辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性

研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系,检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为:辣根过氧化物酶(HRP)7000 U/L,4-氨基安替比林(AAP)1 mmol/L,苯酚(PA)6 mmol/L,黄嘌呤(XAN)1 mmol/L溶于50 mmol/L Tris-CL缓冲液(pH 8.4);反应温度为37℃,保温时间为20 m in;检测波长为508 nm。本方法测定XOD酶活的线性范围为5.0~100.0 U/L,线性关系良好(r=0.9992),检出限为1.3 U/L。该方法操作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。     

酶催化分光光度法测定过氧化氢

过氧化氢能够氧化茜素红使之褪色,而模拟酶-血红蛋白对其具有催化作用.建立了一种以茜素红为指示剂的过氧化氢一茜素红一血红蛋白酶催化反应体系测定痕量过氧化氢的方法.确定了反应的最佳条件,体系的酸度为pH 9.8的氨水-氯化铵缓冲溶液,最大吸收波长为525 nm.线性范围为3.0×10-7～8.0×10-5mol·L-1,检出限(3s/k)为5.2×10<'-8>mol·L-1,表观摩尔吸光率为1.1×104mol-1·cm-1.该方法可用于雨水及消毒水中过氧化氢含量的测定.并以此样品为基体,测定了方法的平均回收率和相对标准偏差(n=5)依次为100.3%及3.26%.     

酶催化分光光度法测定蛋白质

基于血清白蛋白对辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化邻苯二酚紫的反应具有强烈的抑制作用,建立了一种测定血清白蛋白的新方法。在优化的实验条件下:pH4.0NaAc-HAc缓冲介质,(30±0.2)℃恒温反应10min,以430nm为测定波长,本方法测定牛血清白蛋白(BSA)线性范围为(0.4～5.0)×10-7mol/L;检出限为8.6×10-9mol/L。以稳态速率法测定了米氏常数(Km)和米氏速率(Vm),确定其抑制类型为竞争性抑制。方法用于人血清样品中蛋白质的测定,操作简便,灵敏度高,选择性好,结果满意。     

基于辣根过氧化物酶/纳米金/辣根过氧化物酶/多壁纳米碳管修饰的过氧化氢生物传感器的研究

以固定在玻碳电极上的多壁纳米碳管为基底吸附辣根过氧化物酶, 再固定纳米金, 然后再结合一层辣根过氧化物酶, 利用多壁纳米碳管对辣根过氧化物酶的直接电化学催化特性及纳米金对蛋白质的强吸附能力及强的电子传导特性制备了无电子媒介体的过氧化氢生物传感器. 采用循环伏安法, 在无电子媒介体时, 该传感器对H₂O₂ 仍能具有良好的催化活性, 放大了电信号, 提高了该酶传感器的灵敏度及稳定性. 实验证明, 该传感器在H₂O₂浓度为 1.0×10^－6～ 1.0×10^－3 mol&#8226;L^－1范围内有线性响应, 线性相关系数r²＝0.9964. 并探讨了电极的稳定性、寿命及重现性.     

基于金纳米粒子自组装的分光光度法测定半胱氨酸

在pH 4.56的B ritton-Rob inson(B-R)缓冲溶液中,半胱氨酸的SH和NH3 分别与金纳米粒子表面进行共价结合和静电作用,导致金纳米粒子的长距离自组装,形成网状超分子结构,并使金纳米粒子的最大吸收波长从520 nm红移到660 nm。本实验对半胱氨酸引导的金纳米粒子自组装的作用机制进行了研究,建立了操作简便、高灵敏度测定半胱氨酸的分析方法。其线性范围为0.01~0.20 mg/L;检出限为2.8μg/L(3,σ2.3×10-8mol/L)。在实验条件下,其它常见的氨基酸和谷胱甘肽均不干扰测定。     

紫外分光光度法测定啤酒中α-酸的含量

采用紫外分光光度法测定了8种不同品牌啤酒中α-酸的含量。实验考察了不同有机溶剂、介质酸度对α-酸紫外吸收的影响。结果表明:α-酸在279nm处有较强的吸收,方法线性范围在10～50μg/mL,检出限2.6μg/mL,相对标准偏差2.01%。8种不同品牌啤酒中α-酸的含量(μg/mL)为:百威啤酒(392.07)蓝带啤酒(383.82)崂山啤酒(373.72)雪花啤酒(238.26)司陶特黑啤酒(99.49)燕京啤酒(55.16)青岛啤酒(54.91)哈尔滨啤酒(35.05),平均偏差小于5%。用标准加入法测定其回收率,样品回收率范围在93.81%～105.15%之间。     

四氧化三铁磁性纳米颗粒人工模拟酶在快速检测二硝基甲苯中的研究及应用

通过共沉淀法制备了具有类过氧化物酶催化活性的四氧化三铁磁性纳米颗粒(Fe3O4 MNPs).研究表明,Fe3O4 MNPs可以催化H2O2氧化2,2'-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)二铵盐,生成有色的氧化态ABTS,同时也可催化H2O2氧化二硝基甲苯(DNT)的反应,消耗反应物H2O2.基于上述原理,构建了Fe3O4 MNPs-ABTS-H2O2-DNT反应体系,用于检测DNT.结果表明,氧化态ABTS在417 nm处的吸收值随着DNT含量的增加而降低,与DNT浓度在5×10-7 ～2.0×10-5 mol/L范围内呈良好的线性关系,检测限为1.5 ×10-7 mol/L(S/N=3).采用紫外-可见分光光度法对Fe3O4 MNPs-ABTS-H2O2-DNT体系的反应机理、反应条件等进行了深入探讨.所建立的硝基苯类化合物含量的比色分析方法简便、快速、灵敏、可靠,对环境水样中硝基苯类化合物的在线监测具有潜在的应用价值.     

分光光度法测定二氢乳清酸酶酶活的比较

分别采用紫外分光光度法测定二氢乳清酸(DHO)的减少量、PDAB显色法测定N-氨甲酰-天冬氨酸(CA-asp)的生成量来测定二氢乳清酸酶酶活,并对两种方法进行了比较。结果表明紫外分光光度法和PDAB显色法均有良好的回收率,分别为99.4%～101.2%、98.0%～101.3%。但由于PDAB显色法的检测范围为0.05～1.00g/L,较紫外法的检测范围0.05～0.30g/L更为宽泛,仪器要求低,便于实际操作。因此,采用PDAB显色法测定二氢乳清酸酶酶活较为方便。     

基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量

基于血红蛋白 (Hb)的过氧化物酶特性 ,研究了以铬黑T(EBT)作为其氢供体底物时的酶动力学行为。实验测定了Hb作为辣根过氧化物酶 (HRP)的替代物的类酶催化米氏常数和米氏速率。对Hb催化H2 O2 氧化铬黑T的机理作了探讨。建立了测定Hb的催化动力学光度法 ,方法的线性范围为 2× 10 - 8mol/L～ 2× 10 - 6mol/L ,检出限为 3.6× 10 - 9mol/L。用于血浆中游离Hb的测定 ,结果满意。     

基于聚多巴胺球负载Cu纳米粒子的催化作用分光光度法测定人血中葡萄糖含量北大核心CSCD

用水热法在聚多巴胺球(PDA)表面负载了Cu纳米粒子(Cu@PDA),制备了具有过氧化物酶活性的Cu@PDA复合物。此复合物能催化过氧化氢快速氧化无色还原态的四甲基联苯胺(TMB),使其转变为蓝色的氧化态TMB,其吸收峰波长为652 nm,其吸光度与过氧化氢的浓度有关。利用此催化反应结合葡萄糖氧化酶(Gox)催化经氧气氧化葡萄糖而产生过氧化氢的反应,提出了分光光度法测定血样中葡萄糖的方法。在总体积为10 mL的0.1 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲溶液(pH 4.0)中含1.0 mg·L^(-1)Cu@PDA,4.0 g·L^(-1)Gox,0.5 mmol·L^(-1)TMB的条件下加入血样,于40℃反应10 min时,葡萄糖浓度在1.0~30.0 mmol·L^(-1)的范围内与相应的吸光度之间呈线性关系,检出限(3S/N)为0.3 mmol·L^(-1)。方法应用于人血样品的分析,所测得葡萄糖含量与医院实验室所给的值相符。     

基于纳米金颗粒团聚反应的分光光度法测定牛奶中三聚氰胺的含量北大核心CSCD

用0.1g·L^(-1)氯金酸溶液100mL与10g·L^(-1)柠檬酸三钠溶液2mL反应制成红色纳米金颗粒(AuNPs)溶液,AuNPs粒径约为12nm,AuNPs溶液在波长518nm处有特征吸收峰。当三聚氰胺与AuNPs同处于一溶液中时,三聚氰胺的诱导作用使AuNPs团聚,其溶液的颜色由原来的红色变成蓝色(即在波长680nm附近出现新的吸收带)。三聚氰胺的检测范围为0.1～28.0μmol·L^(-1),测定下限(3σ)为0.1μmol·L^(-1)。据此,提出了测定牛奶中三聚氰胺含量的分光光度法。用标准加入法进行回收试验,回收率在99.0%～108%之间。     

紫外-可见分光光度法测定电镀液中纳米Al2O3含量的研究

采用紫外-可见分光光度法测定纳米Al2O3电镀液中(四种不同电镀液)纳米微粒的含量。研究表明,这些体系均存在空白液吸光度很低、工作液吸光度较高的较宽的波长区间,是光度分析法中理想的测定体系,标准曲线的相关系数均大于0．98,其平均相对误差(2．93％)远远小于重量分析法(20．7％)。     

基于辣根过氧化物酶/纳米金/L-半胱氨酸/聚邻氨基苯甲酸膜修饰的过氧化氢生物传感器

描述了测定过氧化氢的第三代电流型生物传感器。为了制备生物传感器，邻氨基苯甲酸（oABA）被电聚合到铂电极的表面形成具有抗干扰能力的静电排斥层。辣根过氧化物酶（HRP）通过纳米金（Nano-Au）的吸附固定到修饰了聚邻氨基苯甲酸及L-半胱氨酸的电极上。过氧化氢的测量是在相对于饱和甘汞电极的＋20 mV处进行的。修饰好的电极具有快速的响应，优秀的再现性和灵敏度，宽的线性范围和低的干扰水平等特点。我们研究了温度和pH对电极响应的影响及传感器的稳定性。在优化的条件下，传感器对过氧化氢的线性范围是2.99×10^-6到3.55×10^-3 mol/L，灵敏度和检测下限分别为0.0177 A•L^－1•mol^－1和4.3×10-7 mol/L（S/N＝3）。传感器不到10 s就可以达到响应的95％。     

双酶显色-紫外-可见分光光度法测定牛奶中组胺与腐胺的含量

建立了基于二胺氧化酶-辣根过氧化物酶双酶显色的紫外-可见分光光度法测定牛奶中组胺与腐胺含量的方法。取10 mL牛奶样品,加入10 mL 2%（质量分数）硝酸铅标准溶液,混匀,再加入20 mL 0.1%（质量分数）三氯乙酸标准溶液,混匀,离心,取上清液,将溶液pH调至7.2,得到待测样品溶液。移取1.0 g·L^-1二胺氧化酶标准溶液100μL,加入100μL待测样品溶液,于50℃水浴中反应15 min。反应结束后,依次加入1.0 g·L^-1辣根过氧化物酶标准溶液50μL,0.5 g·L^-1四甲基联苯胺标准溶液200μL和2 mol·L^-1盐酸溶液50μL,采用紫外-可见分光光度计测定体系的吸光度。结果显示：样品溶液由无色变为蓝色又变为黄色;组胺、腐胺的浓度分别在2.5～150μmol·L^-1和5～200μmol·L^-1内与其对应的吸光度呈线性关系,检出限（3S/N）分别为0.652 2μmol·L^-1和1.134 1μmol·L     

水溶液中纳米Al2O3含量的分光光度法测定及其影响因素研究

采用紫外一可见分光光度法测定不同pH的水溶液中纳米Al2O3的含量及有关影响因素。结果表明,纳米水溶液体系存在空白液吸光度很低,工作液吸光度较高的较大的波长区间,是分光光度法中理想的测定体系;对应的标准曲线线性的相关系数均大于0．98实验还研究了分散方式及分散时间的影响,超声20min可达到较好的分散效果;溶液pH对分散效果影响显著,纳米Al2O3浆料在pH为4～8及10～12两个区间分散性较好;其平均相对误差(2．33％)远远小于重量分析法(20．7％),且比重量分析法(2d)省时(小于1h)。     

基于与纳米金的反应分光光度法快速测定金矿样浸出液中硫脲

硫脲已用于有机合成、镀金材料、选矿以及贵金属湿法冶炼等。硫脲对人体有一定的危害,经常接触可对甲状腺、造血器官、呼吸道甚至皮肤等造成损伤。在金矿的浸出液中通常含有该物质,渗入地下水后会危及人的健康,因此,微量硫脲的测定研究具有重要的意义。目前,测定硫脲的方法主要有分光光度法和电化学分析法等。纳米金具有小尺寸效应、表面效应、生物相溶性、易于表面修饰等特点,并且制备简单、化学性质稳定、易于标记、具有良好的生物相溶性和独特的光学性质。纳米金在分析化学中的应用已受到人们极大关注,但利用纳米金作为反应试剂用于硫脲测     

分光光度法测定脱氧核糖核酸——基于其与亚甲蓝的反应

试验发现在pH 6.5的B-R缓冲溶液中在加脱氧核糖核酸(DNA)后亚甲蓝溶液在其吸收峰666 nm波长处的吸收明显减弱(即色泽减褪),而且吸光度的减弱(ΔA)程度与DNA的质量浓度在10.0 mg.L-1以内保持线性关系,其相关系数为0.9998,此反应对DNA的检出限为0.10 mg.L-1,分别以蛋白酶、胰蛋白酶及溶菌酶作为基体定量加入DNA配制成3种合成样品,按所提出方法进行分析,测得回收率结果在98.4%~101.0%之间,分析结果的RSD(n=11)值在1.1%~3.1%之间。对反应条件(包括亚甲蓝的浓度、反应的温度、酸度及时间等因素)作了试验和选定,还对反应机理作了简要的讨论。     

三波长分光光度法测定洋葱中蒜氨酸酶的活性

采用三波长分光光度法对洋葱中蒜氨酸酶的活性进行了测定,方法有效地消除了由于背景值及光谱吸收峰不对称给定量分析造成的影响,校正了因干扰组分的吸收光谱具有线性吸收所产生的基线倾斜。分别于波长426nm(λ1)、446nm(λ2)、506nm(λ3)处测定吸光度A1、A2和A3,求ΔA=A2-[(λ2-λ3)A1+(λ1-λ2)A3]/(λ1-λ3)。丙酮酸钠的质量浓度在8.8～44.0mg.L-1之间与ΔA呈线性关系。方法的平均回收率为99.8%,相对标准偏差(n=5)为0.13%。