盘电泳凝胶的蛋白酶贴印酶谱显示法

本法是在Ronald C.Roberts(1980)酶谱方法的基础上发展的,先在盘电泳凝胶上分离样品,再在载玻片琼脂糖平板上显示酶谱.我们用此方法来显示枯草杆菌商品酶粉的蛋白酶酶谱.蛋白酶样品经离心、透析后,先作盘电泳分离,电泳毕凝胶直接(或先浸在适当缓冲液中改变凝胶pH)与含酪素的琼脂糖平板贴在一起保温,使凝胶中的蛋白酶水解酪素,平板经固定、染色、脱色处理后,酪素未水解部分被染成蓝色背景,把无色的水解区域作为酶带衬托出来.还与在电泳凝胶上直接显示蛋白酶酶谱的方法作了比较.此外,以贴印法显示的各种酶谱,也存在着酶反应pH与电泳凝胶pH不一致的共同问题,对已有的改变凝胶pH的方法作了较为详细的检查,发现有的不能达到预期的结果,对此提出了相应的措施.     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离乳酸脱氢酶

用连续的和不连续的ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶圆盘电泳法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对乳酸氢酶进行了电泳分离,获得了乳酸脱氢酶同功酶的清晰分离带,证明了不连续的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法其分离效果优于连续的ＳＤＳ－聚丙烯酰交圆盘电泳法。     

岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱

于2006年11月,在象山港采集30尾网养岱衢族大黄鱼,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳方法,研究分析了岱衢族大黄鱼眼睛、肌肉、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、胸鳍、鳃和脑9种组织中16种同工酶（LDH、ADH、MDH、ME、SOD、POD、EST、GAD、ALP、ATP、FDH、SCD、IDH、GDH、ACP、GcDH）的表达情况,发现除IDH、GDH、ACP、GcDH 4种酶只显示微弱且不稳定的区带外,其他酶类在各组织中都显示出清晰稳定的酶谱,且这些酶在表型、分布和活性上均表现出高度的组织特异性,与各组织的生理功能相一致.     

旱生植物梭梭苹果酸脱氢酶的纯化及其性质的研究

本文采用差速离心法、硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ纤维素和半琼脂糖柱层析方法，从旱生植物梭梭体内分离出纯化１０４倍的ＮＡＤ－——ＭＤＨ．该酶等电点为５．７，最适ｐＨ７．１，它对草酰乙酸和ＮＡＤＨ的表观Ｋｍ值分别为８０μＭ和９０μＭ，凝胶过滤法得分子量为６７０００Ｄ．ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳法得分子量为３３０００Ｄ，说明该酶是由两个相同亚基组成的二聚体蛋白．该酶的热稳定曲线表明，在５５℃以下时酶活性较稳定．     

兴国红鲤成体组织中四种同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板和盘状电泳,分析了兴国红鲤的脑、肝、肌、心、肾、眼六种新鲜组织及血清中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)等四种同工酶系统的酶带及其血清蛋白带。结果表明,不同组织中四种同工酶谱带是不相同的,存在     

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组     

水稻叶片Ca~(2 )/CaM依赖性蛋白激酶的纯化和活性测定

通过高速离心、( NH4) 2 SO4沉淀、琼脂糖凝胶过滤和 Ca M- sepharose4B亲和层析 ,从 HPGMR( 5 8S)叶片中初步纯化出 Ca2 / Ca M依赖性蛋白激酶 .纯化的 Ca2 / Ca M依赖性蛋白激酶经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶线性梯度电泳 ,亚基分子量约为 5 5× 10 3.在 Ca2 / Ca M依赖性蛋白激酶的标准反应体系中 ,存在过量的 ATP,提取磷酸化反应剩余的 ATP,用叶绿体 Mg2 - ATP酶分解 ATP,最后用复合孔雀绿测定无机磷 ,从而来计算 Ca2 / Ca M依赖性蛋白激酶的活性 .实验结果表明 ,该酶活性是依赖 Ca2 和 Ca M的 ,并且 EGTA和 TFP对酶活性有明显的抑制作用     

9个PstI接头片段的合成及其酶反应研究

采用固相亚磷酸三酯法和化学与酶促相结合的方法合成了９个ＰｓｔＩ接头片段，并对它们进行了酶切反应研究．结果表明：ＰｓｔＩ识别序列中尿苷的存在只降低其互补链的切割程度，对其本链没有影响；ＰｓｔＩ切割底物是按两步单股切割机制进行，作用的最小底物是含有识别序列的８～１２聚脱氧核糖核苷酸，且对底物中识别序列两边的碱基对数目有一定要求；ＰｓｔＩ识别序列中的二个胞苷在酶反应中起的作用是不一样的     

醌蛋白——猪肾二胺氧化酶的提取和性质

新鲜猪肾匀浆后，经热处理、盐析、羟基磷灰石和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等纯化步骤，二胺氧化酶的收得率为２３．９％，纯化倍数为４２５．该酶进行凝胶电泳后，经氨基黑、酶活性和ＮＢＴ溶液染色分别得到相对应的蛋白质、酶活性及醌辅基谱带．该酶可与腐胺、尸胺、己二胺、组胺等底物作用，释放出Ｈ２Ｏ２，当底物为腐胺时，最适浓度为５ｍｍｏｌＬ－１，Ｋｍ值为０．５ｍｍｏｌＬ－１，最适ｐＨ为７．０，最适温度为４０°Ｃ．在非酶系统中，该酶可与ＮＢＴ溶液反应，呈现紫色，并随时间延长而加深．经ＳＤＳ板状不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳，得该酶亚基分子量为８．３×１０４．     

平菇菌株的酯酶同工酶研究

采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚集电泳技术，对８个平菇菌株的酯酶同工酶进行电泳分析。结果表明，平菇的酯酶同酶存在明显的力株特异性，可作为平菇菌株鉴定的生化指标。     

水稻叶片Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶的纯化和活性测定

通过高速离心、(NH4)2SO4沉淀、琼脂糖凝胶过滤和CaM-sepharose4B亲和层析,从HPGMR(58S)叶片中初步纯化出Ca^2 ／CaM依赖性蛋白激酶．纯化的Ca^2 ／CaM依赖性蛋白激酶经SDS-聚丙烯酰胺凝胶线性梯度电泳,亚基分子量约为55X10^3在Ca抖／CaM依赖性蛋白激酶的标准反应体系中,存在过量的ATP,提取磷酸化反应剩余的ATP,用叶绿体Mg^2 -ATP酶分解ATP,最后用复合孔雀绿测定无机磷,从而来计算ca^2 ／CaM依赖性蛋白激酶的活性．实验结果表明,该酶活性是依赖Ca^2 和CaM的,并且EGTA和TFP对酶活性有明显的抑制作用．     

茶薪菇不同发育期酯酶同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳测定了茶薪菇不同发育时期菌丝、子实体的酯酶同工酶。研究结果表明，不同生长阶段的茶薪菇表现出不同的同工酶谱。在菌丝体阶段，酯酶活性随生长天数增加先增后减；在子实体阶段，酯酶同工酶条带数及活性均随生长天数增加而衰减。     

彭泽鲫鱼同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了彭泽鲫鱼的肝、肾、心、脑、肌、眼等6种组织中的酯酶(EST)和乳脱酸氢酶(LDH)同工酶电泳图谱。结果表明:彭泽鲫鱼具有丰富的EST和LDH同工酶。在不同的组织中,EST和LDH同工酶谱带各不相同,具有明显的组织特异性。     

一种新型生物可降解温敏互穿聚合物网络水凝胶

采用互穿聚合物网络（IPN）技术合成了以魔芋葡甘聚糖（KGM）和聚（N-异丙基丙烯酰胺）（PNIPA）为组分的IPN凝胶，对所得凝胶结构进行了红外光谱分析．讨论了不同反应条件对产物凝胶溶胀性能和去溶胀性能的影响，观察到IPN凝胶的较低临界溶解温度约为31℃．当外界温度从20℃迅速转变为37℃时，凝胶在5min内快速收缩，大量失水，表现出良好的温度敏感性．体外降解实验结果显示IPN凝胶选择性地被伊糖苷酶以较高速率降解，且凝胶降解率随着KGM含量的增加而增加，即这种新型的IPN凝胶同时具备了KGM的生物可降解性和酶降解特异性，以及PNIPA的温度敏感性．     

咖啡因、茶碱对家蝇毒性的研究

1985年,我们进行了咖啡因(1、3、7三甲基黄嘌呤)、茶碱(1、3二甲基黄嘌呤),对家蝇(Musca domestic vicina Macq)的毒性试验,实验结果能证明这两种药物对家蝇都是有毒性的,但茶碱对家蝇的毒性亚于咖啡因。 用喂食法测定咖啡因的毒力。随着处理组浓度的增高,家蝇的死亡率也上升0.5％高浓度,家蝇的死亡率可达100％.0.2％浓度,已接近半致死浓度。羽化后8—10小时的家蝇,以0.1％浓度喂食72小时,多次重复试验,结果表明药剂对家蝇生育有一定影响:产卵量减少,卵巢的发育受抑制,卵的孵化率下降,产卵期缩短,此外,用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳,分析家蝇的血淋巴蛋白也有差异。     

全离子型纳米复合水凝胶聚(2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸-丙烯酸-N-(3-二甲氨基)丙基甲基丙烯酰胺)/Laponite的合成及性能研究

本文以锂藻土(Laponite)为无机交联剂,2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)、丙烯酸(AA)和N-(3-二甲氨基)丙基甲基丙烯酰胺(DMAPMA)为离子型单体,通过原位自由基聚合方法制备离子型聚(AMPS-co-AA-coDMAPMA)/Laponite纳米复合(NC)水凝胶.在证实纳米复合水凝胶组成和网络结构基础上,系统研究其机械性能及在不同p H缓冲液和盐溶液中的溶胀行为.由于Laponite的均匀分散使水凝胶具有良好的机械性能,其断裂拉伸强度达196 k Pa,断裂伸长率达3 805%,且该纳米复合水凝胶表现出一定的p H和盐敏感行为.     

漆树漆酶两种同工酶分离纯化与特性研究

应用柱层析和HPLC方法从漆树漆液中分离提纯漆酶的两种同工酶L1和L2 .两者均为低温酶 ,最适的温度分别为 2 0℃和 13℃ ,pH值分别为 6.7和 7.2 ,等电点分别为 8.6和 9.1.通过十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,测得它们的分子量分别为 1.2× 10 5和 1.0 5× 10 5.两种酶均不能催化氧化间氨基苯甲酸 ,对 3 氨基酪氨酸等有很高的反应活性     

低温打破龙牙百合休眠过程中可溶性蛋白的变化

采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究了龙牙百合低温解除休眠过程中所发生的可溶性蛋白表达的变化。结果表明：在低温贮藏的60d里龙牙百合鳞茎盘中可溶性蛋白电泳所得的条带无明显变化,而当休眠解除初期,鳞茎盘出现一条新带,一条带明显表达增强,另有一条带表达则有所减弱;鳞叶中的可溶性蛋白电泳出现相同的趋势,只是鳞叶蛋白电泳条带数比鳞茎盘中的少,低温贮藏期没有变化,萌发初期两条带表达增强,另外一条带则有所减弱。     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅸ．含叔丁基的儿茶酚类底物的漆酶催化氧化

用分光光度法对６个含叔丁基的儿茶酚类底物在不同ＰＨ条件下的离解和漆酶催化氧化行为进行了考察，测定了它们在ＰＨ８．０时的反应速度常数．结果表明，叔丁基的疏水性较好地适应了漆酶对底物疏水程度的要求，使这类底物更容易为漆酶所包结；漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子所提供的ｐＨ环境和质子转移作用，促进了这类底物的离解，使这类底物能在远低于其一级离解所需ｐＨ的环境中进行反应．速度常数数据显示，取代基的疏水作用和取代基参与双齿配位的能力是影响这类底物反应速度的主要因素；在叔丁基的存在下，取代基的电子效应对这类底物的反应速度的影响变得不明显．     

新棘衣棘头虫及黄鳝组织酯酶同工酶分析

采用不连续聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳分析新棘衣棘头虫和黄鳝的肌肉、肝胰脏、肠道、脾脏、性腺、肾脏及心脏7种组织。电泳结果表明酯酶在黄鳝各组织及新棘衣棘头虫中均有表达,并且具有明显的特异性。肌肉组织仅3条酶带,比其它组织的特异性较明显;肝胰脏组织酯酶活性最强,有12条