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利用毛细管作为酶固定化的载体,将酶直接键合到毛细管内壁,制成毛细管纳升反应器,结合质谱分析水解产物,获得了蛋白质的肽谱.实验发现,以毛细管为反应器后,蛋白质肽谱分析所需量大大减少,只需10-13mol,甚至几个10-15mol的量就可满足分析要求. 相似文献
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本文用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱来测定多肽类聚合物的相对分子质量,对基质、溶剂以及添加阳离子条件进行了优化。 相似文献
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基于MALDI-TOF MS微生物检测的一次性纸基靶板开发 总被引:1,自引:0,他引:1
针对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)目前使用的不锈钢靶板或一次性可抛弃塑料靶板存在的清洗流程复杂,易有残留从而产生交叉污染或需要回收、污染环境等问题,开发了一种可一次性使用的纸基靶板。该靶板成本低,使用后方便处理,不会对环境造成污染。并利用标准品从分辨率、灵敏度、重现性、微生物鉴定4个方面对纸基靶板进行了测试,结果表明开发的纸基靶板在分辨率、灵敏度等指标方面与钢靶板基本一致,样品检测重现性较好,具有应用于临床微生物检测的潜力。 相似文献
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选用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)技术鉴定质谱纯海兔肝铁蛋白(liver ferritin ofAplysia,ALF)。来源于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪中的激光和基质芥子酸协同解吸海兔肝铁蛋白(ALF)为带双电荷、单电荷[M H] 和二聚体的亚基离子,并可供质谱分析。ALF亚基的质荷比m/z分别为9784.03[M 2H]2 、19678.42[M H] 和39387.80[2M H] ,其中亚基分子量[M H] 略小于鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin of shark,SLF)。在弱碱介质(pH8.0)条件下,电子光谱技术研究指出,抗坏血酸以1/2级反应方式参与ALF释放铁全过程,同时又使ALF以一级反应动力学方式释放铁,呈现两种不同的速率。推测这一异常现象可能与ALF含低铁量、亚基调节能力和海兔的进化地位有关。 相似文献
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肽质量指纹谱鉴定蛋白质时生物信息学分析条件的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了优化肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)鉴定蛋白质的生物信息学分析条件。将牛碳酸酐酶2(carbonic anhydrase-2,CAH2)和人热休克蛋白70s(Hsp70s)进行2-DE分离、酶解,肽段经过MALDI-TOFMS分析得到PMF数据。选择Swissprot、MSDB、NCBInr、Random等数据库和MASCOT与MS-Fit搜索引擎,以牛CAH2为模型优化搜索参数,结果表明:Swissprot是适合做蛋白PMF分析的数据库;主要参数最佳设置为:漏切位点数为1个,肽质量容错数为±1Da,同时肽质量类型选择平均分子质量比单同位素质量更便于候选蛋白的筛选。最后用人Hsp70s蛋白的PMF数据检验优化条件,结果表明,所选择的数据库及参数是可靠的。 相似文献
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基体辅助激光解吸电解飞行时间质谱用于有参皂甙Rg3的定量分析 总被引:1,自引:0,他引:1
考察了基体辅助激光解吸时间飞行质谱用于人参皂甙Rg3定量分析时内标的选择,加入棉子糖作为内标时,Rg3的定量标准曲线的回归系数R^2=0.938,平均相对误差为28.6%,加入性质相近的芦丁后,Rg3的定量标准曲线的回归系数R^2=0.933,平均相对误差为7.5%,分辨率的提高以及采用Rg3和内标物的质谱峰的相对面积来人表Rg3的浓度可以使定量的重现笥明显改善. 相似文献
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MALDI-TOFMS测定高聚合度葡聚糖及不同基体在测定中的作用比较 总被引:5,自引:0,他引:5
应用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)直接对未经分级的高聚合度(n>100)葡聚糖样品进行了测定,检测到的葡聚糖最大分子量达18000以上.对2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、1-羟基异喹啉(1-HIQ)及3,4-二羟基肉桂酸(咖啡酸,CA)3种一元基体以及DHB与1-HIQ,DHB与CA两种二元基体在测定中的作用进行了比较.结果表明,DHB基体测定的质量范围较大;DHB+1-HIQ和DHB+CA二元混合基体对样品的解吸电离效果及谱图重现性好;DHB+1-HIQ基体获得的谱图分辨率高. 相似文献
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基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析糖类的基体 总被引:1,自引:0,他引:1
糖类物质极性高、难挥发、热不稳定,其中多糖还具有相对分子质量分布发散的性质,其质谱表征比较困难。基体辅助激光解吸电离飞行时问质谱(matrix-assisted lazer desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry.MALDI-TOFMS)灵敏、快速,对杂质的包容性强、分析的质量范围大,能够对糖类尤其是非衍生化糖进行直接分析。近年来,MALDI-TOFMS的发展已使糖类物质的分析达到一个新的水平。由于基体在MALDI-TOFMS分析中起着至关重要的作用,而研制开发和使用各种有效新基体也一直是MALDI-TOFMS分析的聚焦点,本文综述近10年MALDI-TOFMS分析糖类所用的基体。 相似文献
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The silica-based poly(dimethylsiloxane)(PDMS)microfluidic enzymatic reactor was reported along with itsanalytical features in coupling with MALDI TOF and ESI MS.Microfluidic chip was fabricated using PDMS cast-ing and O_2-plasma techniques,and used for the preparation of enzymatic reactor.Plasma oxidation for PDMS en-abled the channel wall of microfluidics to present a layer of silanol(SiOH)groups.These SiOH groups as anchorsonto the microchannel wall were linked covalently with the hydroxy groups of trypsin-encapsulated sol matrix.As aresult,the leakage of sol-gel matrix from the microchannel was effectively prevented.On-line protein analysis wasperformed with the microfluidic enzymatic reactor by attachment of stainless steel tubing electrode and replaceabletip.The success of trypsin encapsulation was investigated by capillary electrophoresis(CE)detection,and MALDITOF and ESI MS analysis.The lab-made device provided excellent extent of digestion even at the fast flow rate of7.0 μL/min with very short residence time of ca.2 s.In addition,the encapsulated trypsin exhibits increased stabil-ity even after continuous use.These features are the most requisite for high-throughput protein identification. 相似文献
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生物酶影响着物质代谢和质能转换等生命活动,生物体内某些酶的活性变化会导致疾病的发生。发展新型的酶分析方法对深刻理解生物代谢过程、疾病诊断和药物研发等具有重要意义。毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析速度快、操作简单和样品消耗少以及可与多种检测手段联用等优点,在酶分析研究中越来越受到关注。CE酶分析主要包括离线和在线两种模式,其中,固定化酶微反应器与毛细管电泳联用(CE-IMER)的在线酶分析已经成为主要的酶分析方法之一。CE-IMER充分结合了固定化酶和CE的优势,将游离酶固定在毛细管内,不仅可以显著提高酶的稳定性和重复使用性,而且可以实现纳升规模溶液的自动化酶分析,进而显著降低酶分析成本。目前已有大量方法制备IMER用于CE酶分析,然而如何构建性能良好、可再生使用、酶固载量大、自动化程度高的CE-IMER一直是该领域重点研究的问题。DNA定向固定化技术(DDI)可以充分利用DNA分子的碱基互补配对(A-T, C-G),在温和的生理条件下特异性固定生物大分子。由于短链双螺旋DNA分子具有较强的机械刚性和物理化学稳定性,通过DDI将酶固定在载体表面,有利于降低传质阻力,提高酶与底物的接... 相似文献