碱性脂肪酶产生菌的筛选与产酶条件及酶学性质研究

作者从泸州油脂厂附近的土壤中,筛选到一株产碱性脂肪酶活性较高的细菌,经初步鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.).经对该菌株进行产酶条件和酶学性质研究发现,该菌株的最适产酶发酵培养基为(%):酵母浸出汁1.5,黄豆粉1,NaCl0.2,K2HPO40.2,NaH2PO40.2,MgSO4·7H2O0.01,初始pH8.5.100mL三角瓶装液10mL,30℃,150r/min摇床培养48h,酶活最高可达19.1U/mL.酶的最适反应温度40℃,最适pH8.5,该酶具有较好的热稳定性.     

米根霉产脂肪酶的条件及酶学性质

对用于全细胞生物催化剂的米根霉菌株产酶条件的优化及脂肪酶的酶学性质进行了研究。结果表明,在250 mL三角瓶液体培养中,米根霉适宜的产酶条件为：氮源为2%胰蛋白胨与0.1%NaNO3复合,碳源为0.3%的大豆油,培养基初始pH=5.5,培养温度28℃,培养时间约58 h。酶学性质研究表明,所产脂肪酶的最适pH=7.5,最适温度为35℃,该酶在pH为7~9、温度低于40℃的范围内表现稳定,Mg2+对酶活力有一定促进作用。     

脂肪酶菌株筛选、产酶条件优化及粗酶性质研究

从西藏传统食品中分离出一株生产胞外脂肪酶的菌株,通过分子鉴定和形态观察,确定其为黑曲霉AN0512.本文优化了AN0512的产酶条件,并研究了粗酶性质.结果表明,采用植物油1%(v/v)、酵母提取物1%(w/w)、KH2PO40.2%(w/w)、MgSO40.05%(w/w)、KCl0.05%(w/w)等组成的培养基,接种量为1.5%(v/v)时,在28℃、180r/min下培养96h后,发酵液中脂肪酶活性最大达到30IU/mL.在30℃、pH7.0的酶反应条件下粗酶的脂肪酶活性达到最大;在60℃时粗酶仍保留60%以上的脂肪酶活性,显示其较好的耐热性;Ca2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+能促进粗酶的活性,其中Fe2+的促进作用最大.粗酶液中应含有活性较高的、耐热的低温金属脂肪酶.     

产CGTase菌种的分离筛选及酶学性质的研究

本文重点报道了产ＣＧＴａｓｅ的ＮｏＦＬ＿（１６８）菌株的分离筛选、生理特性及ＮｏＦＬ＿（１６８）ＣＧＴａｓｅ的酶学特性（ｐＮ、温度）对酶活性及稳定性的影响。ＮｏＦＬ＿（１６８）菌株是从沧州等地的土样中筛选出来的，该菌株嗜碱性强，产酶活力较高。     

一株脂肪酶的筛选和产酶条件及其酶性质的研究

从东营油污样中分离获得一株产脂肪酶的菌株BYCM-1,经鉴定为根霉属.研究了该菌株的产酶条件及其酶性质.研究表明该酶最适的产酶条件为:培养基初始pH 6.5,温度40℃,培养时间72 h.酶作用的最适pH值为8.0,最适温度为40℃.Ca2 和K 对酶活性有一定的激活作用,而Mg2 ,Cu2 ,Fe2 对酶活性有不同程度的抑制作用.     

低温脂肪酶产生菌筛选与鉴定、产酶条件及酶学性质研究

 昆明东站一家屠宰厂冷库中筛选到14株产脂肪酶低温菌株.选取1株胞外低温脂肪酶高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为Yersinia enterocolitica的一株菌,命名为KM1.对该菌发酵产酶条件研究,发现其最佳产酶发酵条件为:培养温度13℃,pH7.2,摇瓶培养时间54h.在最佳产酶发酵条件下酶活由1.8U/mL提高到3.1U/mL,提高了72%.对该菌脂肪酶的酶学性质研究表明:在0℃时仍具有最高酶活的20%,最适反应温度37℃,最适反应pH为9.0.在25℃以下,pH7.2～10范围内均能保持良好的稳定性.该酶在有机溶剂中较稳定,即使在50%的甲醇中仍能保持60%以上的活性,该酶的最适底物为C₈的酯化物,且对C₄～C₁₂的酯化物均有较好的催化能力.     

红树林土壤中脂肪酶产生菌的筛选及酶学性质

从福建龙海红树林区土壤中分离获得9株产脂肪酶的细菌,经16S rDNA序列分析表明分别属于红球菌属(Rhodococcus)、库克菌属(Kocuria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽胞杆菌属(Bacillus)和微小杆菌属(Exiguobacteri-um).对9株细菌所产的脂肪酶进行酶学性质研究,结果显示这些酶的最适作用温度在25~35℃、最适作用pH值在8~10,其中L13菌株所产脂肪酶(L′13)具有适应温度和pH范围较广、对多种金属离子耐受性强、能有效降解不同底物等特点,在环境保护和工业生产方面具有良好的应用前景.     

糙皮侧耳Ax3产漆酶条件及部分酶学性质研究

对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)Ax3菌的漆酶产生条件进行了研究，该菌产漆酶较高的条件是：培养温度25℃，培养基pH5．5，每升C／N含量0．252g／0．021g；加入0．05％～0．1％的吐温可提高漆酶酶活12倍。对漆酶的部分生化性质研究表明：最适反应温度25℃；最适反应pH2．8；琥珀酸缓冲液效果最好；金属离子：Mn^2 ，Cu^2 ，Zn^2 对漆酶有较强的激活作用，其中Mn^2 相对活性最高，Ag^ ，K^ ，Ca^2 ，Fe^2 对漆酶活性有抑制能力，其中Ag^ 的抑制作用明显。     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34.5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9.6.该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)的同源性为99%.摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为(g/L):淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO41,聚乙烯醇大豆油乳化液20.其最高酶活为6.87 U/mL.     

产胞外脂肪酶菌株的筛选及底物测定

文中采用简便快速的平板检测法，通过观察培养基上生长的菌落直径和其水解圈直径的大小，进行初筛。再用液体培养，采用滴定法测定酶活性，进行复筛筛选出１０株优良菌株。活性最高为４．４５×１０－８ｍｏｌ／ｓ，其中Ｄ６菌株以苏籽油、亚麻油和月见草油为底物，酶活性分别达到１４．２９×１０－８ｍｏｌ／ｓ，１０．９０×１０－８ｍｏｌ／ｓ和１１．３５×１０－８ｍｏｌ／ｓ。     

产脂肪酶假丝酵母的筛选及其研究

从武汉油污样中分离获得一株高产脂肪酶酶的假丝酵母R－2．发酵研究表明,最适培养基为蛋白胨20g/L,蔗糖10g/L,橄榄油5g/L,(NH4)2SO41g/L,MgSO4.7H2O1g/L,K2HPOR1g/L和吐温－801g/L,最适产酶条件为30℃,初始pH7．0,转速200r/min,培养32h ,最高产酶活力达到1437u/mL,酶作用最适温度40℃,最适pH7.5。     

脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

目的筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.     

肉色曲霉产碱性脂肪酶发酵条件的研究

对肉色曲霉产碱性脂肪酶的发酵条件进行优化,摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基组成为（%）：黄豆饼粉2,NH4NO3 0.5,玉米粉1,糊精1,柠檬酸钠0.1,K2HPO4 0.5,FeSO4 0.006,大豆油0.6,吐温-800.5mL,pH 9.0.最适产酶温度为28℃,产酶高峰出现在96小时,最佳装液量为35mL,碱性脂肪酶菌株的酶活可达9.3U/mL.脂肪酶的最适作用pH为9.0,最适作用温度为30℃.     

2株溶藻菌培养条件优化及溶藻特性研究

对分离自山东黄岛和江苏太湖两处富营养化池塘中的2株溶藻细菌的培养条件进行了优化,探究了2菌株对铜绿微囊藻生长的抑制作用.实验结果显示,2菌株可通过凝聚藻体细胞、裂解微藻细胞体以及胞外分泌活性物质产生生物降解作用,对铜绿微囊藻产生杀灭效果,且分泌的胞外活性物质对铜绿微囊藻的杀灭作用具有特异性.     

产碱性脂肪酶酵母菌的分离与鉴定

从成都龙泉果园采集的160份土壤样品中，通过观察油脂平板上水解圈直径与菌落直径的大小之比(D／d)，分离到12株产碱性脂肪酶的真菌，采用滴定法测液体培养物酶活进行复筛，获得一株产酶活性最高的酵母菌，通过对该酵母菌进行形态、生理生化特征的观察与测试，初步鉴定为胶淀粉假丝酵母，命名为Candida amylolenta L-30。     

一株产耐热碱性脂肪酶芽孢杆菌的筛选及其所产酶性质的研究

从武汉市白沙洲沙鸥食用油总厂分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶的产生菌,经鉴定为产邪包的短杆菌、革兰氏阳性、该菌株的最适生长温度为４５℃,所产酶的最适作用温度为６０℃,最适ＰＨ为１０．０,且ＰＨ在８．０－１１．０范围内酶蛋白性质稳定。     

小鼠腹水癌细胞脂酶的亲和制备及一些性质的研究

在接种了血癌(L—7712)及腹水癌(Hep.A)的小鼠腹水癌细胞中存在远高于正常细胞的脂酶(Lipase)活力.本文通过免疫亲和层析方法从小鼠腹水癌细胞中纯化了该脂酶,比活力达到2000国际单位/mg.蛋白.经 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度达电泳纯,为单亚基酶.分子量65kd.经等电聚焦电冰分析,等电点(PI)为5.3.     

脂肪酶固定化方法的研究进展

对固定化脂肪酶的4类方法进行了分析及比较,对近年来固定化脂肪酶方法的研究进行了综述,为固定化方法的进一步探讨提供了研究基础。