嗜热厌氧产乙醇杆菌乙醇代谢途径的初步研究

以乙醇产量和细胞密度的提高为目标,从碳源和氮源入手,对嗜热厌氧产乙醇杆菌THermoanaerobacter ethanolicus JW200的培养基作了初步优化以提高乙醇代谢途径中的关键酶的得率,便于提纯.葡萄糖浓度的提高对乙醇的产生有明显的诱导作用,但当葡萄糖浓度高于2%,乙醇产量反而下降.酵母粉对乙醇产量没有促进作用,单纯提高酵母粉浓度对细胞密度无显著影响,而同时提高葡萄糖和酵母粉浓度至2.0%,OD600最高可达2.0.2%葡萄糖,0.5%酵母粉对单位细胞乙醇产量的诱导效果最佳.T.ethanolicusJW200粗酶液中未检测到丙酮酸脱羧酶的活性,经亲和柱Cibacron Blue-3GA部分纯化,在NAD洗脱蛋白中检测到辅酶A依赖型乙醛脱氢酶的活性,表明辅酶A依赖型乙醛脱氢酶是该菌乙醇代谢途径中的关键酶,它和乙醇脱氢酶共同作用,将乙酰辅酶A转化成乙醇.     

嗜热厌氧杆菌乳酸脱氢酶敲除对乙醇发酵的影响

为提高乙醇产率,通过同源重组的方式敲除嗜热厌氧杆菌乳酸支路中的乳酸脱氢酶基因,得到了嗜热厌氧代谢工程菌Δldh突变株.应用葡萄糖、木糖、葡萄糖/木糖混合糖3种碳源,分别对Δldh突变株与野生菌进行分批补料发酵产乙醇的研究.结果表明,与野生菌相比,Δldh突变株不仅显著提高了乙醇产率,而且提高了糖的消耗速率;Δldh突变株与野生菌都能以葡萄糖和木糖为基质生长,而与木糖为单一碳源相比,在葡萄糖/木糖共发酵时,木糖消耗速率有所降低;在以葡萄糖为单一碳源时,Δldh突变株的乙醇质量浓度和产率达到最高,分别为25.93 g/L和0.39 g/(L.h).     

极端嗜热厌氧纤维素分解菌基因文库的构建及其内切葡聚糖酶基因片段的克隆

以从云南邦拿掌温泉中分离、纯化的高温厌氧纤维素分解菌邦2菌(Cadicellulosiruptor)为材料,制备其总DNA,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ部分酶切后,在T4DNA连接酶的作用下与经EcoRⅠ完全酶切、去磷酸化的质粒载体pUC18连接,然后转化E.coliJM109,建立了邦2的基因文库,经筛选鉴定得到6.3×103个重组子;重组子经刚果红平板验证:约有23.5%菌落呈现透明圈;重组子经EcoRⅠ酶切验证显示:重组质粒均含有外源DNA插入片段.结果表明已克隆到邦2菌纤维素酶系中的内切葡聚糖酶基因(ED基因)片段.     

嗜热厌氧梭菌直接发酵造纸污泥的基本特性

为有效利用造纸污泥中的纤维素和半纤维素,研究了嗜热厌氧梭菌Clostridiumthermocellum在不同底物特别是在造纸污泥中发酵的基本特性及相应的纤维素酶和木聚糖酶基本性质.结果表明:C.thermocellum能够直接发酵没有经过任何预处理的造纸污泥,具有作为生物联合加工(CBP)菌株的良好潜力;在化学制浆污...     

极端嗜热纤维素分解菌分子特征

从云南邦拿掌温泉中采集样品，经过多次富集、筛选，最后分离出6株高温严格厌氧纤维素分解细菌，通过随机扩增多态性DNA(RAPD)分析，研究了这6株形态、生理、代谢特性相似的高温严格厌氧纤维素分解茵的遗传多样性，并根据实验统计数据作出6株茵的亲缘关系图，同时对产酶活性较高的B7细菌进行16SrDNA序列分析，确定了其系统分类地位。     

双歧杆菌与嗜热链球菌混菌培养研究

研究了短双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅ）和嗜热链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｈｕｓ）的选择性培养条件,探讨了两菌在单一菌种培养和混菌培养状况下的菌体生长和产酸特点,发现该两菌种之间的生长及产酸存在着明显的互相促进作用,在牛乳培养基中混菌培养状况下两菌的生长及产酸代谢均优于单菌种培养．在两菌的接种量体积分数各为１％的条件下,不但能获得较高的活菌数,而且凝乳状态及风味都比较好．     

嗜热链球菌增菌培养基及培养条件的优化

以玉米粉酶解物和大豆蛋白水解物为主要原料,以蔬菜汁为促生长物质,考察培养基的组成、接种量、起始pH和温度对嗜热链球菌增菌的影响.试验发现,复合蔬菜汁具有协同增菌作用,芹菜汁:胡萝卜汁∶竹笋汁=2∶2∶1时,增菌效果较好;以正交试验设计对影响增菌的培养液组成、复合蔬菜汁添加量和接种量进行优化,得出增菌培养的最佳工艺:在100 mL大豆蛋白水解液和玉米粉酶解物的培养液(体积比为45∶55)中,添加复合蔬菜汁30 mL,以5％的接种量,起始pH 6.8,42℃培养20 h,嗜热链球菌增菌效果最好.     

嗜盐嗜碱菌的研究新进展

嗜盐嗜碱菌是嗜盐古菌中重要的组成类群,不仅为微生物生理,遗传和分类及生命科学和相关学科许多领域的研究提供新的课题,也为生物进化,生命起源的研究提供新的材料.文章主要讨论了嗜盐嗜碱菌的分类和嗜盐嗜碱机制方面的研究进展.     

嗜盐嗜碱菌的研究进展

嗜盐嗜碱菌是嗜盐古菌中重要的组成类群,不仅为微生物生理,遗传和分类及生命科学和相关学科许多领域的研究提供新的课题,也为生物进化,生命起源的研究提供新的材料。文章主要讨论了嗜盐嗜碱菌的分类和嗜盐嗜碱机制方面的研究进展。     

嗜热光合酸杆菌Fenna-Matthews-Olson蛋白的分离、纯化与结晶

为了获得可用于X射线衍射分析的嗜热光合酸杆菌(Chloracidobacterium thermophilum,C.thermophilum)Fenna-Matthews-Olson (FMO)蛋白晶体,进一步探究FMO蛋白结构和功能,依次采用高浓度碳酸钠溶液浸泡、蔗糖密度梯度离心和二乙基氨基乙基葡聚糖凝胶阴离子交换层析方法,直接从嗜热光合酸杆菌中分离、纯化FMO蛋白;利用凝胶过滤层析及十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对该蛋白的均一性和纯度进行检测;分别使用坐滴法和悬滴法对蛋白结晶条件进行筛选和优化,并对优化的蛋白晶体进行X射线衍射分析。结果表明：制得的嗜热光合酸杆菌FMO蛋白纯度较高,性质均一;当温度为16℃、FMO蛋白质量浓度为15.0 g/L、池液中乙酸铵浓度为0.25 mol/L、缓冲液三羟甲基氨基甲烷-氯化氢浓度为0.1 mol/L、 pH为9.0,以及2-丙醇体积分数为32%时,可获得质量较好且最大衍射分辨率为0.235 nm的嗜热光合酸杆菌FMO蛋白晶体。     

酵母醇脱氢酶的分离纯化

报道了酵母醇脱氢酶的分离纯化，使用硫酸铵分级沉淀，SephadexG—100凝胶层析技术，从啤酒酵母提取液中分离出醇脱氢酶，收得率为10．9％，纯化倍数达53．2。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化

报道了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化. 在0.1 mol/L的碳酸氢钠溶液中,以溶胀法从酵母中提取胞内酶.粗抽提液经过60 %～75 % 饱和度的硫酸铵盐析, Sephadex G-100凝胶柱层析.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的收得率为12.4%,纯化倍数达51.2.     

植物乳杆菌产乳酸脱氢酶的发酵条件优化及酶的纯化

对植物乳杆菌突变株RS2 2的发酵条件做了优化, 在25 L发酵罐上进行放大实验, 使菌株RS2 2的乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase）产酶水平有了较大提高, 细胞抽提液比酶活达到24.6U/mg．利用DEAE离子交换、 疏水层析对酶的纯化进行 了研究, 最终酶的纯化倍数为49.1, 比活力达1　208.6 U/mg,初步确定了LDH的纯化路线.     

Acetobacter Z127乙醇脱氢酶的纯化及酶学性质

利用自行筛选、鉴定的Acetobacter Z127,纯化出高活性的乙醇脱氢酶,并对该酶的生化特性进行了初步研究.试验表明：粗酶液通过硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、Sephadex G-100层析分离,纯化出一种以NAD^＋为辅酶的ADH,经SDS-PAGE电泳检测其分子量为28KDa;ADH反应的最适pH值为7.0,最适温度为60℃,K^＋离子对其酶活有促进作用,二价金属离子对其活性有抑制作用,Fe^3＋极易使ADH产生沉淀.研究为ADH的应用及其新用途的探索提供了理论基础和可靠的工艺参数.     

羊心肌乳酸脱氢酶的纯化及性质研究

建立了一种较为简单、高效的羊心肌乳酸脱氢酶的纯化工艺,经硫酸铵分级沉淀及DEAE-Sepharose离子交换层析纯化,可以得到纯度较高的乳酸脱氢酶,酶的比活力达106.67 U/mg,纯化倍数达54.7,酶活力总回收率为48.6%.酶学性质的研究表明:其最适反应温度为50℃,最适反应pH值为7.8,在25~45℃条件下能够保持较高的酶活力,60℃后酶活力下降较快.1.0 mmol/L的Mg2 、Fe2 、Ca2 ,0.5 mmol/L的Ca2 对酶活力有促进作用;1.0 mmol/L和0.5 mmol/L的Cu2 和Fe3 ,1.0mmol/L的Ni2 ,0.5 mmol/L的Mg2 和Fe2 对酶活力有抑制作用;Co2 的作用不太明显.     

Separation and Purification of Betaine Aldehyde Dehydrogenase from Wild Suaeda liaotungensis

High active betaine aldehyde dehydrogenase (BADH,EC1.2.1.8) is found in wild Suaeda liaotungensis.The enzyme is purified 206-fold with recovery of 1.5%,It have a spectific activity of 2363 nmol/min.mg protein and the molecular mass of each subunit is 64.5kDa as determined by SDS-PAGE.     

枯草杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

采用DEAE—Sephaurose离子交换层析，Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术，对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化，纯化倍数为112．3倍，比活为1．46U／mg，回收率为8．2％，纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带，测得全酶相对分子质量为107kD，具有两个分子量相同的亚基，亚基相对分子质量为51kD，最适pH值为8．0，最适温度为30℃，对热不稳定，以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物，其Km值分别为Km1(NADP^ )=19．8μmol／L和Km2(6-GPA)=22．6μmol／L，在5mmol／L～50mmol／L浓度范围内，Mg^ ，Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用，Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用，K^ ，Na^ ，Cl^-，NO^-3，SO^-4对酶几乎没有影响，用PMSF，TNBS，NBS，DTT和BrAc对酶进行修饰，实验结果表明，丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。     

琥珀酸脱氢酶的纯化研究

以玉米黄化苗为生物材料，将其捣碎后，通过差速离心获得线粒体，使用超声波将其破碎，用2％Ttiton X-100溶膜，超速离心，硫酸铵沉淀，DEAE－C32层析纯化琥珀酸脱氢酶，纯化倍数为12倍，电泳图谱显示一条带。     

乙醛光催化降解的动力学研究

利用气相色谱分析技术，在自制的间歇式循环反应系统中对乙醛的气-固相光催化降解动力学行为进行了实验研究．结果表明：当乙醛初始浓度较高时，如果催化剂表面辐射强度较低，则反应过程处于光子传递控制过程，反应速率与光强成正比，若催化剂表面辐射强度较高，则反应过程符合Langmuir-Hinshelwood动力学方程；当乙醛初始浓度较低时，随着紫外光辐射强度从低到高变化，光催化反应均为一级反应过程，反应速率常数随着光强的增加而增大，但当光强大于11．6W／m^2时，光催化反应过程处于表面作用控制过程，光强的提高对反应速率不再有促进作用．