响应面分析法优化蛭弧菌生长条件

为了优化蛭弧菌的生长条件,在前期研究确定适于蛭弧菌BD1生长的最佳pH、盐度、二价金属离子(Ca2+、Mg2+)、谷氨酸钠的浓度范围的基础上,综合考虑4个因子对蛭弧菌BD1生长的影响,利用Design Expert 6.0软件进行响应面分析,优化菌体生长条件,得到该菌株生长模型,并在模型最优值时得到各因子的水平。结果表明:BD1的最优培养条件为盐度(NaCl浓度)为2.9%,培养液pH值为7.4,Ca2+、Mg2+浓度为6.4 mmol,谷氨酸钠浓度为4.2 mmol。菌体生长过程中,盐度和二价金属离子,谷氨酸钠和二价金属离子,谷氨酸钠与盐度交互作用不显著,pH与盐度,pH与谷氨酸钠,pH与二价金属离子交互作用显著。菌体生长模型达到显著水平,可以对BD1在不同条件下的生长情况进行分析和预测。     

蛭弧菌裂解泛耐药革兰氏阴性菌及培养条件研究

用双层平板法和液体培养法对蛭弧菌裂解泛耐药菌进行研究. 结果表明: 该株蛭弧菌能裂解泛耐药鲍曼不动杆菌、泛耐药铜绿假单胞菌、大肠杆菌这3株革兰氏阴性菌, 不能裂解凝结芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌这2株革兰氏阳性细菌.以泛耐药鲍曼不动杆菌为宿主菌, 研究影响蛭弧菌生长和发挥噬菌特性的因素. 35℃是蛭弧菌发挥噬菌作用的最适温度. 蛭弧菌的数量在pH75时达到最大值. 浓度为1%的NaCl有利于蛭弧菌发挥噬菌特性. 在培养蛭弧菌时添加0005mol/L的Mg2+、0003mol/L的Ca2+可以提高蛭弧菌的裂解活性. 0001mol/L的谷氨酸钠可提升蛭弧菌的裂解能力. 氯仿会将蛭弧菌全部灭活.     

蛭弧菌指示和净化海水的研究

厦门近岸海水海洋噬菌蛭弧菌的数量与海水中弧菌类的数量成正相关．灭菌海水中只加蛭弧菌，其数量出现负增长．若同时加入蛭弧菌和宿主菌鳗弧菌８９２７菌株，则蛭弧菌数增加、增加速率随宿主菌浓度增加而增加，并导致宿主菌数减少，此时宿主菌随培养时间延长而减少，但减少速度缓慢，１５ｄ仅减少２６％．     

蛭弧菌在细胞匀浆中增殖的初步研究

自生活污水中分离得到了蛭弧菌 Bd—No.2,用超声波破碎仪处理了 Bd—No.2的寄主 E.coli K_(12)和非寄主革氏负(G~+)根瘤菌1.174、革氏正(G~+)枯草芽孢杆菌及卡氏酵母菌,用它们细胞匀浆液的稀释液培养蛭弧菌 Bd—No.2,双层平板计数确证它们都能使 Bd—No.2增殖,说明可以“腐生”培养。表明某些菌体不为蛭弧菌利用是与它们细胞壁的屏障作用有关。     

海洋弧菌Z010产生几丁质酶的发酵条件研究

以海洋弧菌Ｚ０１０菌株为对象,研究了其产生几丁质酶的发酵条件。研究表明,其产酶的最佳发酵条件为：２２１６Ｅ液体培养基中含０．５％（ｗ／ｖ）的胶体几丁质,０．５％（ｗ／ｖ）的蛋白胨,培养起始ｐＨ值为７．０,２５℃摇床２００ｒ／ｍｉｎ培养３６ｈ,几丁质酶产出最大。     

海洋噬菌蛭弧菌对对虾病原菌及其他细菌的寄生作用

用宿主双层琼脂平板法，测定海洋噬菌蛭弧菌对２５株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的寄生作用，结果表明噬菌蛭弧菌菌株不同寄生的范围不同，但所有供试寄主细菌都能被某些蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑．用相差显微镜和电镜观察蛭弧菌的形态及噬菌过程     

海洋弧菌NTi产琼胶酶的发酵条件优化

以琼胶酶活力为主要指标,采用单因素与响应面相结合的方法,对降解琼胶的海洋弧菌NTi(Vibrio natriegens NTi)发酵产琼胶酶的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,α-乳糖对菌株产酶具有较强的抑制作用,NH+4不利于菌株生长和产酶。培养基分别以3. 3 g/L琼脂、6. 33 g/L酵母膏为唯一碳源及氮源,添加20 g/L的Na Cl,发酵海洋弧菌V. natriegens NTi产琼胶酶的效果最佳。发酵过程中的p H值、接种量、装液量、温度、发酵时间最优值分别为6. 5、2%、32 m L、27℃和24 h。优化后,该菌产琼胶酶活力达到2. 81 U/m L,比优化前增加了230%。     

济南地区蛭弧菌(Bdellovibrio)的初步研究

从济南地区的生活污水、湖水和土壤中分离到9株蛭弧菌。它们均为直或弯曲的杆状或弧状,大小为0.20～0.31μm×0.66～1.01μm。单根极生鞭毛。在其中2株蛭弧菌的细胞两端还发现有数根须状结构。蛭弧菌 No.1对氯仿敏感,它的增殖并不依赖于其寄主的增殖。它们的寄主范围较广,可以跨越属或科。温度对于蛭弧菌 No.1的增殖速度有显著影响。每个 E.coliK_(12)细胞约释放2个蛭弧菌 No.1细胞。     

固定化蛭弧菌净化景观水体中病原微生物的试验研究

淤泥容纳、滋生和释放病原微生物威胁城市景观水环境安全。利用陶化后的淤泥颗粒固定蛭弧菌净化城市景观水体中病原微生物,可避免物化消毒对景观水体中其他动植物造成伤害。陶化淤泥颗粒固定蛭弧菌及固定化蛭弧菌对大肠杆菌、实际景观水体中总大肠菌群和粪大肠菌群裂解的试验结果表明:淤泥陶化温度为800℃、吸附时间为6 h、培养温度为30℃、摇床转速为140 r/min时,蛭弧菌固定化的效果最好;在此条件下固定的蛭弧菌,在72 h的试验周期内,对大肠杆菌的去除率达到97.4%,远超对照组的38.4%;采用陶化淤泥颗粒固定蛭弧菌去除城市景观水体中总大肠菌群和粪大肠菌群两种指示性病原微生物,去除率分别达到97.5%和78%。     

壳聚糖酶高产菌株发酵条件的优化

优化了一株壳聚糖酶高产菌株的碳源、氮源、装瓶量、接种量和初始pH值等产酶发酵条件,并进行了正交实验。实验结果表明,最佳发酵条件为:几丁质2.5%,(NH4)2SO40.4%,酵母粉0.7%,pH值为5.5。优化后酶活由原来的454.03 U/mL提高至604.60 U/mL,提高量为优化前的33.16%。     

苏云金芽孢杆菌MS7培养条件的优化

通过单因子试验对苏云金芽孢杆菌MS7菌株的培养条件进行优化．研究表明,该菌株的最佳培养基组成和发酵条件为：蔗糖10．0g／L、牛肉膏10．0g／L、K2HPO42．0g／L,初始发酵pH7．0,装液量25mL,培养温度35℃,培养时间36h,优化后细菌总数可达1．2×10^8CFU／mL．     

高效降解秸秆纤维素菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

从堆沤秸秆土壤中筛选到一株高产纤维素酶菌株YA-14,经菌株形态特性分析和18SrRNA基因序列分析,确定其为烟曲霉(Aspergillus Fumigatus).通过单因素及正交试验,研究了多种因素对菌株产酶效果的影响,确定最佳产酶条件为碳氮比2:1,初始pH值为5,Mg2+ 浓度为0.4 mg/mL,接种量为1.0...     

一株产普鲁兰酶细菌的分离鉴定及其发酵条件优化

从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶条件为:玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.05%,MgSO4·7H2O 0.01%.装液量为70 L/250 L,培养基最初pH为6.0,发酵温度30℃,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h,优化后菌株产普鲁兰酶的酶活高达67.8 U/mL,是优化前菌株产普鲁兰酶活性的11.89倍.     

菊粉酶产生菌的选育及发酵条件

野生型黑曲霉ＡＪ１４０５经紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍等多代诱变处理，获得一株产菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）能力较高的变异菌株ＡＪ１９５８．连续传代１０次，ＡＪ１９５８突变株无衰退，是稳定的变异菌株．其产生的菊粉酶只被菊粉（Ｉｎｕｌｉｎ），而不被蔗糖、淀粉、纤维素、葡萄糖或果糖诱导．在１０００ｍＬ０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液中添加豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬ培养液，于３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ旋转式摇床振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ（－１）．Ｋ＋，Ｆｅ（２＋），Ｍｇ（２＋）对酶形成有促进作用．     

产中性蛋白酶工程菌的构建及其发酵条件的初步优化

为构建1株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化,以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得中性蛋白酶基因npr,与高拷贝质粒pWB980连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr.在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398,工程菌发酵活力可达1,398.3,U/mL.通过对其发酵工艺进一步优化,在接种量5%、装液量100,mL/500,mL、摇床转速180,r/min、温度34,℃的条件下发酵48,h,发酵液的酶活力可达2,487.5,U/mL,比优化前提高了78%.     

地衣芽孢杆菌DY-1溶磷条件的研究

利用单因子试验及正交试验优化了地衣芽孢杆菌DY-1的最佳溶磷条件,并用钼锑抗比色法测定了菌株的溶磷能力.试验结果表明,以1%葡萄糖为碳源,0.1%硫酸铵为氮源时地衣芽孢杆菌DY-1溶磷量最大.最佳溶磷条件为:温度30℃,pH 8.0,培养时间72 h,3%接种量.     

哈维氏弧菌黑鲷分离株BK-1培养条件优化研究

从患病黑鲷Sparus macrocephalus 的肾脏分离到一致病菌株BK-1,经鉴定为哈维氏弧菌.对哈维氏弧菌BK-1株的最佳生长条件及培养基优化进行了测定.结果表明:不同的培养条件和培养基成份均会影响其产量.哈维氏弧菌最适宜生长条件为:盐度为2%、pH8、温度为30℃;最佳培养基成份为:蛋白胨0.5%,牛肉膏0.75%,甘油0.05%,CuSO40.15 mg/L,CaCl2 0.01 g/L.     

桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

德氏乳杆菌保加利亚亚种培养基及培养条件的优化

为了降低德氏乳杆菌保加利亚亚种的工业生产成本和提高发酵液的菌浓度,通过单因素试验和旋转中心组合设计（central composite design,CCD）相结合的方法优化培养基的组分和培养条件。优化后的培养基成分为:葡萄糖30 g/L、豆粕28 g/L、玉米粉14 g/L、乳清粉28 g/L、K2HPO4 3.0 g/L、柠檬酸三铵2.5 g/L、乙酸钠5 g/L、吐温-80 1.25 mL/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、MnSO4·4H2O 0.0625 g/L;培养条件为:初始pH值7.1,温度37 ℃,接种量4%（体积分数）,静置培养。经优化后活菌数达到 6.07×109 CFU/mL,明显高于原MRS培养基（5.8×108 CFU/mL）,且其成本较原MRS培养基的成本降低了4000元/t。