红外光谱法分析酵母蛋白质的二级结构

采用红外光谱法分析了酵母蛋白质的二级结构。测定了不同温度下酵母酰胺Ⅲ带的一维红外光谱、二阶导数红外光谱及去卷积红外光谱。结果表明:随着测量温度的升高,酵母中的蛋白质α-螺旋结构的红外吸收强度降低;而β-转角结构、无规卷曲结构和β-折叠结构红外吸收强度均有所增加。还研究了酵母酰胺Ⅲ带的二维红外光谱,以确定酵母中蛋白质红外吸收强度的变化次序,进一步证明了酵母蛋白质的β-折叠结构的热不稳定性。     

液相色谱-串联四极杆质谱法对动物源基质中β2-受体激动剂的检测

β2-受体激动剂苯乙胺类药物(phenethylamines,PEAs)具有苯乙醇胺结构骨架,苯环上连接有碱性的β-羟胺侧链.目前使用的β2-受体激动剂已有30多种,我国禁止所有β2-受体激动剂用于养殖业.农业部235号公告<动物性食品中兽药最高残留限量>规定在所有食用动物的可食组织中不得检出此类药物.本文在已有方法的基础上进行了改进,利用Agilent 6410A串联四极杆质谱同时测定了11种β2-受体激动剂.实验结果表明该方法快速、简单、灵敏度高,可达到出口欧盟和日本的检测要求.     

冬小麦麸皮抗冻蛋白一级结构的研究

冬小麦麸皮抗冻蛋白(TaAFP)的一级结构是研究其高级结构和功能的基础.本研究结合N-末端测序技术和肽指纹图谱技术,测定TaAFP的一级结构,并对其同源性进行分析.MALDI-TOF-MS质谱分析显示TaAFP的分子量为13637.711 Da.使用Trypsin(胰蛋白酶)、Hydroxylamine(羟胺)和Chymotrypsin(胰凝乳蛋白酶)分别对TaAFP酶解,并对各个酶解片段的肽指纹图谱进行解析和连接,最终确定TaAFP的一级结构为MARKVIALAFLLLLTISLSKSNAARVKYNGGESGGGGGGGGGGGGGGNGSG-SGSGYGYNYGKGGGQSGGGQGGGGGGGGGGGSNGSGSGSGYGYGYGQGNGGAQGQGSGGGGGGGGGGGGGGSGQGSGSGYGYGYGKGGGGGGGGGGDGGGGGGGGSAYVGRHE,测定覆盖度达到了100%.序列比对分析以及同源性分析结果显示,TaAFP是一种与植物细胞壁和抵抗寒冷相关的蛋白质.     

Hg^2＋ -牛血清白蛋白复合体系中蛋白质微观结构的研究

研究了Hg2+在生物体内与牛血清白蛋白相互作用的毒性机理以及蛋白质的微观结构变化.测定了Hg2+与牛血清白蛋白(BSA)复合体系的红外光谱(FT-IR)和圆二色谱(CD),并对图谱进行拟合解析处理.红外光谱实验数据表明Hg2+与BSA发生作用的结合位点可能包括-SH、-OH和-NH基团,采用红外拟合技术对BSA二级结构的变化进行了研究,结果表明蛋白质α-螺旋结构含量降低,β-折叠结构含量升高.圆二色谱图也表明由于一定浓度的Hg2+与BSA结合,从而导致蛋白质的二级结构被破坏,这与拟合红外光谱得到的蛋白质二级结构数据相吻合.Hg2+与牛血清蛋白作用致使蛋白质的构象改变,形成金属离子与蛋白质作用的复合物,因而蛋白质失去活性导致生物体发生病变.     

NanoFlow及MS-MS鉴定疏水蛋白Bcl2

Bcl2是1种细胞内的跨膜蛋白质,是参与细胞凋亡过程的新型功能蛋白质家族中的第1个成员,该家族包括Bax,Bak,Bcl-x,ced-9,Mcl-1,A1,NR13和Bik,可抑制或促进细胞死亡,它们的功能域具有较大的保守性.由于Bcl2具有较强的疏水性,给其结构鉴定带来了很大难度.本文尝试用NanoFlow及MS-MS技术来鉴定该蛋白质.基本方法是:将蛋白质酶切后,测定其质量肽谱,然后自动对具有一定丰度的肽片进行质谱测序,最后通过数据库检索鉴定该蛋白质.与肽质量指纹谱技术(PMF)相比,它通过多个肽片的序列来求证一个蛋白质,比PMF更精确.     

β-羧乙基(或α-甲基乙基)锗三氯化物晶体和分子结构及其质谱分析

有机锗化合物的抗癌等广泛生物活性已引起人们对其研究的兴趣。β-羰乙基锗倍半氧化物(Ge-132)的生物活性已有广泛研究,对其衍生物合成及性质研究亦受到重视。作为合成这类衍生物的中间体,β-羧烃基锗三氯化物的结构和性质报道较少。我们制备了两种β-羧烷基锗三氯化物晶体,测定了其晶体和分子结构,研究了质谱裂解机理,讨论了结构和性质问的关系。     

β-转角肽的溶液构象

主要报导TEM-1β-内酰胺酶的天然蛋白类抑制剂BLIP中一段多肽B1的溶液构象研究 结果.在磷酸盐缓冲溶液中,通过圆二色光谱、傅立叶红外光谱和核磁共振谱研究了B1的二 级结构特征.实验结果表明,B1在溶液中形成了β-转角结构,为在溶液中单独研究β-转 角结构形成与稳定性提供了良好的模板.β-转角在溶液中可以独立存在,表明β-转角在 蛋白质折叠过程中可能具有重要作用.     

单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证

建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法.用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N-末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础.     

用N,N-二甲基六烷基溴化铵涂层的毛细管对重组促红细胞生长素及其酶解产物进行毛细管电泳和毛细管电泳-电喷雾质谱分析

采用毛细管电泳技术研究了重组促红细胞生长素(rhEPO)的分离问题。用N,N-二甲基六烷基溴化铵（6,6-ionene）涂层的毛细管测定了rhEPO中唾液酸的微多相性,同时采用毛细管电泳-质谱(CE-MS)联用技术在22 min内鉴定了rhEPO 20段胰酶消化肽中的11段。该方法简单快捷,重现性好,可用于蛋白质一级结构的测定。     

天然氘核磁共振测定一级和二级动力学氘同位素效应 Ⅰ.内标的分子内与分子间竞争法

应用氘核磁共振,而不用特别氘代化合物同时测定一级和二级动力学氘同位素效应.其特点是采用外标,并同时考虑分子内和分子间竞争.用建立的方法测定了甲苯、乙苯及异丙苯的一级、α-及β-二级效应值.     

溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定电泳分离蛋白的C端序列

C端测序是蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的重要依据。建立了溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定蛋白质C端序列的方法,并应用于重组人肿瘤坏死因子受体和纽兰格林的C端测序。首先根据待测蛋白序列进行溴化氰理论裂解,如果C-端肽段理论分子量在500~5000U之间,则将待测样品进行SDS-PAGE分离,考马斯亮兰染色,然后进行胶内溴化氰裂解,最后应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定C-端肽段的分子量,电喷雾串联质谱对C端肽段进行测序。应用本方法分别测定了这两个蛋白质C端19个和11个氨基酸残基序列。研究结果表明:本方法灵敏、有效、实用性较强,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制和蛋白质的结构确证,是对目前蛋白质C端测序方法的有效补充。     

依据氨基酸残基的相关性预测蛋白质的结构类型

作为蛋白质的建筑构件,各种类型的蛋白质的20种氨基酸残基之间存在着特定的相互关联,反映了氨基酸残基之间的制约性,并有深刻的物理和化学的内在因素.某些氨基酸残基对之间的相关系数可以作为一种类型的蛋白质区别于其它类型蛋白质的特征,用于蛋白质结构类型的预测.研究了4种类型的蛋白质204个样品的氨基酸残基对的相关性系数,找出了可作为蛋白质结构类型特征的氨基酸残基的相关对,并用于蛋白质结构类型的预测,对于α型、β型、α/β型和α＋β型蛋白质的204个蛋白质样品的交叉测试,正确率分别为94％、89％、79％和89％,平均为88％,高于简单距离法和欧几里德距离法.     

小分子α-螺旋模拟物

本文综述了近年来小分子α-螺旋模拟物的研究进展,介绍了α-螺旋结构在蛋白质相互作用中的重要性以及小分子α-螺旋模拟物在药物化学领域的应用。概括了联苯结构、酰胺结构、哒嗪结构及其他杂环结构小分子α-螺旋模拟物的最新进展,并介绍了小分子α-螺旋模拟物在蛋白质相互作用抑制剂方面的应用。总结了目前已有的小分子α-螺旋模拟物存在的一些不足之处,并对今后该研究领域的发展方向进行了展望。     

MALDI-TOF-TOF-MS对完整蛋白质C端序列的直接测定

C端序列测定是蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的必检项目.本文建立了基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-FOF-TOF-Ms)串联质谱的源内裂解(IsD)技术进行蛋白质c端的测定方法.此方法成功应用于纽兰格林(Neuregulin)、TP-Ⅱ、泛素(ubi)和肌红蛋白(myo)的C端测序,且分别检测到了c端的10、24、24和36个氨基酸残基.该方法简便快速,适用于部分蛋白药物的质量控制和结构确证.     

表面等离子体共振技术在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的应用

表面等离子共振(SPR)近年来迅速发展为用于分析生物分子相互作用的一项技术.该技术无需标记、特异性强、灵敏度高、样品用量小,可实现在线连续实时检测.目前SPR已被广泛应用于免疫学、蛋白质组学、药物筛选、细胞信号转导、受体/配体垂钓等领域.该文阐述了基于表面等离子体共振技术生物传感器的基本原理和技术流程,综述了SPR在蛋白质-蛋白质相互作用动力学研究、蛋白质结构及功能研究、蛋白质突变和碎片分析、信号转导中的应用以及SPR在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的多项关键技术.指出SPR通过与光谱、电化学等多技术联用后,可以获得更加详实的信息.     

氨基酸广义信息因子分析标度组合支持向量机模型用于β-turns预测及特征分析

提出一种新的组合方法用于β-turns预测和特征分析.该方法包括两步:如何表征β-turns特征和如何构建其预测模型.第一步应用氨基酸广义信息因子分析标度表征蛋白质中β-turns的结构特征,该标度涉及氨基酸的疏水性、α-螺旋与转角倾向、体积性质、构成特征、局部柔性及静电性.第二步以426个蛋白质为训练集样本,通过留1/7法交互验证,基于支持向量机建立β-turns预测模型.该模型分别成功地预测547和823个蛋白的β-turns.所得结果与所对比方法结果相当,更重要的是,SVM模型提供了一些关于β-turns特征的重要结构信息.该组合方法可以进一步尝试用于蛋白质结构预测及特征分析.     

^1H NMR选择检测新技术用于新三萜皂苷的结构研究

从中药川续断根部的乙醇提取物中分得1个新的三萜皂苷,经过测定,其结构为:3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1--3)-β-D-吡喃葡萄糖(1--3)-β-L-吡喃鼠李糖(1--2)-β-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤苷元(1).研究表明,采用一维SEMDY和三照射NOE差谱NMR新技术相结合能以"拼凑"方式,测定糖链结构.方法简便、快速、测定结果可靠,重叠的信号可以指认,并且对样品不必进行化学降解或衍生化.本方法也可以用于其他类型的寡糖结构测定。     

取代基对蒽醌的羰基与Eu(fod)~3核磁位移试剂配位能力的影响

用镧系元素的β-双酮螯合物作为核磁位移试剂日益广泛.关于它的作用原理、配位物的结构和平衡常数的研究以及它的应用(特别用于构象分析)已有综述.我们用三(1,1,1,2,2,3,3-七氟-7,7-二甲基-辛二酮-4,6)铕(Eu(fod)_3)测定了八个蒽醌取代物,求出了各蒽醌环质子的镧系诱导位移(LIS),并按照文献[3—5]介绍的方法用假接触模型进行了计算。根据测定及计算结果,讨论了取代基的电子效应与空间效应对蒽醌的羰基与Eu(fod)_3配位能力的影响。     

蛋白质顺序测定技术(三)

三、蛋白质的化学降解~([1,2,3,4]) 在蛋白质一级结构的测定中,化学降解也是一个很重要的手段。一般化学降解的肽段都比较大,适合于在自动液相顺序仪中测定顺序,同时也有利于肽段次序的排列,但因肽段较大,分离困难,往往碰到不溶解和集聚等问题,产率也比较低。蛋白质化学降解常用的方法有。1.用溴化氰`~([5])(CNBr)降解蛋白质中的甲硫氨酸;2.用二甲基亚砜(DMSO)~([6])和卤氢酸等降解蛋白质中的色氨酸;3.用羟氨降解蛋白质中-Asn-Gly-结构;4.用稀酸~([?])部份降解蛋白质中Asp等。现在分述如下: (一)溴化氰降解用溴化氰降解蛋白质中的甲硫氨酸是化学降解中最常用的方法,特别是反应专一,产率比较高。又由于蛋白质中甲硫氨酸数目较少,因此降解后肽段数目也比较少,有利于肽段次序的排列。其反应机理如下:     

蛋白质结构的FT-IR研究进展

随着蛋白质使用领域的增加,迫切需要知道它在不同环境中的结构特征及生物活性。目前,测定蛋白质结构的方法很多,包括X射线衍射技术、圆二色光谱(CD)、质谱、FT-IR等。FT-IR(傅立叶变换光谱)法不仅能够测定不同环境中的蛋白质结构及生物活性,而且能够测定其二级结构的相对含量。本文简要综述FT-IR技术用于蛋白质结构的研究进展。