短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD-142．该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌．在50℃条件下，以10％的接种量接种于发酵培养基中振荡培养48h后，发酵液中碱性蛋白酶活可达516U／mL．发酵培养基的组成成分为麦芽糖6％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4 0．4％、MgSO4 0．02％、CaCl2 0．02％，pH自然．对该酶的性质研究表明，其最适作用pH为9．5，最适反应温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性，并且显示了与去污剂良好的相容性．     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的热稳定性研究

本文研究了环境因子对液体碱性蛋白酶２７０９＾＃热稳定性的影响，多种氨基酸、低浓度的各种离子以及羟基化合物等均能提高２７０９＾＃的热稳定性，氨基酸中以丝氨酸效果最好，Ｃａ＾２＋能极大的提高酶热稳定性，多糖类对酶的热稳定性效果不明显，但与适量合用，可显著提高酶的热稳定性。     

短小芽孢杆菌基因无痕修饰系统的建立及应用

为了实现对短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)SCU11基因组连续地无痕改造,提高碱性蛋白酶产量,本文建立了基于Upp基因反向筛选的短小芽孢杆菌基因无痕修饰系统,将碱性蛋白酶基因AprE的1份拷贝无痕插入至短小芽孢杆菌染色体16S rDNA区.摇瓶发酵实验显示,突变菌株碱性蛋白酶活最高达到7125 U/mL,与出发菌株相比提高了33.1%.结果表明利用该系统可实现对短小芽孢杆菌基因组的无痕修饰,对AprE插入突变菌株进行双交换筛选的最终效率约为23.07%.     

产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌N16抗噬菌体菌株筛选及噬菌…

报道了噬菌体ＰＧ３对产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌Ｎ１６反复感染多次进行自然筛选，获得８株对噬菌体ＰＧ３具有稳定抗性的菌株，其产酶水平有的比出发菌株Ｎ１６高１０％左右。同时对噬菌体ＰＧ３的生物学特性进行了某些研究。     

一株碱性脱毛蛋白酶产生菌的筛选及系统发育分析

经过采集土样,分离、筛选得到一株产碱性蛋白酶的菌株,编号为A607.通过摇瓶发酵,对发酵上清液进行酶活测定和脱毛实验,证实所产生的酶具有蛋白酶水解活性和良好的脱毛能力,其酶活达到263.39μkat·L-1、比活力为1 215.24 μkat·g-1.16S rDNA序列分析表明,该菌株与Bacillus pumilus具有高达99%的相似性.用PHYLIP程序将该菌株与报道的相关碱性蛋白酶产生菌进行系统发育进化分析,发现菌株A607与Bacillus pumilus处于同一分支.     

短小芽孢杆菌sRNA Bpsr112的鉴定及功能研究

为了给短小芽孢杆菌的改造提供新思路,提高碱性蛋白酶产量,实验室前期对短小芽孢杆菌进行了转录组测序,预测了短小芽孢杆菌的sRNA.本研究通过生物信息学方法和Northern杂交鉴定了一个新的sRNA Bpsr112.然后构建了Bpsr112的敲除型菌株和过表达菌株,利用相关菌株进行了生长曲线、盐胁迫和蛋白酶活等实验,再利用SDS-PAGE检测胞外蛋白酶AprE的表达水平.结果表明,在发酵至60 h和72 h时,与对照菌株相比,敲除型菌株酶活显著降低（P<0.01）,过表达菌株酶活显著提高（P<0.01）;同时SDS-PAGE结果表明,AprE蛋白含量在敲除菌株中降低,在过表达菌株中提高,说明sRNA Bpsr112对短小芽孢杆菌蛋白酶活具有正调控.本研究鉴定了短小芽孢杆菌中的sRNA,并发现Bpsr112对蛋白酶活具有促进作用.     

短小芽孢杆菌质粒pCJ转化枯草杆菌的研究

本文采用我国自己分离的短小芽孢杆菌抗四环素质粒pCJ3转化枯草杆菌的各种突变体.质粒DNA经氯化铯—溴化乙锭密度梯度离心纯化后转化枯草杆菌的感受态细胞.结果表明枯草杆菌BR151,SB202,168,QB1130及QB1133都可作为质粒pCJ3的受体,转化效率在10~3左右,其中以SB202这株突变体为最高,从各种转化体中提取的质粒及经BamHI消化后的质粒的电泳图均与原质粒pCJ3及其BamHI酶切片段相同,并具有pCJ3的抗四环素转化活性.将pCJ3DNA经BamHI酶切后重新用T_4-DNA连接酶连接再转化枯草杆菌细胞,其转化效率比原质粒高1—2个数量级.研究了二价金属离子、pH及培养基成分对转化的影响,结果证明:Ca~(++)对枯草杆菌转化有促进作用,Cu~(++),Zn~(++)则有抑制作用,转化的最适pH在7.2—7.5之间;营养丰富培养能提高转化效率.     

芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质研究

对芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质进行了研究.该酶的分子量为32kD,最适作用pH为9 0,最适作用温度为85℃,具有良好的pH稳定性(在60℃时,pH稳定范围为6 0～11 0;在80℃时,pH稳定范围为6 0～10 0)和热稳定性(90℃时酶活的半衰期为20min).钙离子和有机溶剂能提高该酶的热稳定性,而EDTA和PMSF则能抑制该酶活性.     

嗜盐菌碱性淀粉酶特性研究

碱性嗜盐菌ＨａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐＨ－３７１产生的淀粉酶经超滤、硫酸铵沉淀和ＤＥＡＥ－纤维素纯化后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳为一条带，分子量为２７０００，等电点３．７，最适反应ｐＨ９．０，最适反应温度６５℃．ＮａＣｌ是维持酶活性的必需因子，酶解产物为麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖     

乌鳢蛋白消化酶活性的研究

研究了温度及不同蛋白源饲料（泥鳅Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｉｃａｕｄａｔｕｓ和黄豆饼）对乌鳢（Ｏｐｈｉｏｃｅｐｈａｌｕｓａｒｇｕｓ）蛋白消化酶活性的影响．结果表明：温度可显著影响蛋白酶活性;胃蛋白酶、肠道蛋白酶及肝胰脏蛋白酶的最适温度分别为３０℃、３０℃和２５℃;在最适温度及同等温度条件下,胃蛋白酶活性均比肠道蛋白酶及肝胰脏蛋白酶活性高．饲喂后９ｈ,黄豆饼组胃蛋白酶、肠道蛋白酶达最大活性,泥鳅组为１２ｈ．     

碱法造纸黑液性质的研究

对胜利油田附近六个造纸厂的黑液性质进行了室内试验研究,其中包括固形物含量、pH值、碱含量、表面张力、界面张力、润湿性、流变性、腐蚀性、相对密度、冰点、木素含量和稳定性等.研究认为,碱法造纸黑液的固形物含量低,其主要成分是碱、碱木素和活性剂.根据黑液的这些性质提出了碱法造纸黑液在驱油、调剖、稠油降粘、注水井解除油堵等方面应用的可行性.     

耐碱性木聚糖酶发酵生产条件的研究

研究了不同培养条件下的产耐碱性木聚糖酶的情况 .类黄假单胞菌SQ153 产酶适宜条件为 :以4%的麸皮为碳源 ,以 0 .6 %的尿素为氮源 ,pH 10 .0 ,37℃ ,2 0 0r/ pm培养 14h ,其酶活力达 5 98IU/mL培养基 .在 5L自控发酵罐中 ,产酶达到同样水平 ,发酵周期缩短约 1h .     

黑眉锦蛇小肠碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

作者对黑眉锦蛇小肠碱性磷酸酶（AKP）进行了分离纯化,对其部分性质进行研究的结果表明,Ser,Thr,Lys和Trp残基是黑眉锦蛇小肠AKP的必需功能基团,部分二硫键对保护酶的催化功能也是必需的。     

30种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌抑制作用研究

利用索氏抽提乙醇回流法获得30种植物的乙醇提取物,用滤纸圆片法分析各种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种细菌的抑制活性.结果表明,在30种植物提取物中,有14种对大肠杆菌的生长有抑制作用,有21种植物提取物对枯草芽孢杆菌的生长有抑制作用.其中,泽漆提取物对大肠杆菌的抑制作用最强,黄花蒿次之,且提取物抑制作用随浓度的...     

三角帆蚌碱性磷酸酶的初步研究

从三角帆蚌外套膜中,部分提纯了一种碱性磷酸酶(AKP),并对AKP的某些性质进行了初步研究。该酶作用于底物磷酸苯二钠,测定其最适pH值为10.1,最适温度为40℃,Km值为1.82×10~(-3)mol/L。分别测定了某些化学试剂对该酶的作用:Mg~(2 ),Ca~(2 )离子对AKP有不同程度的激活,尤以Mg~(2 )的作用明显;KH_2PO_4,L-Phe,L-Cys,ME(巯基乙醇),DFP(二异丙基氟磷酸)和EDTA-Na均对AKP有不同程度的抑制作用,其中L-Cys和ME抑制作用最为强烈。KH_2PO_4对AKP的作用属于竞争性抑制,而DFP属于非竞争性抑制。     

白蜡虫碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

碱性磷酸酶 (ＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ,简称ＡＫＰ ,ＥＣ 3·1·3·1)可催化磷酸单酯水解及磷酸基团的转移 ,不仅参与钙磷代谢 ,维持体内适宜的钙磷比例 ,而且还与蛋白质的分泌与合成相关 ,在生物体的物质代谢中具有重要作用[1～ 3] .关于微生物、软体动物、文昌鱼和脊椎动物的ＡＫＰ研究 ,国内外均有报道 .对节肢动物的研究较少[4 ] ,而对昆虫的碱性磷酸酶的研究还未见报道 .我们对我国特产资源昆虫白蜡虫的ＡＫＰ进行了分离提纯 ,并对其部分性质作了研究 ,以期为白蜡虫的酶学性质和生化特征提供部分依据 .1　材料和方法1.…     

一种适合芽孢杆菌质粒DNA提取的改良碱裂解法

以Birnboim和Doly的质粒提取方法为基础,通过缩短菌体培养时间,增加菌体收集量,并对提取过程中所用的三种主要溶液的用量进行适当调整等,摸索出质粒提取的一种改良碱法.用改良后的碱法对浸麻芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌进行质粒提取,均获成功.