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同步荧光光谱法测定蛋白质 总被引:1,自引:0,他引:1
在模拟生理条件下,由于核苷类药物中间体氰基乙基尿嘧啶(CEU)与血清白蛋白相互作用,血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈线性关系,据此提出以氰基乙基尿嘧啶为探针,用固定波长同步荧光光谱法测定人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)的方法.在最佳试验条件下,体系的荧光强度与HSA和BSA的质量浓度分别在1.38~496.2 mg·L-1和1.56~624.0 mg·L-1范围内呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.045 mg·L-1和0.051 mg·L-1.方法应用于人血清及牛血清中HSA及BSA的测定,并以此样品为基体分别加入HSA及BSA标准溶液作回收试验,测得回收率在95.1%~102.5%之间,相对标准偏差(n=6)在0.43%~2.72%之间. 相似文献
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苏丹红Ⅰ-人血清白蛋白荧光共振能量转移研究及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
在25℃、pH 8.2的Tris-HCI缓冲液中,苏丹红I与人血清白蛋白(HSA)之间能产生有效的非辐射能量转移,苏丹红Ⅰ的加入使HSA的荧光猝灭.在此基础上,建立了通过人血清白蛋白共振能量转移荧光猝灭测定苏丹红I的方法,其方法线性范围为0.5~7.5μg/mL,检出限为0.1μg/mL,RSD=0.7%~1.8%,加标回收率为91.9%~109.3%. 相似文献
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在模拟人体生理条件下,基于5-硝基水杨酸与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以5-硝基水杨酸为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法。体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质、反应温度等因素的影响。对上述实验条件进行了优化,结果表明,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在2.21 ~ 469.2 mg/L 的浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为0.81 mg/L(n=11)。本实验对血清、尿样和唾液样品进行了测定,回收率在98.4% ~ 102.6 %之间。 相似文献
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血清白蛋白的铅(Ⅱ)-抗坏血酸络合吸附波法测定 总被引:2,自引:0,他引:2
在pH9.2的H3BO3-NaOH缓冲溶液中,血清白蛋白使铅(Ⅱ)-抗坏血酸络合物在-0.51V(vs.SCE)处的络合吸附波电流降低,电流降低值与加入的牛血清白蛋白(BSA)或人血清白蛋白(HSA)的浓度在一定范围内呈线性关系。BSA在2~38μg/mL范围内,HSA在2~35μg/mL范围内呈线性关系,检出限均为1μg/mL。应用该法测定了人血清样品中蛋白质的含量,结果令人满意。 相似文献
6.
本文用自制L-天冬氨酸修饰电极(PLA/GCE),采用循环伏安法研究了牛血清白蛋白(BSA)与异烟肼(INH)的相互作用,并与荧光光谱法、紫外-可见光谱法进行了比较。使用循环伏安法和荧光光谱法,测得异烟肼与牛血清白蛋白的结合常数K分别为1.544×10~4、1.479×10~4 L/mol,结合位点数均接近1.1。实验测得异烟肼对牛血清白蛋白是静态猝灭。异烟肼的浓度与牛血清白蛋白的荧光强度的降低在2.5×10~(-7)~4.5×10~(-4) mol/L范围内呈线性关系,检出限为1.0×10~(-7) mol/L。BSA的浓度与异烟肼的氧化峰电流的下降在1.0×10~(-9)~5.0×10~(-5) mol/L范围内呈线性关系,检出限为5.0×10~(-10) mol/L。该方法可用于样品中异烟肼和牛血清白蛋白的测定。 相似文献
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在pH 7.4的Tris-HCl缓冲溶液中,荧光猝灭光谱和三维荧光光谱显示磺胺嘧啶钠(SDS)可与人血清白蛋白(HSA)相互作用,使人血清白蛋白疏水微环境极性以及构象发生变化。考察了Δλ值、反应介质、离子强度等因素对该体系同步荧光光谱特征及强度的影响。在选定的最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在1.38~276μg/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.9992,从而建立了以磺胺嘧啶钠为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法,检测限可达0.48μg/mL。用此方法对生物样品人血清、唾液和尿液中蛋白质含量进行了测定并进行加标回收实验,回收率在95.7%~103.7%之间。本文还用经典的考马斯亮蓝法对样品进行了测定,所得结果和本方法一致。同时还考察了一些常见的共存物质对蛋白质测定的影响。 相似文献
8.
在模拟体液离子强度下,基于5-硝基水杨酸(5-NSA)与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以5-NSA为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法. 体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质、反应温度等因素的影响. 结果表明,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在3.2×10-8~6.4×10-8 mol/L的质量浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为1.7×10-8 mol/L(n=11). 对血清、尿样和唾液样品进行了测定,回收率在99.96%~100.04%之间. 相似文献
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Anna Michnik K. Michalik A. Kluczewska Zofia Drzazga 《Journal of Thermal Analysis and Calorimetry》2006,84(1):113-117
The thermal denaturation process of bovine and human
both fatty acid containing and fatty acid free albumins in aqueous solution
was studied by use of differential scanning calorimetry. Human serum albumins
were found to be more stable than their bovine counterparts. Fatty acid free
albumins were characterized as generally less stable, more susceptible to
aggregation, their unfolding endothermic transition was less cooperative and
with the smaller degree of reversibility. Deconvolution analysis with using
a non-two-state model with two component transitions showed essential differences
in the thermodynamic parameters between all studied albumins, particularly
regarding the high-temperature component transition. 相似文献
12.
应用荧光光度法研究了水溶液中甲氨蝶呤与牛血清白蛋白以及人血清白蛋白分子间的结合反应,讨论了甲氨堞呤对蛋白质内源荧光的猝灭机理,测定出甲氨蝶呤与牛血清白蛋白以及人血清白蛋白的结合常数分别为6.76×105L·mol-1,2.69×105L·mol-1,相应的结合位点数分别为1.09,1.02.依据F(o)rster非辐射能量转移理论确定了供体-受体间的结合距离和能量转移效率,并用同步荧光技术考察了甲氨蝶呤对蛋白质构象的影响. 相似文献
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Xiao-tong Chen 《Talanta》2010,80(5):1952-4801
A novel fluorescence turn-on detection method of human serum albumin (HSA) and bovine serum albumin (BSA) in aqueous solution is investigated using 2,4-dihydroxyl-3-iodo salicylaldehyde azine (DISA). Upon the addition of DISA to HSA/BSA solution, a fluorescence turn-on effect at 529 nm can be observed with a large stokes shift of ∼129 nm based on hydrophobic binding-mode between protein and dye. Under the optimal condition, the linear ranges of fluorescence intensity for HSA and BSA are 0.1-30 μg mL−1 with the relative correlation coefficient of R2 = 0.991 (n = 10) and 0.3-50 μg mL−1 with R2 = 0.997 (n = 10); and the detection limits for HSA and BSA based on IUPAC (CDL = 3Sb/m) are 20 ng mL−1 and 50 ng mL−1, respectively. 相似文献
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光谱法研究巯嘌呤与血清白蛋白的相互作用 总被引:2,自引:0,他引:2
利用荧光光谱和紫外-可见光谱法研究了巯嘌呤药物与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HAS)分子间的相互结合反应.测得巯嘌呤与BSA、HAS反应的结合平衡常数分别为:2.39×103L/mol、1.28×103L/mol.根据Forster非辐射能量转移理论,求算了给体(BSA和HAS)与受体(巯嘌呤)间的结合距离和能量转移效率.用同步荧光法考察了巯嘌呤对BSA和HAS构象的影响.证实了巯嘌呤药物与牛血清白蛋白和人血清白蛋白的相互结合作用为单一的静态猝灭过程. 相似文献
16.
在pH6.5的B-R缓冲溶液中,壳聚糖与血清白蛋白作用,体系的共振散射光谱较弱;当加入Cu2 后,使Cu2 与血清蛋白的浓度比为10∶1时,反应形成三元配合物。三元体系的共振瑞利散射(RRS)光谱显著增强,并形成新的RRS光谱,其光谱增强程度与壳聚糖含量呈线性关系。实验考察了BSA和HSA分别与Cu(和壳聚糖形成的三元体系,以及反应条件和机理,对于BSA体系,其最大RRS峰位于350nm和480nm两处,而HSA体系的最大RRS峰位于340nm处,两个体系的线性范围和检出限分别是0.01~4.0mg/L和3.7μg/L、0.01~6.0mg/L和11μg/L,其RSD均小于4.0%。显然,BSA体系有较高的灵敏度。据此可建立起RRS技术分析测定痕量壳聚糖的简便、快速和高灵敏度的新方法。同时,考察了共存物质的影响,表明方法有较好的选择性。将此法用于测定保健胶囊和自制壳聚糖粗品中壳聚糖的测定,结果满意。 相似文献
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本文通过吸收和荧光光谱法研究了一种噻菁染料与人血清蛋白及牛血清蛋白的相互作用。吸收光谱数据表明,与血清蛋白结合后,噻菁染料单体的吸收峰发生红移,同时强度也有很大变化;还通过吸收光谱计算确定了噻菁染料与血清蛋白的结合位点数( n )。与人血清蛋白或牛血清蛋白结合后,噻菁染料的荧光量子产率增加。分析噻菁染料的荧光强度随溶液中血清蛋白浓度的变化得到了二者反应的表观结合常数( K a)和自由能变化( ΔG )。根据表观结合常数( K a)可以判断,人血清蛋白比牛血清蛋白与噻菁染料的结合更强。 相似文献
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Summary Two high-performance liquid chromatography (HPLC) techniques were developed for the determination of binding constants in
the interaction of serum albumin with L-tryptophan: internal calibration and external calibration. The results obtained were
compared with those obtained by the classical method of equilibrium dialysis and by gel filtration. While all the methods
are equally reliable, the internal and external calibration techniques seem to be superior in their simplicity, speed and
convenience. 相似文献
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荧光EXAFS数据证实,在HSA和BSA中,锌离子与第一配位层原子的核间距分别为0.201nm和0.203nm,配位数近似为4,很可能为4个氮原子配位,胱氨酸硫原子参与配位的可能性基本排除. 相似文献