模拟酶的GSH测定方法。GSH浓度与体系吸收峰强度的变化值(ΔA)在2～30μmol·L^-1浓度范围内呈良好的线性关系,检出限为0.8μmol·L^-1。将该方法用于测定实际样品谷胱甘肽片的含量,加标回收率在98%～103%,RSD为1.4%～2.2%。结果表明,该方法能够用于实际样品谷胱甘肽片中GSH的含量测定。     

具有GPX活力的抗体片段Fv的制备和性质

具有谷胱甘肽(GSH)结合部位的鼠抗体3H₄(IgM)经胃蛋白酶水解,产生分子量为25000的抗体Fv片段,用荧光滴定法测定了它与GSH的亲和常数K_a=1.17×10₇L/mol.该片段经苯甲基磺酰氟活化,再经NaHSe作用,其结合部位的丝氨酸被突变为谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团硒代半胱氨酸.突变后的Fv片段表现出很高的GPX活性,其活力高达2500U/μmol,称为Fv抗体酶.动力学分析表明,Fv酶的最适温度为55℃,最适pH为7.0,催化机制为乒乓机制,米氏常数分别为:K_m(GSH)=4.16×10^-3mol/L,K_m(H₂O₂)=2.8×10^-4mol/L.