Saxiptlilin蛋白分离纯化及其活性测定

Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素(PSPs)特异性结合的可溶性血清蛋白,利用超滤离心及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化Saxiphilin活性蛋白使其达到一定纯度,通过酶联免疫检测技术对其活性进行研究.结果表明:分离纯化目标蛋白时,采用pH值为6.5的Tris-HCl缓冲液,使用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为5.9和11.2,回收率为67.8%和50%.通过SDS-聚丙酰胺凝胶电泳验证其分子量为90kDa,并通过毒素粗蛋白的结合曲线可得粗蛋白与PSP浓度比达到46.86时,目标蛋白结合PSP毒素的量达到饱和.将Saxiphilin蛋白应用于微量滴定板来检测PSPs,具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点.     

抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白的制备及其活性

采用婴幼儿轮状病毒抗原免疫产卵母鸡，然后用ＰＥＧ两步沉淀分离鸡卵黄中抗轮状病毒免疫球蛋白，经离子交换层析及凝胶层析纯化抗－ＨＲＶＩｇＹ。此ＩｇＹ经免疫扩散，免疫电镜、ＥＬＩＳＡ检测均证实其具有特异抗ＨＲＶ活性。     

剧毒卡罗藻GM5株中标志性毒素4,5-dihydro-KmTx2的色谱制备

建立了剧毒卡罗藻GM5株中标志性毒素4,5-dihydro-KmTx2的分离纯化体系, 通过高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对其纯化效果进行评价. 过滤后的培养液经大型固相萃取柱(YMC-GEL ODS-A-HG, 80 cm×10 cm, 12 nm, S-50 μm)进行富集, 依次用体积分数为10%、40%和60%的甲醇溶液进行淋洗, 体积分数为80%的甲醇溶液进行洗脱, 得到目标化合物粗提液(纯度为51.3％). 采用半制备型高效液相色谱技术进一步分离纯化, 使得目标化合物纯度高达93.2％. 该方法提取及纯化效率高, 可操作性强, 可以为4,5-dihydro- KmTx2的规模化生产及功能活性研究提供技术支持.     

一种池蝶蚌多糖的分离纯化、表征特性及体外抗氧化活性

首次从淡水育珠贝类池蝶蚌中得到多糖组分,探讨了相关提取工艺、理化特性以及体外抗氧化活性。Sevag工艺重复5次游离蛋白清除效果最佳,粗多糖经sevag纯化得率达到20.8%;通过离子交换树脂(DEAE-52)及葡聚糖凝胶柱层析(Sephacryl S-300)分离纯化得到池蝶蚌多糖(HSP-1),纯度达到97.5%;测定HSP-1的部分理化特性,测得其分子量为2 204Da,其单糖组成由64.8%的葡萄糖、17.4%的阿拉伯糖以及17.8%的葡糖醛酸组成;抗氧化活性测定结果表明,HSP-1对于DPPH、超氧自由基、羟自由基的最大清除率分别是62.16%,58.65%和45.21%。根据结果 HSP-1具有明显的抗氧化能力。     

泰和乌骨鸡肉模拟胃肠道消化液中ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

研究泰和乌骨鸡肉在胃肠道消化过程中的降血压活性,并鉴定出其中确定具有降血压活性的肽序列。采用体外模拟胃肠道消化法,测定了不同阶段消化液对血管紧张素I转化酶(ACE)的抑制作用,并选择其中的小肠道消化液,对其进行超滤、制备型反相高效液相色谱、凝胶柱色谱分离纯化,最后通     

螺旋藻C-藻蓝蛋白亚基分离及抗肿瘤活性研究

为解决C-藻蓝蛋白分子较大,难以直接与细胞发生作用的问题,对藻蓝蛋白亚基的分离纯化方法进行研究,并初步探讨了其对肿瘤细胞的抑制作用.对通过热变性、盐析和自制的羟基磷灰石吸附层析,从钝顶螺旋藻中获得高纯度的藻蓝蛋白(C-PC,A620/A2804.5).C-PC用8 mol.L-1的尿素溶液变性,过CM-Sepharose F.F.阳离子交换层析、透析、复性,获得具活性的C-PC亚基.用CCK-8试剂盒分别研究了C-PC、α和β亚基对一个肺腺癌细胞株SPC-A-1的生长的影响,结果表明藻蓝蛋白及其亚基对该细胞株的生长具有抑制作用,β亚基效果最好,预示着它们具有一定的抗肿瘤潜力.     

海洋紫色杆菌β-琼胶酶的分离纯化及性质

从青岛近海海水中分离得到一株高产琼胶酶的海洋紫色杆菌SY12.紫色杆菌SY12的发酵液上清经硫酸铵沉淀,凝胶过滤层析,离子交换层析和凝胶过滤层析等蛋白纯化步骤,得到纯化的野生琼胶酶AgaY.琼胶酶纯化了133.63倍,酶比活力为320.7 U/mg;纯化的琼胶酶经SDS-PAGE检测,显示为单一条带,其相对分子质量约为50 ×103.研究结果表明琼胶酶AgaY降解琼脂糖的β-1,4-糖苷键,其主要产物为新琼四糖和新琼二糖.对AgaY进行酶学性质研究,发现其最适反应pH为7.0,最适反应温度为40 ℃;Hg2 ,Ag ,Zn2 ,Cu2 和Pb2 等金属离子可以显著的抑制琼胶酶AgaY的活力.研究发现,AgaY的催化活性不依赖于离子的存在,AgaY对EDTA不敏感.     

无花果多糖的分离、纯化和鉴定

经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、酶-Sevag法脱蛋白得到粗多糖,再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析和Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析得到纯化的无花果多糖(FCPS),用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖.红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰.结果表明,所提取的无花果多糖为单一组分的多糖.     

人γ干扰素 /β 肿瘤坏死因子融合蛋白 His6融合表达及一步纯化

将人 V干扰素 /U肿瘤坏死因子融合蛋白 (hVTNF-U )重组基因克隆于表达载体 pET28,构建成 T7 lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E. coli BL21( DE3).经 IPTG(1mM )诱导表达 , 阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗表达带 ,其分子量 (32kDa) 与目的蛋白 H is6-V TN F-U ) 理论分 子量相符. 薄层扫描与溶解性分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 45% 以上 ,主要为不溶性的包涵体 ( IBs).离心分离 IBs产物 ,溶于 7M尿素中 ,然后通过 Ni柱进行亲和层析 ,即可获得一步纯化的表达产物 (纯度为 96%、回收率为 91% ).纯化产物再经复性缓冲液稀释复性 ,其细胞毒比活性与抗病毒比活性分 别达到 1. 2× 10 7～ 2. 0× 107u /mgp和 6. 6× 10 5 ～ 7. 2× 105 u/mgp.     

酵母细胞壁主要结构蛋白CWP33的纯化与研究

在酵母Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ细胞壁上发现一种细胞壁主要结构蛋白（ＣＷＰ３３），其分子量为３３×１０３，与其它细胞壁蛋白不同，该蛋白在细胞壁上对胰蛋白酶作用不敏感，而其它细胞壁蛋白组分几乎完全被胰蛋白酶降解．利用这一性质将该蛋白从细胞壁上抽提后，经ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ凝胶层析得到纯化．经研究ＣＷＰ３３蛋白具有葡聚糖内切酶活性，可以水解地衣糖，但不能水解对硝基苯葡萄糖苷．该蛋白可能具有重要的结构功能．     

磷酸纤维素法分离纯化人绒毛膜促性腺激素

高纯度人绒毛膜促性腺激求(HCG)的制备方法已有许多报道，通常都采用DEAE一纤维家离子交换层析法和凝胶过滤法反复精制，价格昂贵.我们采用价格低廉的磷酸纤维素作为离子交换剂，来代替DEAE-纤维素，对具有15-20iu/mg生物效价的HCG粗品进行纯化，纯化后的HCG溶液，其紫外扫描图谱(22。一300nm)与典型的蛋白质扫描图谱一致，经聚丙烯酞胺凝胶电泳分析，可得一条清楚的蛋白质条带，SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳分析，可见两条清晰的蛋白质色带.     

温控表达载体的构建及HIV-1p24的表达与纯化

通过改造原核表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ 和ｐ Ｅ Ｔ２８,构建出了一种新的通用型温控原核表达载体ｐ Ｖ Ｖ５,该载体携带 Ｐｒ Ｐｌ串联温控启动子以及 Ｈｉｓ Ｔａｇ 的纯化标签,利于目的蛋白的表达与纯化将 Ｈ Ｉ Ｖ１ ｇａｇ 基因的１１４８１８５７ 编码序列分别插入到ｐ Ｖ Ｖ５ｂ、ｐ Ｅ Ｔ２８ｂ 的相应位点,构建了重组表达质粒 ｐ Ｅ Ｇ１ｂ、ｐ Ｂ Ｇ７ｂ,二者在不同受体菌中,表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的 ４２％ 和２８％ 表达产物为融合蛋白并主要以包涵体的形式存在 该蛋白 Ｎ 端与含６ 个组氨酸在内的３０ 个氨基酸残基的多肽相连,利用 Ｉ Ｍ Ａ Ｃ金属螯和层析柱,对包涵体中的重组ｐ２４ 蛋白进行纯化, 其纯度超过 ８０％ ;对上清中的可溶性ｐ２４ 蛋白进行纯化,产物最终纯度超过６７％ 纯化后的重组蛋白可与 Ｈ Ｉ Ｖ１ 型标准阳性血清发生较强的免疫学反应     

人胶质瘤细胞SWO-3 8神经营养活性物的初步分离

制备了人胶质瘤细胞ＳＷＯ－３８条件培养基（ＳＷＯ－３８ＣＭ）,经超滤浓缩,截留分子量大于１０ｋＤ的ＳＷＯ－３８ＣＭ,并运用快速自动比色微量分析法检测其对体外培养的ＳＤ大鼠小脑皮质神经元的作用,结果表明,分子量大于１０ｋＤ的ＳＷＯ－３８ＣＭ对神经元的作用,与对照组比较有明显的神经营养活性,分子量大于１０ｋＤ的ＳＷＯ－３８ＣＭ经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００－ＨＲ凝胶层析并结合生物活性鉴定,获得了具有神     

千层塔提取物废液中3,4-二羟基肉桂酸和3,4-二甲氧基肉桂酸的提取

利用高速逆流色谱(HSCCC)对千层塔提取物废液中含量较高的2个同系物进行初步纯化分离, 再利用高效液相色谱(HPLC)对收集到的样品进行同系物分离, 得到8mg化合物A, 7mg化合物B, 纯度均在95%以上. 经核磁共振仪(NMR)鉴定2个组分的化学结构, 结果证明, 千层塔提取物废液所含的主要成分即2个同系物分别为3,4-二羟基肉桂酸和3,4-二甲氧基肉桂酸. 结论也同时证实高速逆流色谱与高效液相色谱联用能够有效分离样品所含同系物, 且工业提取千层塔有效成分后的废液中仍含有价值物质.     

兔防御素NP1在大肠杆菌中的表达

通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔防御素基因进行改造，人工合成兔防御素基因并构建编码GST—NP1融合基因，从而在大肠杆菌中进行表达。研究表明：表达的蛋白质经过亲和层析洗脱纯化，SDS—PAGE电泳分析，在目的分子量处出现预期条带。灰度扫描分析表明，表达量最高可达细菌总蛋白的34．7％。经切割、复性后的防御素具有溶血活性。     

重组甲鱼载脂蛋白B的研制及其阻断STSSSV感染的活性初探

为了制备甲鱼(Pelodiscus sinensis)载脂蛋白B (Pelodiscus sinensis Apolipoprotein B, PApoB) 基因的原核表达产物, 并探索其是否具有阻断甲鱼系统性败血症球状病毒(Soft-shelled Turtle Systemic Septicemia Spherical Virus, STSSSV)感染的功能, 为最终控制和防治甲鱼系统性败血症疾病奠定基础, 构建了PApoB的原核表达系统, 纯化了重组PApoB, 并将其用于阻断STSSSV感染的分析: 根据甲鱼PApoB的基因序列, 设计引物, 扩增其第9932-11209bp(3294-3696 aa)区段, 将其连接至表达载体pET-28a(+)中, 转化大肠杆菌Rosetta株, 经硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 并用亲和层析法纯化获得了重组PApoB; 将FITC标记的STSSSV与PApoB孵育后对甲鱼细胞进行攻毒, 显微镜下观察, 结果PApoB添加组的病毒荧光信号明显低于非添加组, 表明该重组蛋白可以阻断STSSSV的感染.     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定紫菜中三丁基锡和三苯基锡

建立了紫菜中三丁基锡(TBT)和三苯基锡(TPhT)化合物同时分析的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法。紫菜样品用乙酸乙酯-正己烷(1/1,V/V)超声提取,提取液经活性炭固相材料分散净化后,高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析测定。TBT、TPhT均在4.0～20μg.L-1浓度范围内线性良好,相关系数分别为0.999 0,0.999 1,检测限分别为0.37,0.49μg.L-1。在3个添加水平下,TBT、TPhT的平均回收率为96.8%～112.6%,相对标准偏差为3.2%～9.3%。该方法快速、准确,可用于紫菜样品中TBT和TPhT的同时测定。     

氯化铯密度梯度离心法纯化叶绿体DNA

本方法用蔗糖密度梯度离心分离烟草及油菜纯化的叶绿体,然后用氯化铯密度梯度超速离心纯化叶绿体DNA.不加DNase处理,但从限制性核酸内切酶作用,经琼脂糖凝胶电泳得到的比较清晰的限制图谱,产物可用于制作物理图谱和DNA重组合.     

高效液相色谱内标法测定鸡蛋中氯羟吡啶的残留量

以4-二甲氨吡啶为内标,发展了一种高效液相色谱法,用于快速测定鸡蛋中氯羟吡啶的残留量。鸡蛋样品中的氯羟吡啶经乙腈匀浆提取,然后用碱性氧化铝柱富集,甲醇洗脱液浓缩后用流动相溶解残渣,0.45μm滤膜过滤后进样分析。色谱柱采用Platisil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为0.0