反相毛细管整体柱的制备及其在多肽混合物分离中的应用

采用甲基丙烯酸月桂酯为基础功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,正十二醇、1,4-丁二醇及二甲基亚砜为致孔剂,在内径为75 μm的石英毛细管内制备了具有良好机械性能及化学稳定性的反相毛细管整体柱。考察了致孔剂的种类、比例以及交联剂在单体混合物中的比例对柱压和分离效果的影响;以单体15%、交联剂15%、致孔剂70%(均为质量分数)作为优化配方,在70 ℃条件下反应24 h;并对所合成的毛细管整体柱进行了电镜表征,测试了流速、柱长与柱压的关系。结果表明,毛细管整体柱的通透性良好,可通过延长柱长的方法提高分离效果。将所制备的毛细管整体柱装于纳升级高效液相色谱仪上进行牛血清白蛋白及血浆样本的胰蛋白酶酶切液的分离,获得了比较理想的分离效果。     

聚(4-乙烯基苯硼酸-季戊四醇三丙烯酸酯)亲和整体柱的制备与应用

以4-乙烯基苯硼酸为单体,季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,乙二醇和二甘醇为致孔剂,经原位聚合制备了聚(4-乙烯基苯硼酸-季戊四醇三丙烯酸酯)毛细管整体柱.以单体、交联剂、致孔剂和引发剂的用量为4种因素,最大吸附量、柱效和保留时间为3个考察标准,利用实验设计软件(DOE)优化了其合成条件,验证了正交实验最优结果,得到了整体柱合成的最佳配比为单体7.32 mg,交联剂6 mg,致孔L剂100 μL,引发剂1 mg.在最佳条件下合成整体柱,并进行表征,在微径液相色谱(μHPLC)和加压毛细管电色谱(pCEC)实验中考察了分离特性.结果表明,整体柱固定相表面的硼酸基团在碱性条件下能特异性吸附邻苯二酚、腺苷等含有邻二羟基结构的化合物,具有亲和色谱的特性;同时由于交联剂的性质使其具有反相分离机理,在含有20％有机相的条件下能够将极性不同的苯系物分开.     

磺酸甜菜碱型两性离子亲水毛细管整体柱制备及应用

以3-[N,N-二甲基-[2-(2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基]铵]丙烷-1-磺酸内盐(SPE)为功能单体,季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)为交联剂,环己醇和乙二醇(EG)为致孔剂,通过原位聚合法制备磺酸甜菜碱型两性离子亲水毛细管整体柱。优化单体、交联剂和致孔剂的比例等因素,考察了不同SPE含量对整体柱性能和选择性的影响。在最优制备条件下,以苯酚类化合物、烷基苯类化合物和苯甲酸类化合物为分离对象,评价该整体柱的色谱性能以及分离机理。在不同的色谱条件下,该整体柱具有亲水、疏水以及离子交换作用。此整体柱在0.05 m L/min的流速下(线速度为0.265 mm/s)分离烷基苯类化合物时,柱效高达41000~56000 plates/m,该整体柱重现性良好,连续运行的重现性(RSD)低于1.2%。在亲水/离子交换色谱模式下,该整体柱可应用于核苷和碱基的高效分离。     

阴离子交换聚合物整体柱的制备及其在离子色谱中的应用

以偶氮二异丁腈( AIBN)为自由基引发剂,将甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)单体和亚乙基二甲基丙烯酸酯(EDMA)交联剂通过原位聚合的方法,在不锈钢管柱(150 mm ×4.6 i.d.mm)中合成为具有一定机械性能和一定孔径结构的聚合物整体色谱柱;利用三甲胺动态修饰反应将整体柱改性为具有阴离子交换功能的整体型离子色谱分离柱.实验优化了制备条件和改性修饰条件,考察了相关离子交换容量、流体动力学参数和色谱性能等.采用直接紫外检测的方法,在205 nm检测波长下,常规阴离子乙酸根、溴酸根、亚硝酸根、溴离子、硝酸根均能得到较好的分离检测.结果表明,该阴离子交换整体色谱柱制备方法简便,成本较低,可以方便地与常规色谱系统进行联用,具有一定分析实用价值和较大的开发前景.     

乙烯基酯树脂整体柱用于溶菌酶的分离

以甲基丙烯酸间苯二酚二缩甘油酯树脂兼作单体和交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,十六醇为致孔剂,在不锈钢柱管中制成聚合物整体柱,通过电镜分析考察了该聚合物的微观孔结构.以此聚合物整体柱为基质,将该柱修饰为具有二醇基的聚合物整体柱,考察了此修饰柱的通透性,并将其作为高效液相色谱固定相考察了该柱对溶菌酶(Lys)的最大吸附量、α-淀粉酶(α-Amy)和溶菌酶在该柱上的分离,并对蛋清中的溶菌酶进行了分离.结果表明,分离效果良好,为蛋白分离提供了一种简单、快捷、有效的方法.     

新型亲水整体柱的制备及其在毛细管液相色谱和加压电色谱中的应用

以N,N-二甲基-N-甲基丙烯酰胺基丙基-N,N-二甲基-N-丙烷磺酸内盐(SPP)为单体,季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂及两类不同的致孔剂(乙醇/乙二醇和甲醇/1,4-丁二醇)制备了两种新型亲水性整体柱。为了获得理想的柱效、电渗流速度和渗透性,对制备整体柱的各反应物配比进行了研究和优化。比较了两种整体柱在渗透性和分离样品方面的性能,结果表明,以乙醇/乙二醇为致孔剂制备的整体柱在柱效、分离度方面优于以甲醇/1,4-丁二醇为致孔剂制备的整体柱,但在渗透性方面不及后者。探讨了流动相中盐浓度对核苷类样品保留的影响,发现当甲酸铵浓度从10 mmol/L增加到70 mmol/L时,核苷样品的保留因子呈现先增加后减小的状态。将制备的整体柱用于毛细管液相色谱和加压电色谱分别分离胺类、酚类和核苷类样品,获得了理想的分离效果。在分离酚类和核苷类混合样品时,发现加压毛细管电色谱在分离度和分离速度上均优于毛细管液相色谱。     

阴离子交换整体柱对蛋白质的分离与纯化

分别用乙二胺、二乙胺、三乙胺将自制的以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂的整体柱修饰为弱、强阴离子交换整体柱。考察了该整体柱的性能,选择出分离蛋白质(牛血清白蛋白、溶菌酶和谷胱甘肽)的最佳实验条件,并在最佳分离条件下考察了这些蛋白质在整体柱上的色谱行为和该整体柱对纤维素降解酶的分离纯化情况。实验结果表明,该整体柱性能良好,可以实现对纤维素降解酶的快速分离与纯化。同时,实验也证明采用梯度洗脱可以实现对某些蛋白质的分离纯化。     

牛血清白蛋白修饰毛细管整体柱的制备及组氨酸对映体分离

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体, 乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂, 环己醇和正十二醇混合溶液为致孔剂, 在最佳聚合条件下, 以偶氮二异丁腈为引发剂, 制备了毛细管整体柱基质, 并且研究了单体、交联剂及致孔剂对整体柱基质孔结构及渗透性的影响; 使用Epoxy方法在基质表面键合BSA, 制得BSA修饰的毛细管整体柱. 将此毛细管整体柱应用于毛细管电色谱中, 成功地分离出了组氨酸对映体, 分离度良好.     

以金纳米溶胶为中间体同时制备阳离子及反相模式整体柱

本文以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,二甲基丙烯酸乙二酯(EDMA)为交联剂,环己醇和十二醇为致孔剂,过氧化苯甲酰(BPO)为引发剂,制备了有机聚合整体材料基质,利用金纳米粒子(AuNPs)易与巯基基团(-SH)共价键合的特点和有机聚合整体柱的优点,以半胱胺和金纳米溶胶(AuNPs)为中间体,依次采用2-巯乙基磺酸钠和正十八烷硫醇修饰该柱,制备了表面具有阳离子交换和疏水作用两种模式的整体柱,拓宽了有机聚合物整体柱的应用领域。制备的整体柱适用于不同色谱模式下蛋白质或多肽混合物的分离。     

混合模式毛细管聚合物整体柱的制备及应用

混合模式毛细管整体色谱柱由于保留机理多样,具有很好的应用前景。本文以[2-（甲基丙烯酰基氧基）乙基]二甲基-（3-磺酸丙基）氢氧化铵（SPE）为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）为交联剂,偶氮二异丁腈（AIBN）为引发剂,正丙醇/1,4-丁二醇/水三元体系为致孔剂,制备了聚合物基质SPE-co-EDMA毛细管液相色谱整体柱。通过系统优化致孔剂和反应物种类和配比、引发剂的用量、反应时间和反应温度等因素,提高了整体柱的柱效、机械强度、渗透性和重复性。结果表明该毛细管整体柱在10 MPa内具有良好的机械强度,渗透性为2.17×10^-14 m²,而且批次内和批次间峰面积的重现性（RSD）分别为1.0%和4.6%。以极性和非极性的多种化合物评价了该毛细管整体柱的色谱性能,结果表明该柱在高有机相中具有亲水相互作用机理,在低有机相中具有反相作用机理,显示出混合模式分离特性。     

二维反相液相色谱制备五味子中的木脂素

应用自主研发的具有分离-富集模式的制备色谱工厂,建立了分离制备五味子木脂素有效部位及其单体化合物的方法。该方法首先以C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）为色谱柱,水和甲醇为流动相,分离度和保留时间为考察指标,采集4个不同梯度的色谱信息,通过XTool色谱专家系统软件模拟,确定五味子木脂素第一、二维色谱条件;然后采用线性放大的方法,以C₁₈（250 mm×30 mm,10 μm）为第一、二维分离柱,C₁₈（80 mm×30 mm,10 μm）为富集柱,水为富集稀释液,对五味子木脂素进行二维色谱分离纯化;最后第一维分离得到9个可重复组分,第二维分离得到20个高纯度化合物,其中有6个单体化合物。结果表明该法重现性良好,可以实现五味子木脂素的系统性分离,对五味子化学成分的研究具有重要意义。     

Simple 2D-HPLC using a monolithic silica column for peptide separation

Separation of peptides by fast and simple two-dimensional (2D)-HPLC was studied using a monolithic silica column as a second-dimension (2nd-D) column. Every fraction from the first column, 5 cm long (2.1 mm ID) packed with polymer-based cation exchange beads, was subjected to separation in the 2nd-D using an octadecylsilylated (C18) monolithic sillica column (4.6 mm ID, 2.5 cm). A capillary-type monolithic silica C18column (0.1 mm ID, 10 cm) was also employed as a 2nd-D column with split flow/injection. Effluentof the first dimension (1st-D) was directly loaded into an injector loop of 2nd-D HPLC. UV and MS detection were successfully carried out at high linear velocity of mobile phase at 2nd-D using flow splitting for the 4.6 mm ID 2nd-D column, or with directconnection of the capillary column to the MS interface. Two-minute fractionation inthe 1st-D, 118-second loading, and 2-second injection by the 2nd-D injector, allowed one minute for gradient separation in the 2nd-D, resulting in a maximum peak capacity of about 700 within 40 min. The use of a capillary column in solvent consumption and better MS detectability compared to a larger-sized column. This kind of fast and simple 2D-HPLC utilizing monolithic silica columns will be useful for the separation of complex mixtures in a short time.     

Preparation of weak cation exchange packings based on monodisperse poly(chloromethylstyrene‐co‐divinylbenzene) particles and its chromatographic properties

Monodisperse poly (chloromethylstyrene‐co‐divinylbenzene) particles were firstly prepared by a two‐step swelling method. Based on this media, one kind of weak cation ion exchange packings was prepared. It was demonstrated that the prepared packings have comparative advantages for biopolymer separation with high column efficiency, low interstitial volume and low column backpressure, and have good resolution to proteins. The effects of salt concentration and pH of mobile phase on protein retentions were investigated. The properties of the weak cation ion exchange packings were evaluated by the unified retention model for mixed‐mode interaction mechanism in ion exchange and hydrophobic interaction chromatography.     

Determination of DL-tetrahydropalmatine in Corydalis yanhusuo by L-tetrahydropalmatine imprinted monolithic column coupling with reversed-phase high performance liquid chromatography

A method for direct determination of DL-tetrahydropalmatine (DL-THP) in Corydalis yanhusuo, a traditional Chinese herb, by L-THP imprinted monolithic precolumn on-line/off-line coupling with reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) was developed. The L-THP imprinted monolithic column has been prepared by in situ polymerization using methacrylic acid (MAA) and ethylene dimethacrylate (EDMA) as functional monomer and cross-linker, respectively. With the optimization of chromatographic conditions, such as mobile phase composition, flow rate, column temperature and sample loading, for the separation of enantiomer, DL-THP was base-line separated on the MIP. The imprinted monolithic column was used as a precolumn for fractionation of the C. yanhusuo extract. Both the non-retained and retained fractions were separated by RP-HPLC. Meanwhile, the D-THP and L-THP can be detected in the non-retained and retained fractions, respectively. Additionally, direct determination of L-THP using molecularly imprinted monolith on-line coupling with a reversed-phase column was acquired.     

N-苯甲氧羰基-L-色氨酸为模板的单分散分子印迹聚合物微粒的制备

采用两步溶胀与悬浮聚合联用方法,以2-乙烯基吡啶(2-VP)为功能单体,二乙二醇二丙烯酸酯(DEGDA)为交联剂,成功制备出以N-苯甲氧羰基-L-色氨酸(N-Cbz-L-Trp)为模板的单分散分子印迹聚合物,并用扫描电镜、氮气吸附、拉曼光谱、高效液相色谱、热失重分析等测试手段进行表征.结果表明,分子印迹聚合物的平均粒径为6.3μm,多分散系数为1.03.拉曼光谱显示聚合物反应完全,模板分子洗脱充分.高效液相色谱表征显示,分子印迹聚合物在很短的色谱柱中即可实现对印迹分子对映异构体的基线分离.     

对一种分离测定氨基酸方法的改进

 对Waters公司采用 6 氨基喹啉 N 羟基琥珀酰亚胺基 氨基甲酸酯 (AccQ Tag)柱前衍生化测定氨基酸的方法进行了改进。将流动相流速由原来的 1 0mL/min改变为 2 0mL/min ,用AccQ Tag专用柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm)在 17 5min(原为 35min) (运行周期为 2 2 5min ,原为 45min)内快速分离测定了 18种氨基酸和牛磺酸。用Nova PakC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm) ,Nova PakC18柱 (4 6mmi.d .× 15 0mm ,4μm) ,SymmetryC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm)和WatersXterraRP 18柱等反相C18柱代替AccQ Tag专用柱 ,均可对氨基酸进行快速分离。     

分子印迹整体柱富集-高效液相色谱法测定植物中的痕量细胞分裂素

采用分子印迹整体柱富集-高效液相色谱法选择性分离分析了植物样品中痕量细胞分裂素的含量。结果表明,以激动素为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,甲苯与十二醇为致孔剂,可在不锈钢柱管中原位聚合制备激动素分子印迹整体柱;与非分子印迹整体柱对比,该分子印迹整体柱能选择性富集4种细胞分裂素,具有较好的重复性和高的萃取效率;在优化的实验条件下,激动素(K)、激动素核苷(KR)、反式-玉米素(tZ)和meta-topolin(mT)的平均加标回收率分别为91.9%、80.0%、87.5%和50.2%,相对标准偏差均小于11.8%。本方法已成功地用于不同植物样品中4种细胞分裂素的分离和分析。     

Uniformly sized molecularly imprinted polymer for (S)-naproxen retention and molecular recognition properties in aqueous mobile phase

A uniformly sized molecularly imprinted polymer (MIP) for (S)-naproxen has been prepared by a multi-step swelling and polymerization method using 4-vinylpyridine (4-VPY) and ethylene glycol dimethacrylate (EDMA) as a functional monomer and cross-linker, respectively. We optimized the preparation method of the MIP by changing the molar amounts of the template molecule and functional monomer. Further, we examined the effects of organic modifier type, column temperature and flow-rate on the retentivity and enantioselectivity for naproxen using a mixture of phosphate buffer and organic modifier (acetonitrile, ethanol and 2-propanol) as an eluent. When the amounts of (S)-naproxen, 4-VPY and EDMA used were 4, 6 and 25 mmol, respectively, the enantioselectivity and resolution for naproxen were good despite the shorter retention. When acetonitrile was used as an organic modifier, the highest column efficiency was obtained for the separation of naproxen enantiomers. With regard to the effects of column temperature and flow-rate, the column performance was improved by elevating a column temperature and decreasing a flow-rate.     

离线二维液相色谱法分离巴天酸模根的化学成分

建立了离线二维反相/反相液相色谱分离体系（2D-RPLC/RPLC）,对巴天酸模中的化学成分进行分离。通过比较巴天酸模乙酸乙酯萃取液在环氧四氮唑和Unitary C18色谱柱上的高效液相色谱图,确定以环氧四氮唑色谱柱为第一维色谱柱,以Unitary C18色谱柱为第二维色谱柱。流动相均采用0.1%（v/v）甲酸水溶液和甲醇,梯度洗脱。经一维色谱分离后,共收集18个流分,采用二维色谱对这18个流分进行了进一步的分离分析。实验结果表明,该二维色谱分离方法高效、可行,为巴天酸模药材的微量组分的分离以及活性化合物的筛选提供了分离方法。     

Miniaturization of capillary electrochromatography using an ultrashort capillary column

The instrumentation for miniaturization of capillary electrochromatography was devised and an injection method for this apparatus was proposed. By using an ultra short capillary column (15 mm packed length, 36 mm total length, 75 microm inner diameter, packed with cation exchange supports), the separation of five biochemical compounds was performed within 1 min. The high separation efficiency of 9780 plates was achieved by using an ultrashort capillary column. The miniaturized instrumentation for capillary electrochromatography might be utilized as one of the possible methods in microfabricated analysis or in an alternative approach to it.